裴文俊，季麒麟，葉熊龍，張騰宇，楊慶春，姚希虹，王 秀

(蚌埠醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院藥劑教研室，蚌埠 233000；*通訊作者,E-mail:94492684@qq.com)

3-溴丙酮酸(3-bromopyruvate，3-BP)是一種小分子烷化劑，因與體內(nèi)丙酮酸、乳酸結(jié)構(gòu)相似，能競(jìng)爭(zhēng)性地與乳酸、丙酮酸蛋白結(jié)合被轉(zhuǎn)運(yùn)入腫瘤細(xì)胞，從而抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)ATP的生成，切斷腫瘤細(xì)胞的能量供應(yīng)，通過“餓死”腫瘤細(xì)胞達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的[1]。同時(shí)由于3-溴丙酮酸具有嚴(yán)重的細(xì)胞毒性和不明確的毒副作用，在國內(nèi)未見臨床廣泛使用[2]。因此開發(fā)低毒、高效、具有靶向性的3-溴丙酮酸制劑成為臨床用藥的迫切需要[3,4]。

磷脂復(fù)合物(phospholipid complex，PC)系指在非質(zhì)子傳遞溶劑中，藥物與磷脂以一定配比關(guān)系結(jié)合而形成的復(fù)合物，可以改善藥物的脂溶性等理化性質(zhì)。3-溴丙酮酸是水溶性藥物，脂溶性差，將3-溴丙酮酸制備為3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物(3-bromopyruvate phospholipid complex，3-BP-PC)后，顯著改善其脂溶性，在制備自乳化釋藥系統(tǒng)(self-emulsifying drug delivery system，SEDDS)時(shí)能具有較好的載藥量和包封率[5]。

SEDDS是由油相、乳化劑和助乳化劑組成的固體或液體制劑，其基本特征是可在胃腸道內(nèi)或環(huán)境溫度適宜(通常指體溫37 ℃)及溫和攪拌的條件下，自發(fā)乳化形成粒徑在100～500 nm的納米乳[6,7]。SEDDS具有傳統(tǒng)乳劑的優(yōu)點(diǎn)，乳滴分散度大，能有效增加難溶性藥物的溶解度，在血管外給藥途徑中，形成乳滴的油相與黏膜有極好的相容性，有利于藥物在黏膜內(nèi)外的轉(zhuǎn)運(yùn)，可明顯提高生物利用度；在血管內(nèi)給藥途徑中，可以產(chǎn)生良好的靶向作用，減少給藥次數(shù)和給藥劑量，增加藥物在靶器官或靶組織的富集，減少在正常組織和器官的分布，大幅減少毒副作用，是一種優(yōu)良的給藥系統(tǒng)。SEDDS臨用前分散的特點(diǎn)，克服了乳劑貯存穩(wěn)定性差的缺點(diǎn)；在制備時(shí)不需要特殊的設(shè)備，操作簡(jiǎn)單，并易于保存，具備低黏度、靶向特點(diǎn)[8]。

基于SEDDS制備需要藥物具備較好的脂溶性，藥物才能有效地包封于油相液滴中。本研究擬采用復(fù)合法制備3-BP-PC,正交實(shí)驗(yàn)篩選3-BP-PC制備方法。后將3-BP-PC通過進(jìn)一步自乳化形成3-BP-PC-SEDDS,觀察制劑對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長(zhǎng)的影響，以期為水溶性藥物3-溴丙酮酸的進(jìn)一步應(yīng)用提供方向。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料

FA224電子天平(上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；DF-101S集熱式恒溫加熱攪拌器(金壇市金南儀器制造有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；傅里葉變換紅外光譜儀(天津港東科技發(fā)展股份有限公司)；紫外分光光度計(jì)(日本株式會(huì)社日立高新技術(shù)科學(xué))；STA 449-F5(德國耐馳公司)；高效液相色譜儀LC-16(島津儀器(蘇州)有限公司)。

3-溴丙酮酸(麥克林公司)；大豆卵磷脂(麥克林公司)；四噻唑藍(lán)溴化物(MTT)(美國Amresco公司)；無水乙醇、三氯甲烷為分析純；甲醇、乙醇為色譜純；MCF-7細(xì)胞(蚌埠醫(yī)學(xué)院科研中心供)。

1.2 方法

1.2.1 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物制備及處方篩選

1.2.1.1 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物制備及復(fù)合率測(cè)定 磷脂復(fù)合物的制備工藝研究：采用溶劑揮發(fā)法制備3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物。取處方量的3-溴丙酮酸及大豆磷脂置于圓底燒瓶中，加入無水乙醇后，磁力攪拌條件下水浴加熱，緩慢攪拌至設(shè)定時(shí)間。減壓旋蒸除去有機(jī)溶劑后即得3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物粗品。3-溴丙酮酸極微溶于三氯甲烷，而磷脂復(fù)合物在三氯甲烷中溶解度很高。加入三氯甲烷溶解3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物粗品，過濾除去未參加反應(yīng)的游離3-溴丙酮酸，再次減壓旋蒸除去三氯甲烷，置于真空干燥箱內(nèi)過夜[9]。將磷脂復(fù)合物密封于封口袋內(nèi)，備用。

復(fù)合率計(jì)算公式如下：

式中：M為3-溴丙酮酸的初試投入質(zhì)量，單位是g；m為沉淀干燥后質(zhì)量，單位是g。

1.2.1.2 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物正交實(shí)驗(yàn)處方篩選 以藥物(3-溴丙酮酸)與磷脂的復(fù)合率為考察指標(biāo)，研究復(fù)合溶劑、復(fù)合物濃度、3-溴丙酮酸與磷脂的投料比(g/g)和復(fù)合溫度等因素對(duì)復(fù)合率的影響。運(yùn)用正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)影響磷脂復(fù)合物復(fù)合率顯著的3個(gè)因素，即復(fù)合物濃度、3-溴丙酮酸與磷脂的投料比(g/g)、復(fù)合溫度[10,11]等進(jìn)行處方篩選。

1.2.2 3-BP-PC的驗(yàn)證及表征

1.2.2.1 差示掃描量熱(DSC)分析 以鋁坩堝為參比，溫度掃描范圍為25～800 ℃，升溫速度5 ℃/min，N2既為保護(hù)氣又為吹掃氣，分別取3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者物理混合物及3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物進(jìn)行差示掃描量熱分析[12]。

1.2.2.2 紫外光譜分析(UV) 分別取3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者物理混合物及3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物適量，用甲醇溶解，于波長(zhǎng)200～400 nm進(jìn)行掃描[13]，比較各組紫外吸收的差異。

1.2.2.3 傅里葉變換紅外光譜(FTIR)分析 分別取3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者混合物及3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物適量，與溴化鉀混合均勻、壓片，于400～4 000 cm-1范圍進(jìn)行掃描。

1.2.2.4 透射電鏡(TEM)分析 取3-BP-PC 200 mg于EP管中，逐滴加入30 ℃純水，溫和攪拌自乳化，得到乳白色帶淡藍(lán)色乳光。將該乳液滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置10 min，用濾紙片吸干水分，滴加3%磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染5 min，自然揮干，透射電鏡觀察[14]。

1.2.2.5 馬爾文粒度電位儀分析 取適量3-BP-PC加甲醇溶解稀釋形成溶液后，使用馬爾文粒度電位儀測(cè)定乳劑的粒徑及Zeta電位。

1.2.3 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳制備及表征

1.2.3.1 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳制備 自乳化納米乳制備工藝根據(jù)Liu等[15]關(guān)于自乳化納米乳研究的結(jié)果，實(shí)驗(yàn)最終選擇以肉豆蔻酸異丙酯 ∶Tween-80 ∶無水乙醇為6 ∶3 ∶1混合作為溶劑，油相(3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物)與混合乳化劑質(zhì)量比為2 ∶8制備3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳。

1.2.3.2 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳表征 ①透射電鏡(TEM)分析：取3-溴丙酮酸納米乳200 mg于EP管中，逐滴加入30 ℃純水，溫和攪拌自乳化，得到乳白色帶淡藍(lán)色乳光。將該乳液滴在覆有支持膜的銅網(wǎng)上，靜置10 min，用濾紙片吸干水分，滴加3%磷鎢酸溶液于銅網(wǎng)上負(fù)染5 min，自然揮干，透射電鏡觀察。②馬爾文粒度電位儀分析：取適量3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自微乳加水稀釋成溶液后，使用馬爾文粒度電位儀測(cè)定乳劑的粒徑及Zeta電位。

1.2.4 3-溴丙酮酸納米乳抑制乳腺癌作用研究

1.2.4.1 MTT法測(cè)定3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用 使用MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率，按照其說明書進(jìn)行使用。體外培養(yǎng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7細(xì)胞使用胰蛋白酶進(jìn)行消化，以5×103cells/孔的密度接種于96孔板中，每組設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔。在37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，觀察細(xì)胞貼壁良好，密度適宜。對(duì)照組使用新鮮培養(yǎng)液，而實(shí)驗(yàn)組使用含藥培養(yǎng)液處理，實(shí)驗(yàn)組濃度設(shè)置如下:3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物、3-溴丙酮酸自微乳各處理24，48 h，每組藥物設(shè)5個(gè)不同濃度，使3-溴丙酮酸終濃度分別為10，20，40，80，160 μmol/L，然后將其放回37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱孵育。24 h后每孔加入20 μl MTT溶液，于培養(yǎng)箱中孵育4 h，使用多功能酶標(biāo)儀于490 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)其吸光度A值，記錄數(shù)據(jù)，使用空白孔調(diào)零，以對(duì)照組為100%，計(jì)算各組細(xì)胞存活率(細(xì)胞存活率=實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值×100%)。

1.2.4.2 Calcein AM/PI染色測(cè)定3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制作用 取指數(shù)生長(zhǎng)期乳腺癌MCF-7細(xì)胞，以3.0×105個(gè)/孔細(xì)胞的密度接種于6孔板，對(duì)照組使用新鮮培養(yǎng)液，而實(shí)驗(yàn)組使用含藥培養(yǎng)液處理，實(shí)驗(yàn)組設(shè)置如下:3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物、3-溴丙酮酸自微乳各處理24 h，每組藥物給藥濃度為40 μmol/L。在37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h后，按照試劑盒操作步驟，采用鈣黃綠素乙酰氧基甲酯(CAM)和碘化丙啶(PI)法鑒定活細(xì)胞(綠色熒光)和死細(xì)胞(紅色熒光)，加入足夠量的Calcein AM/PI染色工作液，室溫避光孵育20 min后，熒光顯微鏡下觀察紅綠熒光的強(qiáng)度從而比較3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物和3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞的抑制增殖能力。

1.2.4.3 集落克隆試驗(yàn)測(cè)定3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞抑制作用 體外培養(yǎng)乳腺癌MCF-7細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MCF-7細(xì)胞使用胰蛋白酶進(jìn)行消化，使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法進(jìn)行計(jì)數(shù)，隨后稀釋成所需濃度的細(xì)胞懸液，以5×103cells/孔的密度接種于6孔板中，待其貼壁后對(duì)照組使用新鮮培養(yǎng)液，而實(shí)驗(yàn)組使用含藥培養(yǎng)液處理，實(shí)驗(yàn)組設(shè)置如下:3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物、3-溴丙酮酸自微乳，藥物濃度為5 μmol/L處理，放置于培養(yǎng)箱中，10 d后使用顯微鏡觀察其集落形成情況。棄去培養(yǎng)液后，使用PBS沖洗一遍。隨后使用4%多聚甲醛進(jìn)行固定0.5 h，棄去多聚甲醛，使用PBS沖洗一遍后，加入結(jié)晶紫染液染色0.5 h，棄去結(jié)晶紫，倒扣在紙上待其干后進(jìn)行拍照，比較不同處理組集落形成能力差別。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 3-BP-PC正交實(shí)驗(yàn)處方篩選結(jié)果

以三因素三水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化磷脂復(fù)合物的制備工藝，通過對(duì)復(fù)合物濃度、3-溴丙酮酸與磷脂的投料比(g/g)、復(fù)合溫度3個(gè)因素，及各因素對(duì)應(yīng)水平進(jìn)行考察，并對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行擬合分析。正交實(shí)驗(yàn)各因素水平見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

正交實(shí)驗(yàn)顯示，該實(shí)驗(yàn)最佳工藝為A3B2C2(見表2)，即選用3-溴丙酮酸與大豆磷脂藥脂比(g/g)為1 ∶3，溫度40 ℃，藥物濃度10 mg/ml，同時(shí)復(fù)合時(shí)間為2.5 h(n=3)。

表2 3-BP-PC制備的正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 (n=3)

2.2 3-BP-PC的驗(yàn)證及表征

2.2.1 3-BP-PC的DSC分析 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者物理混合物和3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物的DSC圖譜見圖1，在4 min時(shí)，磷脂復(fù)合物有與3-溴丙酮酸相似的吸放熱特征，表明磷脂復(fù)合物中有3-溴丙酮酸存在。此外，磷脂復(fù)合物的DSC圖譜與大豆磷脂的DSC圖譜相比也具有相似的吸放熱特征。說明磷脂復(fù)合物中也確實(shí)有大豆磷脂存在。

圖1 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物及其物理混合物的DSC圖譜Figure 1 DSC characterization of 3-BP, PC, 3-bromopyruvate phospholipid complex and physical mixtures

2.2.2 3-BP-PC的UV表征 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者物理混合物和3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物紫外圖譜見圖2，3-溴丙酮酸和磷脂復(fù)合物均在210 nm附近有吸收峰，表明兩種物質(zhì)的發(fā)色團(tuán)，結(jié)構(gòu)沒有發(fā)生變化，沒有產(chǎn)生新的物質(zhì)[16]。

圖2 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物及其物理混合物的紫外圖譜Figure 2 UV characterization of 3-BP, PC, 3-bromopyruvate phospholipid complex and physical mixtures

2.2.3 3-BP-PC的FT-IR表征 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、二者物理混合物和3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物的紅外圖譜見圖3，結(jié)果可知，大豆磷脂的C=O吸收峰為1 727.9 cm-1，P=O吸收峰為1 452.14 cm-1；物理混合物的C=O吸收峰在1 731.36 cm-1，C-H的吸收峰在2 850.2 cm-1,2 910.0 cm-1處；磷脂復(fù)合物的OH吸收峰出現(xiàn)在3 479.78 cm-1處，而C=O吸收峰在1 739.66 cm-1處。由圖可知，物理混合物的紅外譜圖是3-溴丙酮酸和大豆磷脂紅外譜圖的疊加，其特征峰相較于大豆磷脂和3-BP分子沒有明顯變化，二者在物理混合過程中沒有發(fā)生物理化學(xué)反應(yīng)[17]。

圖3 3-溴丙酮酸、大豆磷脂、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物及其物理混合物的紅外圖譜Figure 3 FT-IR characterization of 3-BP, PC, 3-bromopyruvate phospholipid complex and physical mixtures

2.2.4 3-BP-PC的透射電鏡(TEM)表征 TEM分析結(jié)果顯示，制得的磷脂復(fù)合物表面光滑，呈球型結(jié)構(gòu)(見圖4)。

圖4 透射電鏡下觀察3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物的表觀結(jié)構(gòu) (×50 000 zoom-1，120.0 kV)Figure 4 TEM characterization of 3-bromopyruvate phospholipid complex (×50 000 zoom-1，120.0 kV)

2.2.5 3-BP-PC的粒徑表征 取適量3-BP-PC-SEDDS加水稀釋形成乳劑后，使用馬爾文粒度儀測(cè)定乳劑的粒徑及聚合物分散性指數(shù)(polymer dispersity index，PDI),結(jié)果見圖5，3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物平均粒徑為(355.00±19.50)nm(n=3)，PDI值為0.27±0.08(n=3)。

2.3 3-溴丙酮酸納米乳表征

2.3.1 TEM分析 結(jié)果表明將磷脂復(fù)合物經(jīng)過自乳化處理后，制得的3-溴丙酮酸納米乳呈近球型(見圖6)，且直徑大小符合制備要求。

2.3.2 馬爾文粒度電位儀分析 取適量3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物納米乳加水稀釋成溶液后，使用馬爾文粒度電位儀測(cè)定乳劑的粒徑及PDI值，結(jié)果見圖7，3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳粒徑為(97.35±3.44)nm(n=3)，PDI值為0.22±0.02(n=3)。

圖7 3-溴丙酮酸納米乳的粒徑圖Figure 7 Particle size characterization of 3-bromopyruvate nano-emulsion

2.4 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化納米乳對(duì)乳腺癌細(xì)胞MCF-7增殖的抑制作用

2.4.1 MTT法測(cè)定細(xì)胞存活 MTT結(jié)果顯示，不同濃度3-溴丙酮酸納米乳均可抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖，并呈現(xiàn)濃度依賴性(見圖8)，10，20，40，80，160 μmol/L的3-溴丙酮酸納米乳濃度組的細(xì)胞存活率分別為(81.83±2.67)%，(58.24±1.95)%，(44.30±4.62)%，(20.10±1.62)%，(12.53±1.16)%。結(jié)果表明，與3-溴丙酮酸相比，3-BP-PC-SEDDS在10，40，160 μmol/L時(shí)，均呈現(xiàn)出對(duì)乳腺癌細(xì)胞良好的抑制作用(P<0.05)。

2.4.2 Calcein AM/PI染色法測(cè)定細(xì)胞存活 與對(duì)照組相比，3-溴丙酮酸、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物和3-溴丙酮酸納米乳紅色區(qū)域均有所增加。而且，與3-溴丙酮酸單藥和3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物相比，3-溴丙酮酸納米乳組死細(xì)胞數(shù)量增加最為明顯(見圖9)。

與3-BP相比,*P<0.05，**P<0.01圖8 不同濃度的3-BP、3-BP-PC和3-BP-PC-SEDDS對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的抑制作用Figure 8 Inhibitory effect of 3-BP, 3-BP-PC, 3-BP-PC-SEDDS on MCF-7 cell proliferation at different concentrations

活細(xì)胞為綠色，死細(xì)胞為紅色圖9 Calcein AM/PI染色檢測(cè)3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞的影響Figure 9 Effects of 3-bromopyruvate nano-emulsion on MCF-7 cells by Calcein AM /PI staining

2.4.3 集落克隆形成實(shí)驗(yàn) 集落克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物和3-溴丙酮酸納米乳均能抑制MCF-7細(xì)胞集落克隆形成；與3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物相比，3-溴丙酮酸納米乳抑制效果最好，克隆數(shù)量最少(見圖10)。

A.對(duì)照組；B. 3-溴丙酮酸；C. 3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物；D. 3-溴丙酮酸納米乳圖10 3-溴丙酮酸納米乳對(duì)MCF-7細(xì)胞集落克隆形成的影響Figure 10 Inhibitory effect of 3-bromopyruvate nano-emulsion on colony formation of MCF-7 cells

3 討論

乳腺癌已經(jīng)成為中國女性惡性腫瘤發(fā)生概率最高的癌癥，嚴(yán)重威脅著女性的身心健康，發(fā)病率以及死亡率呈逐年上升的趨勢(shì)，并且更趨于年輕化。因此，尋找一種有效治療乳腺癌的治療手段顯得至關(guān)重要。Kim等[18]也在其細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)中指出，3-溴丙酮酸通過抑制腫瘤細(xì)胞的糖代謝途徑、減少ATP的合成，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖，提高癌細(xì)胞的凋亡比例。因此，制備增效低毒的3-BP-PC-SEDDS是應(yīng)對(duì)乳腺癌的有效方法。

由于藥物具有一定脂溶性才能更利于在臨床應(yīng)用，而3-溴丙酮酸水溶性強(qiáng)，生物利用度稍差，限制了其臨床療效的發(fā)揮。通過對(duì)3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物制備的研究，我們通過差示掃描量熱(DSC)分析結(jié)果可知，在4 min時(shí)，磷脂復(fù)合物有與3-溴丙酮酸相似而大的吸收峰，證實(shí)3-溴丙酮酸成功制得磷脂復(fù)合物。而在60 min時(shí)，磷脂復(fù)合物沒有出現(xiàn)3-溴丙酮酸的對(duì)應(yīng)寬大吸收峰，這可能是3-溴丙酮酸與磷脂復(fù)合物在結(jié)合時(shí)發(fā)生了分子間相互作用所致。此外，磷脂復(fù)合物的DSC圖譜與大豆磷脂的DSC圖譜相比都具有相似的吸放熱特征。說明磷脂復(fù)合物中也有大豆磷脂存在。綜上所述，大豆磷脂和3-溴丙酮酸成功制得磷脂復(fù)合物。另外，紫外光譜分析(UV)和傅里葉變換紅外光譜(FT-IR)分析結(jié)果也與上述結(jié)果相一致。之后為了得到高復(fù)合率的復(fù)合物，本研究通過對(duì)溫度、藥脂比(g/g)、藥物濃度進(jìn)行改進(jìn)，將其磷脂復(fù)合物的復(fù)合率提高到92%，提高了在油相中的溶解度，并進(jìn)一步通過自乳化途徑將3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物制備成3-溴丙酮酸納米乳，而且制備得到的3-溴丙酮酸納米乳粒徑為(97.35±3.44)nm(n=3)，PDI值為0.22±0.02(n=3)。即在形成納米乳后，制劑粒徑明顯減小，有利于增加腫瘤細(xì)胞攝取，從而增加藥效。

通過MTT法和PI熒光染色法比較3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物、3-溴丙酮酸納米乳對(duì)細(xì)胞活力影響。3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物相較于3-溴丙酮酸單藥抑制細(xì)胞增殖作用并不明顯，但是最終制劑3-溴丙酮酸納米乳相較于單藥，呈現(xiàn)出明顯的細(xì)胞抑制作用。之后的集落克隆實(shí)驗(yàn)表明與對(duì)照組相比，3-溴丙酮酸單藥、3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物和3-溴丙酮酸納米乳均能抑制MCF-7細(xì)胞集落克隆形成，但是與前兩者相比，3-溴丙酮酸納米乳抑制效果最好，克隆數(shù)量最少。

綜上，研究表明制備的3-溴丙酮酸納米乳不但增加3-溴丙酮酸臨床用藥的療效，而且通過對(duì)3-溴丙酮酸磷脂復(fù)合物自乳化給藥系統(tǒng)的研究，為水溶性藥物磷脂復(fù)合物的臨床給藥提供更多方向。