周慧敏

（大連市檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證技術(shù)服務(wù)中心，遼寧大連116630）

甜味劑是賦予食品甜味的一種食品添加劑[1]。目前甜味劑種類(lèi)很多，按其來(lái)源可分為天然甜味劑和人工合成甜味劑。常見(jiàn)的人工合成甜味劑有阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素、紐甜和三氯蔗糖等。其中阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉、甜蜜素也屬于功能性高倍甜味劑，也叫非營(yíng)養(yǎng)性甜味劑，其甜度均為蔗糖甜度的10倍以上。這幾種甜味劑因甜度高、用量少，常使用于糕點(diǎn)、醬腌菜、飲料、調(diào)味品和配制酒等食品中。《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760－2014）明確規(guī)定了各種人工合成甜味劑在各類(lèi)食品中的使用限量，但人工合成甜味劑在新鮮蔬菜上是不得使用的。人工合成甜味劑在限量范圍內(nèi)使用是安全的，但若長(zhǎng)期過(guò)量使用會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生一定危害[2]。

目前，甜味劑的檢測(cè)方法有液相色譜法[3]、液相色譜-質(zhì)譜[4]、離子色譜法[5]、氣相色譜法[6]和氣相色譜—質(zhì)譜法，但沒(méi)有蔬菜中多種甜味劑的檢測(cè)方法。本文選擇了阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素4種典型的功能性高倍甜味劑，建立檢測(cè)方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇（色譜純），甲酸（色譜純），實(shí)驗(yàn)用水為超純水。阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素均為1 000 μg/mL。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 6495 液相質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent公司）；Centrifuge 5804 R 高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf公司）；Milli-Q 超純水處理系統(tǒng)（德國(guó)Merck公司）；T18 均質(zhì)機(jī)（德國(guó)IKA公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品處理

稱(chēng)取樣品約2 g置于50 mL離心管中，加入20 mL超純水后用均質(zhì)機(jī)勻漿，10 000 r/min 離心5 min，上清液過(guò)0.2 μm微孔水相濾膜后收集于進(jìn)樣瓶中，待上液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)，進(jìn)樣量2 μL。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別移取1 000 μg/mL的阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素100 μL于100 mL容量瓶中，用水定容至刻度，得到1 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用水將混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋得到1 ng/mL、5 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、80 ng/mL和100 ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)溶液直接進(jìn)樣，進(jìn)樣量2 μL。

1.3.3 樣品測(cè)定

（1）色譜條件。色譜柱：Poroshell 120EC-C18；柱溫：室溫；流動(dòng)相：A為超純水（含0.1%甲酸），B為甲醇；液相色譜梯度洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫程序

（2）質(zhì)譜條件。電離方式ESI-，監(jiān)測(cè)模式MRM，離子源溫度200 ℃，離子噴霧電壓3 000 V，各組分定性定量離子對(duì)等參數(shù)，見(jiàn)表2。

表2 各組分的質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)及液相保留時(shí)間

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件優(yōu)化

將1 μg/mL的混合標(biāo)液，利用針泵進(jìn)樣，找到各組分母離子和子離子以確定MRM離子對(duì)，優(yōu)化碰撞能，結(jié)果見(jiàn)表2。確定最優(yōu)質(zhì)譜檢測(cè)條件后進(jìn)一步優(yōu)化液相色譜條件，色譜柱：Poroshell 120EC-C18；柱溫：室溫；流動(dòng)相：A為超純水（含0.1%甲酸），B為甲醇；流速：0.3 mL/min；液相色譜梯度洗脫程序見(jiàn)表1。儀器條件優(yōu)化后目標(biāo)化合物離子色譜圖見(jiàn)圖1，各組分達(dá)到完全分離，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)條件。

圖1 目標(biāo)化合物總離子色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及定量限

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

按1.3.2的方法配制標(biāo)準(zhǔn)序列濃度，以1.3.3的儀器條件進(jìn)樣。在1～100 ng/mL選定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，用各組分的峰面積對(duì)質(zhì)量濃度作圖，得到線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)和線(xiàn)性方程，將40 ng/mL濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣6次的峰面積計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 4種甜味劑保留時(shí)間、線(xiàn)性范圍、相關(guān)系數(shù)、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.2.2 方法定量限

選一空白樣品，按1.3.1實(shí)驗(yàn)步驟做加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，添加濃度從0.1 mg/kg逐漸稀釋?zhuān)?dāng)添加水平至0.01 mg/kg時(shí)，回收率均值為70.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差6.2%，滿(mǎn)足實(shí)驗(yàn)要求，再降低添加濃度得到回收率均值，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不符合實(shí)驗(yàn)要求，確定0.01 mg/kg為定量限?！冻隹谑称分辛N合成甜味劑的檢測(cè)方法》（SN/T 3538—2013）中采用液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法進(jìn)行檢測(cè)，甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉和阿斯巴甜的測(cè)定低限均為1.0 mg/kg[7]；《食品中環(huán)己基氨基磺酸鈉的測(cè)定》（GB 5009.97—2016）中的液相色譜—質(zhì)譜/質(zhì)譜法甜蜜素的檢出限最低為0.03 mg/kg，本方法的檢出限均低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)、國(guó)標(biāo)方法檢出限，說(shuō)明本檢測(cè)方法靈敏度較高[8]。

2.3 回收率和精密度

用不含有4種甜味劑的黃瓜做基質(zhì)進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，分別添加0.05 mg/kg、0.20 mg/kg、0.40 mg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每濃度6份平行樣本，按照1.3步驟處理并檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表4，各組成分回收率在加標(biāo)回收率在82.1%～98.2%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%～5.8%。滿(mǎn)足檢測(cè)要求。

表4 4種甜味劑的回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

3 結(jié)論與討論

黃瓜是常見(jiàn)的生食蔬菜，本身甜度較低，為了防止商家為增強(qiáng)黃瓜的甜度采用浸泡等方式違法添加一些人工合成的甜味劑，本文建立了黃瓜中人工合成甜味劑的檢測(cè)方法。人工合成甜味劑種類(lèi)繁多，考慮阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素甜度高、用量少、使用率較高，本方法選擇這4種甜味劑進(jìn)行檢測(cè)。

本方法以超純水作為萃取試劑，通過(guò)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，采用電噴霧負(fù)離子化模式（ESI-）和多反應(yīng)檢測(cè)，外標(biāo)法定量，同時(shí)測(cè)定黃瓜中阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素4種甜味劑。結(jié)果表明，該方法可準(zhǔn)確測(cè)定黃瓜中阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素4種甜味劑，其相關(guān)系數(shù)均大于0.99，定量限均為0.01 mg/kg，加標(biāo)回收率在82.1%～98.2%，從而確認(rèn)本方法可準(zhǔn)確、快捷測(cè)定黃瓜中阿斯巴甜、安賽蜜、糖精鈉和甜蜜素4種甜味劑。