趙淑芳 劉智榮 王偉 洪磊

[摘要]目的研究 AT 豐富結(jié)構(gòu)域1A（ARID1A）在肺癌中的表達(dá)及臨床意義。方法納入2013年1月至2014年12月蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科肺癌組織存檔蠟塊100例，另附癌旁組織100例，并收集患者相關(guān)臨床資料。采用免疫組織化學(xué)染色法（IHC）檢測肺癌和癌旁組織中 ARID1A 蛋白的表達(dá)水平，分析 ARID1A 蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理因素之間的關(guān)系。結(jié)果肺癌組織 ARID1A 蛋白表達(dá)陰性率明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）。ARID1A 陽性與 ARID1A 陰性患者的 TNM 分期、腫瘤大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05）。logistic 回歸分析顯示， TNM 分期高、腫瘤偏大與 ARID1A 蛋白表達(dá)陰性有關(guān)（ OR=2.132、1.556，P <0.05）。結(jié)論 ARID1A 表達(dá)與肺癌的分期、腫瘤大小有密切關(guān)系，肺癌的發(fā)展與 ARID1A 表達(dá)缺失有關(guān)，其作為抑癌基因在肺癌早期起到重要作用。

[關(guān)鍵詞] AT 豐富結(jié)構(gòu)域1A;肺癌;臨床病理;相關(guān)性

[中圖分類號] R446.1? [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A?? [文章編號]2095-0616（2022）09-0028-04

Study on ARID1A expression and its clinical significance in lung cancer

ZHAO? Shufang??? LIU? Zhirong??? WANG? Wei??? HONG? Lei

1. Molecular Diagnostic Center， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China;2. Department of Thoracic Surgery， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China;3. Department of Respiratory Medicine， the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College， Anhui， Bengbu 233000， China

[Abstract] Objective To study the expression of AT-rich interactive domain containing protein 1A （ARID1A） and its clinical significance in lung cancer. Methods A total of 100 cases of lung cancer tissues archived in wax blocks and 100 cases of adjacent tissues collected in the pathology department of the First Affiliated Hospital of Bengbu Medical College from January 2013 to December 2014 were included and the relevant clinical data of these patients were collected. The expression of ARID1A protein in lung cancer tissues and adjacent tissues was detected by immunohistochemical （IHC） staining， and the relationship between ARID1A protein expression and clinicopathological factors for lung cancer was analyzed. Results The negative expression rate of ARID1A protein in lung cancer tissues was significantly higher than that in adjacent tissues， with statistically significant difference （P <0.05）. There were statistically significant differences in tumor-node-metastasis （TNM） stage and tumor size between ARID1A positive and negative patients （P <0.05）. Logistic regression analysis showed that the high TNM stage and large tumor were related to the negative expression of ARID1A protein， with statistically significant differences （ OR=2.132， 1.556， P <0.05）. Conclusion The ARID1A expression is closely related to the stage and tumor size of lung cancer. The development of lung cancer is related to the loss of ARID1A expression . As a tumor suppressor gene， ARID1A plays an important role in the early stage of lung cancer.

[Key words] AT-rich interactive domain containing protein 1A; Lung cancer; Clinical pathology; Relevance

肺癌是目前威脅人類健康的一大殺手，雖然臨床上對肺癌的主要致病基因和分子機(jī)制研究尚不明確，但多數(shù)學(xué)者認(rèn)為肺癌的發(fā)生與人口老齡化、環(huán)境污染、基因遺傳等均有密切關(guān)系[1]。且對肺癌的主要致病基因及其分子機(jī)制的研究在腫瘤的預(yù)防和診治中起關(guān)鍵作用。SWI/SNF 是一種 ATP 依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物，能調(diào)控染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和表達(dá)[2-3]。AT 豐富結(jié)構(gòu)域1A（AT-rich interactive domain containing protein 1A，ARID1A）是該復(fù)合物的一個(gè)重要亞基，其功能失調(diào)會導(dǎo)致染色質(zhì)重塑異常，引起腫瘤等疾病的發(fā)生[4-5]。有學(xué)者認(rèn)為[6]，腫瘤的發(fā)生發(fā)展與 ARID1A 表達(dá)有密切關(guān)系。為進(jìn)一步分析 ARID1A 表達(dá)與肺癌的關(guān)系，本研究對蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院（我院）收治的肺癌患者為研究對象，分析 ARID1A 表達(dá)在肺癌中的意義，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月至2014年12月我院病理科肺癌組織存檔蠟塊100例，另附癌旁組織100例（所有標(biāo)本均為患者術(shù)中選取的病例標(biāo)本），并收集患者相關(guān)臨床資料。其中男62例，女38例;年齡48～79歲，平均（61.4±5.8）歲;肺癌組織標(biāo)本的病理學(xué)分級：低分化組織36例，中、高分化組織64例; TNM 分期：Ⅰ期48例，Ⅱ期29例，Ⅲ期23例;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況：有轉(zhuǎn)移31例，無轉(zhuǎn)移69例;腫瘤個(gè)數(shù)：單個(gè)患者66例，多個(gè)患者34例;腫瘤大?。骸? cm 患者63例，>5 cm 患者37例。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 ARID1A 抗體（美國 Santa? Cruz 公司，批號：180624）;DAB 試劑盒（北京中杉生物工程公司，批號：50881774）;磷酸鹽緩沖液（PBS）（北京中杉生物工程公司，批號：ZY8621-1）; CX31顯微鏡（日本 OLYMPIS）;YS-431L 溫箱（北京福意聯(lián)醫(yī)療設(shè)備有限公司）;MI-H658冰箱（德國西門子）。

1.2.2方法①固定標(biāo)本：將所選取的標(biāo)本切片放入60℃恒溫箱中加熱1 h;②脫蠟、水化：將切片標(biāo)本置于二甲苯 I 中浸泡10 min，再置于二甲苯Ⅱ中浸泡10 min，再依次置于100%、95%、85%、75%四種不同濃度酒精和蒸餾水中各5 min，PBS 緩沖液洗滌3次，5 min/次;③修復(fù)抗原：將切片置于0.01 mol/L 檸檬酸鹽緩沖液中孵育，放于微波爐中大火加熱5 min，小火加熱10 min，冷卻至室溫后使用 PBS 緩沖液洗滌3次，5 min/次;④切片上滴加3%過氧化氫，孵育10 min，再滴加山羊血清，將切片放入37℃的濕盒中20 min，甩去多余液體;⑤將 ARID1A 鼠多克隆抗體按1∶ 100經(jīng) PBS 緩沖液稀釋作為一抗，滴加至切片上，將切片放于4℃冰箱中孵育過夜;⑥復(fù)溫：將切片置于37℃恒溫箱中30 min， PBS 緩沖液洗滌2次，5 min/次;⑦將 Polymer Helper（試劑1）滴于切片上，室溫孵育30 min， PBS 緩沖液洗滌3次，5 min/次;⑧切片上滴加polyperoxidase-IgG（試劑2），室溫孵育30 min，PBS緩沖液洗滌3次，5 min/次;⑨ DAB 顯色：將新鮮稀釋混勻后的 DAB 溶液滴于切片上，在顯微鏡下控制反應(yīng)程度，染色完成后自來水沖洗;⑩蘇木素復(fù)染5 min，自來水沖洗;11脫水：依次置于75%、85%、95%和100%濃度的酒精中各5 min，再分別放入二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅰ中10 min;12中性樹膠封片;13鏡檢。

1.3觀察指標(biāo)

觀察肺癌組織和癌旁組織中 ARID1A 的蛋白表達(dá)水平，分析 ARID1A 蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理因素的關(guān)系。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料用[n （%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用 logistic 回歸方程計(jì)算分析相關(guān)參數(shù)，以 ARID1A 蛋白表達(dá)的陽性、陰性作為因變量，患者臨床病理參數(shù)作為自變量，以 a=0.05作為篩選變量的標(biāo)準(zhǔn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。采用 Kaplan-Meier 生存分析患者生存情況。

2結(jié)果

2.1肺癌組織與癌旁組織中ARID1A的蛋白表達(dá)情況比較

肺癌組織 ARID1A 蛋白表達(dá)陰性率明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05），見表1。

2.2肺癌組織中ARID1A蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

ARID1A 陽性與 ARID1A 陰性患者 TNM 分期、腫瘤大小差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（ P <0.05），見表2。

2.3 ARID1A蛋白表達(dá)與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系分析

TNM 分期高、腫瘤偏大與 ARID1A 蛋白表達(dá)陰性有關(guān)（ P <0.05），見表3。

2.4 ARID1A蛋白表達(dá)與患者生存情況分析

ARID1A 陽性表達(dá)患者的生存狀態(tài)優(yōu)于 ARID1A 陰性表達(dá)患者，見圖1。

2.5 ARID1A在癌旁組織和肺癌組織中的表達(dá)

免疫組化檢測 ARID1A 蛋白在不同組織中的表達(dá)，陽性結(jié)果顯示細(xì)胞核內(nèi)有棕色顆粒染色。ARID1A 在癌旁組織（圖2A）中陽性表達(dá)率為47.5%， ARID1A 在肺癌組織（圖2B）中陽性表達(dá)率為25.0%。

3討論

近年來隨著人們對 ARID1A 基因的研究，越來越多學(xué)者認(rèn)為 ARID1A 基因在惡性腫瘤中存在突變情況，尤其在婦科腫瘤中突變頻率高于其他惡性腫瘤[7]。報(bào)道顯示，ARID1A 基因在卵巢透明細(xì)胞癌中突變頻率高達(dá)43%～57%[8]。認(rèn)為 ARID1A 基因突變會導(dǎo)致相關(guān)蛋白表達(dá)減少，且在臨近的癌旁組織中也存在突變情況[9]。Yamaguchi 等[10]對卵巢透明細(xì)胞癌進(jìn)行研究，結(jié)果顯示， ARID1A 在癌組織和癌旁組織中表達(dá)缺失，而在囊腫上皮細(xì)胞中表達(dá)正常。上述研究均表明 ARID1A 的突變與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系[11]。

本研究對我院肺癌患者進(jìn)行研究，取肺癌組織和癌旁組織蠟塊進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，肺癌組織 ARID1A 蛋白表達(dá)陽性率明顯低于癌旁組織。對肺癌患者臨床病理參數(shù)與 ARID1A 蛋白表達(dá)情況進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，TNM 分期高、腫瘤偏大與 ARID1A 蛋白表達(dá)陽性有關(guān)。結(jié)果表明 ARID1A 在早期肺癌組織中陽性表達(dá)，但在Ⅱ期和Ⅲ期肺癌組織中低表達(dá)，提示 ARID1A 陽性表達(dá)發(fā)生在肺癌早期階段，晚期后表達(dá)缺失。在Kinali等[12]的研究中對肺癌患者的肺癌組織、近端癌旁組織和遠(yuǎn)端肺組織進(jìn)行對比，結(jié)果顯示，遠(yuǎn)端肺組織 ARID1A 的陽性表達(dá)率高于近端癌旁組織，近端癌旁組織高于肺癌組織。提示 ARID1A 的表達(dá)缺失可能是引起肺癌發(fā)生發(fā)展的重要原因。這與本研究結(jié)果相符，表明 ARID1A是一種抑癌基因。在觀察患者生存狀態(tài)時(shí)也發(fā)現(xiàn)， ARID1A 陽性表達(dá)患者的生存狀態(tài)優(yōu)于 ARID1A 陰性表達(dá)患者的生存狀態(tài)，也驗(yàn)證了 ARID1A 是一種抑癌基因。ARID1A 基因編碼 BAF250a 蛋白，腫瘤組織中 BAF250a 蛋白常常缺失。而 ARID1A 是參與了Fas基因介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的重要基因。因此認(rèn)為 ARID1A 表達(dá)調(diào)控 BAF250a 蛋白表達(dá)，在細(xì)胞周期中抑制腫瘤 SWI/SNF 復(fù)合物的活性，從而介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡，ARID1A 表達(dá)缺失可能是導(dǎo)致肺癌進(jìn)展的重要原因[13-15]。其作為抑癌基因在肺癌早期發(fā)揮重要作用。

綜上所述，ARID1A 表達(dá)與肺癌的分期和大小有密切關(guān)系，肺癌的發(fā)展與 ARID1A 表達(dá)缺失有關(guān)，其作為抑癌基因在肺癌早期起到重要作用。本研究雖然驗(yàn)證了 ARID1A 基因在肺癌的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，但對于 ARID1A 基因在肺癌的發(fā)生發(fā)展中如何作用，以及作用的通路、具體機(jī)制等并無深入研究。隨著基因治療的不斷發(fā)展，靶基因成為治療惡性腫瘤的新希望，之后需要進(jìn)一步深入研究 ARID1A 基因在肺癌發(fā)生發(fā)展中的具體作用機(jī)制，從而為肺癌的治療提供參考。

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（收稿日期：2021-09-14）