熊云剛 趙 露 姜 森

貴州航天醫(yī)院病理科 (貴州 遵義 563000)

宮頸癌是婦科常見(jiàn)惡性腫瘤，位居?jì)D科腫瘤第二位，發(fā)病率僅次于乳腺癌，隨著現(xiàn)代女性工作壓力增加和生活方式改變，發(fā)病率逐年上升，且逐漸年輕化[1-2]。宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)是癌前病變，分為三級(jí)，Ⅰ級(jí)屬于可逆性，Ⅱ級(jí)和Ⅲ級(jí)為不可逆，存在癌變可能，故需盡早分辨兩類疾病，及時(shí)給予相應(yīng)診治，以便對(duì)該病變的進(jìn)一步惡化進(jìn)行有效控制[3]。Survivin蛋白是與凋亡控制有關(guān)的蛋白，通常在胚胎中表達(dá)，主要通過(guò)信號(hào)傳導(dǎo)調(diào)節(jié)細(xì)胞周期或抑制細(xì)胞凋亡，通常在惡性腫瘤中具有較高表達(dá)，例如在卵巢癌組織[4]、結(jié)直腸癌[5]中均具有高表達(dá)，但在宮頸病變中表達(dá)情況還有待進(jìn)一步探索；mmp-9是蛋白水解酶家族的一員，在多種腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移、增殖中起到重要調(diào)控作用[6]，但目前關(guān)于其與宮頸癌、宮頸上皮內(nèi)瘤組織關(guān)系研究報(bào)道較少，基于此，本文深入探索了Survivin、mmp-9在CIN、宮頸癌中表達(dá)性以及相關(guān)性。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析在2016年3月至2021年3月收集的31例宮頸癌患者(觀察組)、49例CIN患者(對(duì)照組)臨床資料，觀察組年齡31～58歲，平均年齡(44.46±6.45)歲，體重51～69kg，平均體重(58.71±4.32)kg；對(duì)照組年齡30～59歲，平均年齡(44.51±6.33)歲，體重50～70kg，平均體重(58.63±4.41)kg。兩組比較年齡、體重等一般資料無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異性(P＞0.05)。而對(duì)照組CIN患者中，Ⅰ級(jí)11例，Ⅱ級(jí)20例，Ⅲ級(jí)18例；觀察組：臨床分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期10例，Ⅲ期11例；病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)9例，Ⅱ級(jí)13例，Ⅲ級(jí)9例；間質(zhì)浸潤(rùn)：深肌層19例，淺肌層12例；組織分型：腺癌5例，鱗癌26例。納入標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前未接受化療、放療；臨床資料齊全；近6個(gè)月內(nèi)無(wú)非甾體消炎藥應(yīng)用史。

1.2 研究方法免疫組化法：標(biāo)本經(jīng)固定、脫水、浸蠟、包埋，切成3-4μm的切片，經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，采用鏈霉菌抗生素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法(S-P法)，3%過(guò)氧化氫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，高溫高壓抗原修復(fù)，一抗4℃孵育過(guò)夜，滴加生物素標(biāo)記的二抗37℃孵育30min，磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗，二氨基聯(lián)苯胺法(DAB)顯色，蘇木素復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。

1.3 染色結(jié)果判斷由兩位經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲閱片，Survivin陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核呈棕黃色顆粒；mmp-9陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)棕黃色顆粒，采用半定量結(jié)果判斷，分別對(duì)鏡下的陽(yáng)性細(xì)胞百分比和染色強(qiáng)度給予評(píng)分。(1)陽(yáng)性著色細(xì)胞數(shù)：每個(gè)切片觀察5個(gè)高倍視野(×200)，計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分比，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%，為0分；5%～25%，為1分；26%～50%，為2分；51%～75%，為3分；＞75%，為4分。(2)陽(yáng)性細(xì)胞著色強(qiáng)度：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。(3)兩者計(jì)分相乘即為染色積分，用染色積分反映蛋白的相對(duì)表達(dá)量。0分為陰性，1～4分為弱陽(yáng)性，5～8分為陽(yáng)性，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理，相關(guān)性采用Pearsom或Spearman法分析，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，用(%)表示，計(jì)量資料以(χ-±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，事后兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)0.05。

2 結(jié) 果

2.1 比較兩組陽(yáng)性率觀察組Survivin、mmp-9陽(yáng)性率高于對(duì)照組(P＜0.05)，CIN分級(jí)中，Ⅲ級(jí)mmp-9、Survivin陽(yáng)性率高于CINⅠ級(jí)(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 比較不同病理特征宮頸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)情況不同臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況宮頸癌患者比較Survivin、mmp-9陽(yáng)性率存在差異(P＜0.05)，不同間質(zhì)浸潤(rùn)、組織分型的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P＞0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 分析不同類型mmp-9、Survivin染色積分宮頸癌mmp-9、Survivin染色積分高于對(duì)照組(P＜0.05)，CIN Ⅲ級(jí)mmp-9、Survivin染色積分高于CINⅠ級(jí)(P＜0.05)，見(jiàn)表3。

2.4 相關(guān)性分析經(jīng)Spearman法分析，不同病變類型與Survivin、mmp-9染色積分呈正相關(guān)性；經(jīng)Pearson法分析，Survivin染色積分與mmp-9染色積分呈正相關(guān)性，見(jiàn)表4。

表4 分析不同病變類型和各項(xiàng)指標(biāo)染色積分相關(guān)性

3 討 論

經(jīng)流行病學(xué)調(diào)查[7]，每年約有45萬(wàn)女性患有宮頸病變，其中宮頸癌、CIN均是女性好發(fā)類型。在對(duì)宮頸疾病的探索過(guò)程中，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，乳頭瘤病毒為宮頸病變常見(jiàn)的誘因之一，當(dāng)乳頭瘤病毒與宿主DNA結(jié)合后，可對(duì)基因轉(zhuǎn)錄過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)，誘導(dǎo)宿主細(xì)胞惡性增殖，從而誘發(fā)宮頸病變[8]。CIN與宮頸癌病因、臨床癥狀均有相似之處，極易造成混淆，但其治療方式及預(yù)后卻有差異，為了辨別兩類病變，還需合理選擇一項(xiàng)篩查方式，從而為疾病診療提供科學(xué)依據(jù)[9]。

有研究表明[10]，Survivin蛋白為小分子量的凋亡抑制蛋白，可對(duì)細(xì)胞的凋亡進(jìn)行抑制，還可對(duì)有絲分裂的過(guò)程進(jìn)行調(diào)節(jié)，促使細(xì)胞增殖，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后情況具有密切關(guān)聯(lián)。本研究中，宮頸癌中Survivin蛋白分子的陽(yáng)性率和染色積分相較于對(duì)照組有增高趨勢(shì)，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說(shuō)明了Survivin蛋白的表達(dá)與宮頸病變進(jìn)展呈逐漸增強(qiáng)趨勢(shì)，也提示了通過(guò)對(duì)宮頸癌細(xì)胞的凋亡進(jìn)行抑制，可促進(jìn)細(xì)胞增殖[11-12]。周慶紅[13]學(xué)者在研究中顯示，Survivin蛋白的表達(dá)在正常宮頸間及CINⅠ級(jí)對(duì)比無(wú)顯著差異，故單方面篩查Survivin蛋白仍可造成誤差，對(duì)此需高度重視CIN與正常宮頸的差別，對(duì)其進(jìn)行積極治療并隨訪。MMPs為鋅離子依賴肽鏈內(nèi)切酶，可降解細(xì)胞外基質(zhì)中的成分，從而作用腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程[14]。mmp-9為MMPs中分子量最大的酶，但該酶需在活化的作用下才可發(fā)揮作用。本研究表明，觀察組MMP-9的陽(yáng)性率及染色積分高于對(duì)照組，說(shuō)明mmp-9與機(jī)體惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的潛能及預(yù)后情況具有密切關(guān)聯(lián)。同時(shí)CIN Ⅲ級(jí)mmp-9的表達(dá)量高于CINⅠ級(jí)，說(shuō)明mmp-9參與了宮頸病變形成早期過(guò)程，且在非致死性、致死性子宮頸癌細(xì)胞中亦有高表達(dá)性，也進(jìn)一步說(shuō)明了MMP-9蛋白水解酶在宮頸癌、宮頸病變形成中有著重要的意義。

同時(shí)，本研究顯示，不同臨床分期、病理分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況宮頸癌患者比較Survivin、mmp-9陽(yáng)性率存在差異性(P＜0.05)，不同間質(zhì)浸潤(rùn)、組織分型的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，表明Survivin的表達(dá)水平與宮頸癌的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期、病理分級(jí)情況具有密切關(guān)聯(lián)，其腫瘤臨床分期越高，則Survivin的表達(dá)陽(yáng)性率也有提高，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性的表達(dá)率比無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組更高，也說(shuō)明了Survivin的表達(dá)與宮頸癌的發(fā)展具有密切關(guān)系，也可在一定程度上反映宮頸癌的惡性程度。經(jīng)Spearman法分析，不同病變類型與Survivin、mmp-9相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)性，提示了MMP-9可作為宮頸癌轉(zhuǎn)移的重要指標(biāo)，可對(duì)宮頸癌的預(yù)后情況進(jìn)行預(yù)測(cè)[15]。此外。經(jīng)Pearson法分析，Survivin相對(duì)表達(dá)量與mmp-9相對(duì)表達(dá)量呈正相關(guān)性，推測(cè)可能是，一方面，過(guò)度表達(dá)的Survivin，可促進(jìn)PGE2合成，刺激MMP-9分泌；另一方面，Survivin的過(guò)度表達(dá)還可誘導(dǎo)mmp-9表達(dá)上調(diào)，增強(qiáng)對(duì)BM、ECM講解，促進(jìn)宮頸癌浸潤(rùn)侵襲，故推測(cè)Survivin、mmp-9表達(dá)存在一定關(guān)系，但具體作用機(jī)制還需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)[16]。

綜上所述，宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤患者經(jīng)免疫組化法評(píng)估后，Survivin和mmp-9表達(dá)量隨著病變的嚴(yán)重程度可呈升高趨勢(shì)，且能夠在一定程度上反映病情進(jìn)展情況，推測(cè)可作為反映宮頸癌前病變、宮頸癌預(yù)后標(biāo)志物。