馬倩 胡自釗

摘 要：高效液相色譜法是檢測食品添加劑、污染物、真菌毒素等的主要檢測設備。提高高效液相色譜檢測水平、快速準確地完成檢測是液相色譜檢測工作者需要思考的基本問題。本文通過剖析高效液相色譜法檢測經常出現(xiàn)的問題，提出了檢測分析的技術要點和控制措施，并對可疑的檢測結果進行綜合分析，以提高高效液相色譜檢測技術水平，為從事高效液相色譜檢測工作的人員提供理論和實操參考。

關鍵詞：高效液相色譜;檢測技術;思考

Thinking About the Technology of High-Performance Liquid Chromatography

MA Qian， HU Zizhao

（Center of Quality and Technology Inspection and Testing of Ankang， Ankang 725000， China）

Abstract： The high-performance liquid chromatography is the main testing equipment for food additives， contaminants， mycotoxins， etc. Improving the level of high-performance liquid chromatography detection and completing the inspection， rapidly and accurately is the basic issue that liquid chromatography inspection workers need to think about. This paper analyzed the common problems of high-performance liquid chromatography， put forward the technical points and control measures of detection and analysis， and carried out a comprehensive analysis of the suspicious test results， so as to improve the technical level of high-performance liquid chromatography detection， to provide theoretical and practical reference for personnel engaged in high-performance liquid chromatography detection.

Keywords： high-performance liquid chromatography; detection technique; thinking

高效液相色譜儀是一種高壓、高速、高效和高靈敏度的檢測儀器，尤其適合高沸點、熱穩(wěn)定性差、相對分子質量大的有機物的定量和定性分析，在醫(yī)藥、環(huán)保、生命科學和食品安全檢測中被廣泛運用[1-3]。但在實際操作中，受目標檢測物含量低和樣品成分復雜的影響，會出現(xiàn)漏檢、錯檢、檢測時間長等現(xiàn)象。本文通過剖析高效液相色譜法檢測經常出現(xiàn)的問題，提出檢測分析的技術要點和控制措施，并對有問題的檢測結果進行綜合分析，以提高高效液相色譜檢測技術水平，滿足食品安全監(jiān)管需要。

1 高效液相色譜法檢測過程中存在的問題

液相色譜檢測是以色譜峰的保留時間來進行定性分析，同一物質在同一色譜條件下應有相同的保留時間。但在實際食品添加劑檢測中經常會遇到復雜基質樣品，由于雜質成分與待測化合物性質相似或接近，就可能在色譜行為上表現(xiàn)一致，即使完全按照檢測標準操作，也有各種因素干擾結果的準確性，對于這些峰，僅靠保留時間定性，容易出現(xiàn)漏檢、錯檢、數(shù)據(jù)不準確和檢測時間長等問題。①漏檢是不能檢出該檢的組分，特別是低含量和復雜的組分，如黃曲霉毒素，毒性大、含量低，容易漏檢。②錯檢是對檢測結果的誤判，得出錯誤結論，俗稱“假陽性”。③數(shù)據(jù)不準確是檢測數(shù)據(jù)遠遠偏離真值，甚至忽高忽低，不能真實反映出樣品內組分情況。④檢測時間長是在檢測樣品多、指標多的情況下，從樣品進入預處理到出具檢測報告的時間長，甚至超過法定時限。因此，快速、準確地應用色譜分析來定性、定量目標物是檢測機構獲取準確、可靠的分析數(shù)據(jù)的關鍵。

2 高效液相色譜法檢測技術的質量控制

2.1 樣品前處理

前處理包括取樣、制樣、提取和凈化。正確的樣品前處理是保障檢測數(shù)據(jù)科學、準確的第一步。不正確、不規(guī)范的預處理可能導致譜圖產生雜峰、詭峰，影響目標峰的分析。嚴格控制預處理過程，盡力減少雜峰，突出目標物，避免在目標物出峰位置有干擾峰，造成假陽性的錯誤檢測結論[4-5]。

取樣要有代表性，嚴格按照規(guī)程進行混勻、縮分。①根據(jù)樣品狀態(tài)來制樣。固體要將其粉碎后再混勻;液體樣品制備前要搖勻;結晶樣品溶解后攪拌均勻，如有結晶析出的蜂蜜樣品，需將樣品的瓶蓋旋緊后置于水?。囟炔怀^60 ℃）中溫熱，待蜂蜜樣品全部溶化后攪勻、冷卻，再稱取樣品，從而保證樣品性質的一致性。②根據(jù)檢測項目的不同來制樣，如堅果炒貨食品，檢測污染物時需去殼處理，檢測添加劑時則需帶殼處理。

2.2 選擇合適的檢測方法

樣品的特性千差萬別，選擇準確的檢測方法是保障結果準確的必要手段，這就需要結合產品特性，根據(jù)標準要求選擇合規(guī)、合理的檢測方法。此外，應及時關注最新出臺的標準，若有變更，則需按照變更后的檢測標準進行環(huán)境、人員、設備和方法的驗證，確認具備實驗能力后，再按照變更的檢測方法進行檢測。

2.3 對儀器、試劑進行有效控制

2.3.1 對儀器的控制

為了保證儀器設備的日常使用和維護，檢驗室應指定儀器的管理人員，并明確職責。儀器的操作者必須通過培訓、考核后上崗，熟知儀器的工作性能、操作規(guī)程和安全指標。檢測儀器必須進行計量檢定，檢定合格后，方能進行檢測工作。通常要求在兩次檢定周期內至少開展1次期間核查，針對使用頻率較高的儀器，儀器使用人員應增加核查頻次，監(jiān)測儀器的準確性和穩(wěn)定性，把控正常損耗對儀器檢測結果的影響。此外，做好儀器的日常維護，完成相關記錄。

2.3.2 對試劑的控制

實驗室要有試劑管理規(guī)程，并按要求分類儲存，如避光、冷藏、有毒有害和易燃易爆等要有相應的儲存地點，并明示標簽。對于在使用或保管中的標準品需進行期間核查，通過質量控制保證標準品量值的準確可靠以及可溯源性[6]。

2.4 優(yōu)化檢測環(huán)境

檢測環(huán)境條件對液相色譜檢測的準確性有重要影響，如環(huán)境溫度的不穩(wěn)定會影響流動相的黏度，導致保留時間發(fā)生變化，影響檢測結果的重現(xiàn)性[7-8]。因此，做好日常監(jiān)測和記錄，保證檢測環(huán)境符合檢測需求。同時，保持檢測環(huán)境的整潔，避免樣品間的交叉污染，有助于提高檢測效率。

2.5 提高檢測人員的操作水平

檢測員在檢測過程中應嚴格按照法律法規(guī)及標準規(guī)定，整個實驗過程都要保持科學嚴謹?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，做到過程有記錄、結果可追溯。檢測機構應制定人員培訓計劃，持續(xù)有效的培訓有助于提升檢測人員的檢測水平。此外，實驗室應多組織檢測員參加外部的能力驗證和內部的質量控制考核，通過盲樣考核、比對實驗、加標回收和留樣復測等手段確保檢測員具備相應的檢測能力。

2.6 檢測儀器的維護與保養(yǎng)

科學的維護和保養(yǎng)可延長高效液相色譜儀的使用壽命、提高其運行效率。①嚴格按照要求規(guī)范開關機，開機完畢后、開始檢測前要進行全面檢查，保證設備處于良好狀態(tài)，不會對檢測產生不良影響。關機時切忌亂丟亂放，以免在下次使用時出現(xiàn)誤差，影響檢測結果。②注意維護實驗室環(huán)境，不能僅在工作時保證適宜的溫度和濕度，即使不工作時也要關注實驗室的溫度和濕度變化，以免造成設備故障或檢測數(shù)據(jù)不穩(wěn)定。

3 可疑結果的綜合分析

高效液相色譜檢測結果往往會出現(xiàn)數(shù)值不準確、錯檢（假陽性）等情況，嚴格、規(guī)范地進行預處理是保證檢測結果準確的基礎。遇到可疑樣品時，應考慮制樣是否完備，標準是否正確執(zhí)行，前處理過程是否準確，判定是否合理。排除這些因素后，進行可疑樣品復測，可采取以下手段進一步確認。

3.1 調整色譜條件

有的樣品比較復雜，會出現(xiàn)雜質峰，干擾結果判定，可通過調整流動相比例，消除雜質峰的影響，準確地進行定性分析。例如，在檢測肉制品中的防腐劑時，按照《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》（GB 5009.28—2016）的要求，流動相為甲醇+乙酸銨，比例為5∶95，曾出現(xiàn)雜質峰影響苯甲酸的定性，將流動相甲醇+乙酸銨的比例調整為10∶90，雜質峰偏離苯甲酸出峰位置，有效避免了苯甲酸的錯檢。

3.2 加標實驗

在樣品前處理時添加標準品，對比保留時間、色譜峰、色譜峰面積的變化，對可疑檢測數(shù)據(jù)進行有效分辨。例如，在豆干樣品初測時檢出苯甲酸，根據(jù)《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》

（GB 2760—2014），豆干中不允許添加苯甲酸，因此需進行樣品復測。通過重新制備樣，加標復測后，苯甲酸標液峰和干擾峰分離，判定初測為假陽性。

3.3 使用二極管陣列檢測器檢測

通過保留時間和光譜信息圖進行綜合定性。當保留時間附近有可疑色譜峰出現(xiàn)時，比較標準溶液光譜圖與樣品處理液光譜圖的重合性，能夠進一步確證可疑色譜峰是否是目標待測物。例如，按照《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》（GB 5009.28—2016）中的第一法——液相色譜法，采用二極管陣列檢測器對樣品中的苯甲酸進行測定，分別采集色譜圖和光譜圖，將樣品處理液與標準溶液色譜圖進行比較，以保留時間定性，若有檢出，則結合樣品與標準溶液光譜圖，從峰起點、峰頂點和峰落點再次確認。若樣品光譜圖與標準溶液的光譜圖完全不重合，可確證樣品的檢出結果為假陽性;若光譜圖完全重合，可確證樣品為陽性檢出。因此，結合保留時間和光譜圖進行綜合分析判定，可有效保證樣品檢測結果的準確性和可靠性。

3.4 液質聯(lián)用

由于受價格和耗材的限制，高效液相色譜-串聯(lián)質譜設備沒有得到廣泛應用，但它的優(yōu)勢非常突出。它既能利用高效液相色譜對復雜化合物的分離能力，又綜合了高分辨率質譜對化合物的準確定性和定量，能夠同時測定多種化合物，且分析結果的靈敏性和準確性都能得到保障。童蘭艷等[9]采用高效液相色譜-質譜法同時測定食品中的9種甜味劑（甜蜜素、安賽蜜、糖精鈉、阿斯巴甜、阿力甜、三氯蔗糖、甜菊糖苷、愛德萬甜和紐甜），與國家標準檢測方法相比，分離效果好、靈敏度高，明顯提高了檢測效率。

4 結語

食品檢測面臨著新要求、新挑戰(zhàn)、新形勢，高效液相色譜技術憑借其準確性高、靈敏度好、分辨率高的優(yōu)勢被廣泛應用于農獸藥殘留、食品添加劑、非法添加物、霉菌毒素、氨基酸和糖類檢測中，但因其操作要求高，未能廣泛普及，如很多市、縣檢測機構的高效液相色譜儀被閑置，沒能發(fā)揮出其應有的作用。

隨著科學技術水平的提高，不管是國家檢測機構還是第三方檢測機構，都在不斷完善儀器檢測管理制度。在實際操作中正確運用高效液相色譜法的技術要點，使儀器的功能和特點最大限度地被發(fā)揮和利用，才能提高高效液相色譜技術的使用率和準確率，保證檢測結果的準確性，更好地監(jiān)管食品安全，真正做到讓老百姓吃得放心。

參考文獻

[1]朱明華.儀器分析[M].3版.北京：高等教育出版社，2000.

[2]羅海川.液相色譜檢測技術在食品檢測方面的研究進展[J].商品與質量，2020（42）：154.

[3]汪薇.高效液相色譜技術在食品檢驗中的應用效果及價值[J].現(xiàn)代食品，2020（24）：146-147.

[4]孔璐璐，范麗巖，王曉崗.高效液相色譜技術中常見問題分析及解決方法[J].實驗室科學，2021，24（2）：95-98.

[5]楊碩，付曉燕，劉蓮蓮，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質譜法測定抗生素預處理方法的優(yōu)化[J].綠色科技，2021，23（8）：117-118.

[6]劉娟，李佑志，張前飛，等.淺談標準物質的期間核查[J].廣州化工，2019，47（20）：116-117.

[7]鄭振，陳秀娟，趙亮，等.衍生化β-環(huán)糊精手性固定相高效液相色譜法拆分米那普侖對映體及其分離機制[J].色譜，2017，35（3）：286-290.

[8]孫藝夢，于泓，李朦，等.離子排斥色譜柱中色譜柱溫度對有機酸保留的影響[J].分析測試學報，2013，32（4）：508-511.

[9]童蘭艷，代政華，肖昭競，等.液相色譜-串聯(lián)質譜法同時測定食品中9種甜味劑[J].食品科學技術學報，2020，38（2）：121-126.