辛明彥

摘 要：目的：建立高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定果汁飲料中苯甲酸、山梨酸及糖精鈉3種食品添加劑的分析方法。方法：果汁飲料試樣用純水提取，經(jīng)AcclaimTM 120 C18色譜柱分離，用紫外檢測(cè)器測(cè)定。結(jié)果：苯甲酸、山梨酸及糖精鈉在1.00～50.00 mg/L線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，3種添加劑的檢出限均為

0.005 g/kg，定量限均為0.015 g/kg，加標(biāo)回收率為91.7%～109.0%，RSD為1.29%～3.36%。結(jié)論：該方法前處理簡(jiǎn)便、分析速度快、準(zhǔn)確度高及精密度好，可用于上述3種添加劑的定性、定量檢測(cè)。

關(guān)鍵詞：高效液相色譜;果汁飲料;食品添加劑

Determination of Benzoic Acid， Sorbic Acid and Saccharin Sodium in Fruit Juice Drinks by HPLC

XIN Mingyan

（Fushan County General Inspection and Testing Center， Linfen 042600， China）

Abstract： Objective： The method for the determination of benzoic acid， sorbic acid and saccharin sodium in fruit juice drinks by HPLC with UV detector was established. Method： Pear juice beverage samples were extracted with pure water， separated by AcclaimTM120 C18 chromatographic column and determined by UV detector. Result： The linearity of benzoic acid， sorbic acid and saccharin sodium is good at 1.00～50.00 mg/L， the correlation coefficient is greater than 0.999， the detection limit of the three additives is 0.005 g/kg， the quantitative limit is

0.015 g/kg， the recovery is 91.7%～109.0%， and the RSD is 1.29%～3.36%. Conclusion： The method has the advantages of simple pretreatment， fast analysis speed， high accuracy and good precision. It can be used for the qualitative and quantitative detection of the above three additives.

Keywords： high performance liquid chromatography; fruit juice beverage; food additives

隨著我國(guó)社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展與食品工業(yè)水平的提升，人們對(duì)飲料類食品的消費(fèi)需求日益增長(zhǎng)，果汁類飲料以其口味佳、富含維生素與礦物質(zhì)等優(yōu)勢(shì)深受廣大消費(fèi)者喜愛[1-3]。然而，部分生產(chǎn)廠家在果汁飲料生產(chǎn)過程中為改善口味、延長(zhǎng)貨架期會(huì)添加甜味劑、防腐劑等食品添加劑，消費(fèi)者過量攝入會(huì)對(duì)身體健康產(chǎn)生影響[4-8]。苯甲酸與山梨酸是國(guó)內(nèi)食品企業(yè)最常用的防腐劑，糖精鈉是食品生產(chǎn)中最常用的甜味劑，《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》（GB 2760—2014）[9]中規(guī)定果蔬汁類飲料中苯甲酸最大使用量為1.0 g/kg，飲料類中山梨酸最大使用量為0.5 g/kg，糖精鈉不得使用，因此上述3種食品添加劑在果汁飲料中超范圍或超限量使用是違法的。本研究參照《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測(cè)定》（GB 5009.28—2016）[10]中液相色譜法，以果汁飲料為基體，建立了高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定果汁飲料中苯甲酸、山梨酸及糖精鈉含量的分析

方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

果汁飲料購(gòu)自某超市;苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[編號(hào)GBW（E）100006，1.00 mg/mL]，山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液[編號(hào)GBW（E）100007，1.00 mg/mL]，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液[GBW（E）100008，1.00 mg/mL]，均由中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院提供;甲醇（色譜純，德國(guó)默克）;乙酸銨（色譜級(jí)，阿拉丁試劑）;乙酸鋅、亞鐵氰化鉀（分析純，天津市天力化學(xué)試劑有限公司）;實(shí)驗(yàn)用水為一級(jí)超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

ULTIMATE 3000高效液相色譜儀（配紫外檢測(cè)器，美國(guó)賽默飛世爾）;DV215電子天平（精度

0.000 1 g，奧豪斯國(guó)際貿(mào)易有限公司）;VORTEX MS3旋渦混合儀（德國(guó)艾卡）;KQ5200DE 數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;HC-3018離心機(jī)（安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）;0.22 ?m針式過濾器（博納艾杰爾公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 試樣前處理

準(zhǔn)確稱取2 g飲料試樣于50 mL離心管中，加入25 mL純水，渦旋混勻，于50 ℃的超聲波清洗器中水浴超聲20 min，取出冷卻至室溫后，加入

2 mL濃度為92 g/L的亞鐵氰化鉀溶液與2 mL濃度為D6F67F1E-B428-47B1-BA59-66828600025A

183 g/L的乙酸鋅溶液，混勻后于8 000 r/min的離心機(jī)中離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，再向離心管中的殘?jiān)尤?0 mL純水，渦旋混勻，超聲5 min，8 000 r/min離心5 min，將水相轉(zhuǎn)移入同一容量瓶中，用純水定容、混勻后，取上清液過

0.22 ?m針式過濾器，上機(jī)待測(cè)。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

（1）混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制。準(zhǔn)確吸取濃度為1.00 mg/mL

的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃度為1.00 mg/mL的山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃度為1.00 mg/mL的糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液各2.0 mL

于10 mL容量瓶中，用純水定容，混勻，配制成3種添加劑組分質(zhì)量濃度均為200 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

（2）標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制。分別吸取3種添加劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液各0.05 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL和2.50 mL于5個(gè)10 mL容量瓶中，用純水定容，混勻，配制成3種添加劑組分質(zhì)量濃度均為1.00 mg/L、

5.00 mg/L、10.00 mg/L、20.00 mg/L和50.00 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3.3 儀器條件

色譜柱：AcclaimTM 120 C18（150 mm×4.6 mm，5 ?m）;柱溫：40 ℃;流動(dòng)相：甲醇+乙酸銨溶液

（5+95，V/V）;等度洗脫;流速為1 mL/min;檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm;進(jìn)樣量：10 ?L;定性方法：色譜峰保留時(shí)間;定量方法：峰面積外標(biāo)法。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜的分離分析

在1.3.3色譜條件下，20 min內(nèi)可以完成苯甲酸、山梨酸、糖精鈉3種添加劑的色譜分析，3種添加劑組分目標(biāo)峰尖銳對(duì)稱，色譜分離效果較好，且飲料試樣中的雜質(zhì)峰未對(duì)添加劑組分目標(biāo)峰產(chǎn)生干擾，因此能夠準(zhǔn)確地對(duì)飲料中的3種添加劑進(jìn)行定性與定量

分析。

2.2 線性關(guān)系與檢出限

將配制的苯甲酸、山梨酸與糖精鈉3種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液于1.3.3色譜條件下進(jìn)行色譜分析，以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中3種添加劑組分的質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)測(cè)得添加劑組分的色譜峰面積（y）為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)3倍信噪比（S/N=3）和10倍信噪比（S/N=10）分別計(jì)算取樣量為2 g、定容體積為50 mL時(shí)3種添加劑各自的檢出限與定量限。由表1可知，3種添加劑組分在1.00～50.00 mg/L線性良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.999，方法檢出限均為0.005 g/kg，定量限均為0.015 g/kg。

2.3 加標(biāo)回收率與精密度

在空白飲料試樣中添加標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行方法的加標(biāo)回收與精密度實(shí)驗(yàn)。將準(zhǔn)確稱取的18份2 g的陰性果汁飲料試樣分為3份，結(jié)合本研究中的方法定量限及GB 2760—2014規(guī)定飲料類食品中3種添加劑的最大使用量添加低、中、高3種濃度水平的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照1.3.1前處理操作、1.3.3色譜條件進(jìn)行6水平平行測(cè)定，計(jì)算方法的回收率與精密度。由表2可知，果汁飲料中3種添加劑組分低、中、高3種濃度水平的回收率為91.7%～109.0%，RSD為1.29%～3.36%，符合《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[11]中的要求。

2.4 方法穩(wěn)定性測(cè)試

取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉加標(biāo)量均為0.300 g/kg的空白飲料加標(biāo)溶液，在1 d內(nèi)每隔4 h按照1.3.3色譜條件測(cè)試1次并記錄峰面積，計(jì)算得到相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為苯甲酸1.98%、山梨酸2.32%、糖精鈉2.91%，表明該方法穩(wěn)定性良好。

2.5 實(shí)際樣品的測(cè)定

采用該方法對(duì)浮山縣數(shù)家超級(jí)市場(chǎng)和便利店銷售的蘋果汁、梨汁、沙棘汁及復(fù)合果汁飲料等30批次果汁飲料進(jìn)行檢測(cè)，其中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉3種添加劑均符合GB 2760—2014中的限量規(guī)定，可以放心飲用。

3 結(jié)論

本研究參照GB 5009.28—2016中液相色譜法，建立了高效液相色譜-紫外檢測(cè)器測(cè)定果汁飲料中苯甲酸、山梨酸及糖精鈉3種食品添加劑的分析方法，前處理操作簡(jiǎn)便、分析速度快、準(zhǔn)確度高以及精密度好，通過對(duì)方法的線性關(guān)系、檢出限、加標(biāo)回收率及精密度進(jìn)行考察，均符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，可以為基層食品檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)開展飲料中苯甲酸、山梨酸及糖精鈉含量檢測(cè)提供參考，對(duì)基層市場(chǎng)監(jiān)管部門加強(qiáng)飲料中食品添加劑含量的抽檢監(jiān)測(cè)有一定

意義。

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