王旭，胡志強(qiáng)，亢學(xué)平，杜忠偉，李健，王鑫

(延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延吉 133000)

黑木耳 [Auriculariaauricula-judae(Bull.) Quél.]，別名木耳、黑耳、細(xì)耳、木蛾，隸屬于真菌界真菌門異擔(dān)子菌綱木耳目木耳科木耳屬[1-2]。黑木耳味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，享有“素中之葷”、“菌中瑰寶”的美譽(yù)；《本草綱目》中記載木耳性平、味甘、補(bǔ)氣血、止血活血，有滋潤(rùn)、潤(rùn)肺、通便之功能，也是一種價(jià)值很高的藥用菌[3]。

近年來(lái)，食用菌已成為農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整的主力軍，是脫貧攻堅(jiān)的抓手，也是鄉(xiāng)村振興的推手[4]。由于黑木耳具有可食、可藥的特點(diǎn)，其市場(chǎng)需求量日益增長(zhǎng)，黑木耳栽培規(guī)模不斷擴(kuò)大。隨著食用菌栽培品種和栽培方式多元化發(fā)展，品牌發(fā)展與種質(zhì)資源的不斷創(chuàng)新，以及設(shè)施化、集約化程度的提高，優(yōu)質(zhì)的“中國(guó)造”菌種和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已成為限制企業(yè)、合作社以及菇農(nóng)發(fā)展的首要因素[5-7]。為此，通過(guò)對(duì)黑木耳菌種培養(yǎng)基配方進(jìn)行篩選、優(yōu)化，為黑木耳菌種培養(yǎng)和種質(zhì)資源保育[8-10]及深層發(fā)酵提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌種

供試菌種為“延農(nóng)科1號(hào)”，由延邊州農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所提供。

1.2 供試培養(yǎng)基

配方1. PDA培養(yǎng)基(CK)：馬鈴薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1000 mL，pH自然。

配方2. CPDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀2 g，硫酸鎂0.5 g，維生素B110 mL，水1000 mL，pH自然。

配方3. 黃豆粉、麥麩培養(yǎng)基：黃豆粉5 g(用浸出液)，麥麩10 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方4. 木屑浸出液培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，闊葉樹木屑50 g(用浸出液)，葡萄糖20 g，水1000 mL，pH自然。

配方5. 黑木耳菌絲培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g(用浸出液)，黑木耳廢菌包(配方：78%木屑，20%豆粕，1%石灰，1%石膏，用浸出液)50 g，葡萄糖20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，水1000 mL，pH自然。

1.3 試驗(yàn)方法

使用 PDA 培養(yǎng)基對(duì)供試菌種進(jìn)行活化培養(yǎng)。分別以PDA、CPDA、黃豆粉、麥麩浸、木屑、黑木耳菌絲為試驗(yàn)材料，開水煮30 min，紗布過(guò)濾，留其浸出液備用。

1.3.1 固體菌種培養(yǎng)方法。固體培養(yǎng)基按上述配方加入瓊脂20 g，煮至瓊脂溶化。分別將供試培養(yǎng)置于三角瓶中，121 ℃高壓滅菌30 min。將不同試驗(yàn)培養(yǎng)基分別倒入培養(yǎng)皿(0～9 cm)中，每個(gè)培養(yǎng)皿裝 15 mL，冷卻后接種(接種塊大小 0～0.7 cm)，置于恒溫培養(yǎng)箱中暗光培養(yǎng)10天，每組 5 個(gè)重復(fù)。

1.3.2 液體菌種培養(yǎng)方法。液體菌種培養(yǎng)基制作時(shí)，按上述配方制做供試培養(yǎng)基，250 mL三角瓶中灌裝150 mL培養(yǎng)基，121 ℃高壓滅菌30 min。冷卻后接種5塊接種快(接種塊大小 0～0.2 cm)，置于 25 ℃搖床中培養(yǎng)7天，每組5個(gè)重復(fù)。

1.3.3 測(cè)量、分析方法。固體培養(yǎng)自接種24 h后，間隔24 h觀察、記錄菌絲長(zhǎng)勢(shì)、菌落顏色及菌落邊緣整齊度，利用游標(biāo)卡尺十字交叉法測(cè)量，并記錄菌落的生長(zhǎng)直徑；液體培養(yǎng)自接種24 h后，間隔24 h觀察、記錄培養(yǎng)液顏色、菌落顏色、菌絲球均勻度，測(cè)定不同培養(yǎng)基配方黑木耳液體培養(yǎng)基菌絲體生物量。將培養(yǎng)好的菌絲體用蒸餾水洗滌、沉淀3次，真空抽濾，收集菌絲體，置于85 ℃烘箱中干燥，至恒重用電子天平稱重,記錄分析。相關(guān)數(shù)據(jù)采用 Excel 2007、SPSS進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 固體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

固體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)情況的影響見表 1。由表1可知，黑木耳菌絲對(duì)供試培養(yǎng)基有較好的適應(yīng)性，菌落邊緣整齊、潔白；黑木耳菌絲對(duì)黑木耳廢菌包及黃豆粉、麥麩浸出液培養(yǎng)基的長(zhǎng)勢(shì)較快，且稠密、粗壯，木屑浸出物和CPDA次之(較密)，均高于對(duì)照；且黑木耳菌絲生長(zhǎng)速度結(jié)果與菌絲長(zhǎng)勢(shì)結(jié)果相似。綜合對(duì)比，配方4和配方5，黑木耳菌絲生長(zhǎng)優(yōu)于其它。

表1 固體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

2.2 液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)情況的影響見表 2。由表可知，黑木耳菌絲體在不同培養(yǎng)基質(zhì)中略有差別，配方1、2、5菌絲培養(yǎng)液顏色澄清，菌絲球顏色潔白，配方3、4略有渾濁，配方4菌絲球顏色淺黃，配方3菌絲球顏色潔白，各培養(yǎng)基菌絲球均勻；黑木耳菌絲體對(duì)黑木耳廢菌包及黃豆粉、麥麩浸出液培養(yǎng)基的菌絲體生物量高于其它對(duì)照。結(jié)果表明，配方3和配方5綜合表現(xiàn)良好，黑木耳液體菌絲生物量和菌絲球均勻度及顏色略好于其它配方。

表2 液體培養(yǎng)基對(duì)黑木耳菌絲生長(zhǎng)的影響

3 結(jié)論與討論

黑木耳菌種的固體和液體培養(yǎng)過(guò)程中，不同配方對(duì)黑木耳菌絲及菌絲體的生長(zhǎng)略有不同。試驗(yàn)結(jié)果表明，配方3和配方5黑木耳菌絲綜合長(zhǎng)勢(shì)更好，為黑木耳菌種培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基。

黑木耳廢棄菌包仍具有充分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，供黑木耳菌絲利用；黃豆粉、麥麩浸出液為黑木耳菌絲生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。供試菌種的菌絲對(duì)黃豆粉、麥麩、木屑等物質(zhì)的吸收效果較好，黑木耳廢菌包和黃豆粉、麥麩浸出液對(duì)黑木耳菌種培養(yǎng)效果最佳。同時(shí)，其它配方下黑木耳菌絲長(zhǎng)勢(shì)略有差別，但也是值得參照的黑木耳菌種培養(yǎng)的配方。

通過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn)表明，培養(yǎng)條件和培養(yǎng)物質(zhì)也是黑木耳菌種制作與培養(yǎng)的重要因素，研究不同接種量、溫度、濕度、pH對(duì)黑木耳菌種培養(yǎng)的共同作用，對(duì)黑木耳的種質(zhì)資源保育提供參考，也是今后研究“中國(guó)造”優(yōu)質(zhì)菌種和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及深層發(fā)酵等相關(guān)工作的重點(diǎn)和方向。