王 真，黃廉展，邢高暢，高宏錦，楊 寧，宋佳媚，丁選勝

（中國(guó)藥科大學(xué) 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床藥學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 211198）

慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、支氣管哮喘等是臨床常見(jiàn)呼吸系統(tǒng)疾病，其患病率呈逐年升高趨勢(shì)，喘息或伴有發(fā)熱是其常見(jiàn)癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，給社會(huì)和家庭帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)[1-2]，目前西藥治療雖然效果顯著，但多存在藥物濫用、多藥耐藥和不良反應(yīng)發(fā)生率高等不合理用藥問(wèn)題[3-5]。現(xiàn)有臨床報(bào)道顯示，銀馬解毒顆粒、肺力咳合劑、桔貝合劑、復(fù)方鮮竹瀝液均能顯著緩解此類患者的發(fā)熱、咳嗽、喘息等癥狀[6-13]。臨床治療上如何合理選用，缺乏相應(yīng)的證據(jù)支持。為此，本研究采用豚鼠哮喘模型和大鼠脂多糖致熱模型分別對(duì)銀馬解毒顆粒、肺力咳合劑、桔貝合劑、復(fù)方鮮竹瀝液的平喘、解熱作用進(jìn)行對(duì)比研究，為臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 藥品與試劑

銀馬解毒顆粒（批號(hào)：20110605，揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司）；肺力咳合劑（批號(hào)：20190134，貴州健興藥業(yè)有限公司）；桔貝合劑［批號(hào)：18050035（平喘試驗(yàn)）、20010003（解熱試驗(yàn)），太極集團(tuán)重慶桐君閣藥廠有限公司］；復(fù)方鮮竹瀝液（批號(hào)：200203，江西天施康中藥股份有限公司）；氯化乙酰膽堿（批號(hào)：F2005027，阿拉丁生化科技股份有限公司）；磷酸組胺（批號(hào)：11956450，麥克林生化科技有限公司）；脂多糖（批號(hào)：0000089172，Sigma 試劑公司）；生理鹽水（批號(hào)：19122444，中國(guó)大冢制藥有限公司）；甘油（批號(hào)：20201203，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 動(dòng)物

豚鼠，體質(zhì)量為210 ～ 260 g，180 只，雌雄各半，由南京市浦口區(qū)萊芙養(yǎng)殖場(chǎng)提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（蘇）2019-0005。SD 大鼠，SPF 級(jí)，體質(zhì)量為180 ～ 220 g，240 只，雌雄各半，由浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院和杭州醫(yī)學(xué)院提供，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（浙）2019-0002。飼養(yǎng)溫度為20 ～ 25 ℃，濕度為40% ～60%，晝夜明暗交替時(shí)間12 h/12 h，動(dòng)物飼料購(gòu)自南京市青龍山動(dòng)物繁殖場(chǎng)，質(zhì)量符合GB/T14924.9-2001。實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的處理符合中國(guó)藥科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的相關(guān)規(guī)定。

1.3 儀器

402B 型超聲霧化器（南京魚(yú)躍醫(yī)療器械有限公司）；MC-347型電子體溫計(jì)［歐姆龍（大連）有限公司］。

2 方法

2.1 平喘試驗(yàn)

豚鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，隨機(jī)分為連續(xù)給藥3 d 組、5 d 組、7 d 組。每個(gè)連續(xù)給藥時(shí)間組分為：正常組，銀馬解毒顆粒低、中、高劑量組（以下簡(jiǎn)稱銀馬低、中、高劑量組），肺力咳合劑組（以下簡(jiǎn)稱肺力咳組），桔貝合劑組（以下簡(jiǎn)稱桔貝組），復(fù)方鮮竹瀝液組（以下簡(jiǎn)稱鮮竹瀝液組），每組8 只，雌雄各半。

連續(xù)給藥3 d 組、5 d 組、7 d 組分別于末次給藥后1 h 讓豚鼠接受噴霧刺激，用超聲霧化器將0.1%磷酸組胺和2.0%氯化乙酰膽堿等容積混合液以最大流速向密封容器（容積4 000 mL）噴霧15 s[14-15]，將豚鼠放入其中接受噴霧15 s，記錄自接受噴霧起出現(xiàn)哮喘的潛伏期（哮喘分級(jí)：Ⅰ呼吸加速、Ⅱ呼吸困難、Ⅲ抽搐、Ⅳ翻倒，以Ⅳ翻倒為標(biāo)準(zhǔn)，動(dòng)物一旦跌倒，立即取出，以免因窒息而死亡）。

2.2 解熱試驗(yàn)

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)后，每日2 次對(duì)其進(jìn)行適應(yīng)性測(cè)肛溫，測(cè)溫前排空糞便，電子體溫計(jì)探頭用甘油潤(rùn)滑，輕輕插入大鼠肛門2 cm，連續(xù)3 d 使其適應(yīng)環(huán)境和測(cè)溫刺激。正式試驗(yàn)前，為使大鼠體溫保持穩(wěn)定，結(jié)合文獻(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件，大鼠禁食不禁水6 h，每0.5 h 測(cè)體溫1 次，連續(xù)3 次，留用體溫變化不超過(guò)0.5 ℃及體溫不超過(guò)38 ℃的動(dòng)物[16]。取留用大鼠，隨機(jī)分為連續(xù)給藥3 d 組、5 d 組、7 d 組，每個(gè)連續(xù)給藥時(shí)間組分為：正常組，模型組，銀馬解毒顆粒低、中、高劑量組（以下簡(jiǎn)稱銀馬低、中、高劑量組），肺力咳合劑組（以下簡(jiǎn)稱肺力咳組），桔貝合劑組（以下簡(jiǎn)稱桔貝組），復(fù)方鮮竹瀝液組（以下簡(jiǎn)稱鮮竹瀝液組），每組10 只，雌雄各半。

連續(xù)給藥3 d 組、5 d 組、7 d 組大鼠于末次給藥當(dāng)天禁食不禁水6 h，每0.5 h 測(cè)體溫1 次，連續(xù)3 次，平均體溫作為基礎(chǔ)體溫。末次給藥后，除正常組注射生理鹽水外，其它組均按100 μg/kg 體質(zhì)量腹腔注射LPS 造模，造模后第2.5 h 開(kāi)始，每0.5 h 測(cè)一次肛溫，直至造模后8 h[16-17]。計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)體溫上升高度（ΔT）、計(jì)算體溫最大上升高度（ΔTmax）、3 ～ 8 h 體溫反應(yīng)指數(shù)（TRI 5，以-2 為基線，ΔT 為縱坐標(biāo)，以體溫變化曲線與基線之間的面積表示體溫反應(yīng)指數(shù)）。

2.3 劑量設(shè)置

銀馬解毒顆粒低、中、高劑量組分別為臨床成人日等效劑量（ED）的0.5 倍、1 倍、2 倍，肺力咳合劑、桔貝合劑、復(fù)方鮮竹瀝液均采用臨床成人日等效劑量，根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[18]中劑量換算原則，各給藥組給藥劑量見(jiàn)表1。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析。以P＜ 0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表 1 各給藥組劑量設(shè)置表Tab. 1 Dose of each administration group

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 平喘試驗(yàn)

通過(guò)試驗(yàn)研究各組藥物對(duì)豚鼠哮喘反應(yīng)潛伏期的影響。與正常組相比，給藥3、5、7 d 后，肺力咳組、桔貝組、鮮竹瀝液組均能延長(zhǎng)哮喘潛伏期（P＜ 0.05），銀馬低劑量組給藥7 d 時(shí)開(kāi)始延長(zhǎng)哮喘潛伏期（P＜0.05），銀馬中劑量組給藥5 d 開(kāi)始延長(zhǎng)哮喘潛伏期（P＜ 0.05），銀馬高劑量組給藥3 d 開(kāi)始延長(zhǎng)哮喘潛伏期（P＜ 0.05）。給藥5 d 時(shí)，與銀馬低劑量組相比，銀馬高劑量組哮喘潛伏期延長(zhǎng)（P＜ 0.05）。給藥3、5、7 d，與銀馬中劑量組相比，肺力咳組、桔貝組、鮮竹瀝液組哮喘潛伏期差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），見(jiàn)圖1。比較連續(xù)給藥3、5、7 d 組間平喘作用強(qiáng)度，發(fā)現(xiàn)各給藥組平喘潛伏期隨給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而延長(zhǎng)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05）。

圖 1 給藥期間各組藥物對(duì)豚鼠哮喘反應(yīng)潛伏期的影響（±s，n = 8）Fig. 1 Effects of each drug on the latency period of asthma in guinea pigs during administration（±s，n = 8）

3.2 解熱試驗(yàn)

3.2.1 各組藥物對(duì)大鼠體溫上升高度的影響 連續(xù)給藥3、5、7 d，與正常組相比，模型組大鼠體溫均明顯升高（P＜ 0.05）。與模型組相比，給藥3 d 時(shí)，銀馬低劑量組在造模后6.5 h 至8 h，銀馬中、高劑量組在造模后6 h、鮮竹瀝液組在造模后8 h 體溫明顯降低（P＜ 0.05）。給藥5 d 時(shí)，銀馬低劑量組在造模后3.5、6 h，銀馬中劑量組在造模后2.5、6 h，肺力咳組在造模后2.5 h 至3.5 h，桔貝組在造模后3.5 h體溫明顯降低（P＜ 0.05）。給藥7 d 時(shí)，銀馬低劑量組在造模后3.5、4.5、6、7 h，銀馬中劑量組在造模后3.5 h、6.5 h 至8 h，銀馬高劑量組在造模后5.5、6.5、7 h，桔貝組在造模后7 h 體溫明顯降低（P＜ 0.05）。與銀馬中劑量組相比，給藥3 d、5 d、7 d，肺力咳組、桔貝組、鮮竹瀝液組體溫在個(gè)別時(shí)間點(diǎn)可出現(xiàn)明顯升高（P＜ 0.05），見(jiàn)圖2—圖4。

圖 2 給藥3 d 各組藥物對(duì)大鼠體溫的影響Fig. 2 Effect of drugs on body temperature in rats in 3 d subgroup

3.2.2 各組藥物對(duì)大鼠體溫反應(yīng)指數(shù)的影響 與模型組相比，給藥5 d 時(shí)，銀馬低劑量組大鼠TRI 5明顯降低（P＜ 0.05）；給藥7 d 時(shí)，銀馬低、中、高劑量組大鼠TRI 5 明顯降低（P＜ 0.05）。與銀馬中劑量組相比，桔貝組在給藥3 d、鮮竹瀝液組在給藥5 d、肺力咳組在給藥7 d 時(shí)，TRI 5 明顯升高（P＜0.05），見(jiàn)圖5。

圖 3 給藥5 d 各組藥物對(duì)大鼠體溫的影響Fig. 3 Effect of drugs on body temperature in rats in 5 d subgroup

圖 4 給藥7 d 各組藥物對(duì)大鼠體溫的影響Fig. 4 Effect of drugs on body temperature in rats in 7 d subgroup

3.2.3 各組藥物對(duì)大鼠體溫最大上升高度的影響

與模型組相比，給藥5 d 時(shí)，銀馬低劑量組大鼠ΔTmax明顯降低（P＜ 0.05）；給藥7 d 時(shí)，銀馬中劑量組、高劑量組大鼠ΔTmax明顯降低（P＜ 0.05）。與銀馬中劑量相比，桔貝組、鮮竹瀝液組ΔTmax分別在3 d、7 d 時(shí)明顯升高（P＜ 0.05），見(jiàn)圖6。

圖 5 給藥期間各組藥物對(duì)大鼠TRI 5 的影響Fig. 5 Effects of each drug on the TRI 5 in rats during administration

圖 6 各組藥物對(duì)大鼠最大體溫上升高度的影響Fig. 6 Effects of each drug on the ΔTmax in rats during administration

4 討論

磷酸組胺和氯化乙酰膽堿通過(guò)激動(dòng)支氣管平滑肌M 膽堿受體和組胺H1 受體，可引起支氣管平滑肌收縮，是哮喘常用模型，正式給藥前，需要篩選敏感豚鼠，潛伏期以120 s 為界，超過(guò)視為不敏感[14-15]，本試驗(yàn)對(duì)豚鼠的篩選合格率為100%。LPS 為革蘭陰性菌的活性成分，是動(dòng)物發(fā)熱實(shí)驗(yàn)中常用的致熱劑[19-21]，預(yù)試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大鼠在注射后2 h內(nèi)出現(xiàn)第一相熱，由于第一相熱是由應(yīng)激和大鼠的個(gè)體差異引起的，因此未對(duì)第一相熱進(jìn)行比較研究[22]。

本次研究發(fā)現(xiàn)，銀馬解毒顆粒、肺力咳合劑、桔貝合劑、復(fù)方鮮竹瀝液均具有平喘和解熱作用。平喘實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，銀馬解毒顆粒高劑量起效較快，中劑量次之，低劑量較慢；隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)，銀馬低、中劑量開(kāi)始發(fā)揮平喘作用；四種藥物在作用強(qiáng)度上無(wú)顯著性差異。分析藥物組成發(fā)現(xiàn)，銀馬解毒顆粒中馬齒莧、車前草、甘草；肺力咳合劑中黃芩、前胡、甘草；桔貝合劑中黃芩、苦杏仁、桔梗；復(fù)方鮮竹瀝液中魚(yú)腥草、桔梗，均具有延長(zhǎng)豚鼠引喘潛伏期，松弛氣管平滑肌的作用[23-30]。

解熱試驗(yàn)結(jié)果表明，銀馬解毒顆粒中劑量（臨床等效劑量）組在各給藥時(shí)間內(nèi)均表現(xiàn)為起效較快，且給藥5 d、7 d 均在模型組達(dá)峰前起效，給藥7 d 時(shí)維持時(shí)間最長(zhǎng)。給藥5 d 時(shí)，肺力咳合劑、桔貝合劑在模型組達(dá)峰前起效，肺力咳合劑維持時(shí)間較長(zhǎng)。TRI 5和ΔTmax結(jié)果顯示，隨著給藥時(shí)間延長(zhǎng)，與模型組相比，銀馬解毒顆粒降低TRI 5 和ΔTmax的作用更明顯，提示銀馬解毒顆粒發(fā)揮解熱作用呈時(shí)效關(guān)系，并具有降低整體發(fā)熱程度的作用。制劑組成分析可見(jiàn)，四種中成藥均有寒性藥材組成，具有清熱之功效。中醫(yī)認(rèn)為，肺與大腸相表里[31]，熱結(jié)大腸，腑氣不通，不僅影響肺之宣發(fā)，肅降，或致咳或致喘，且燥屎堅(jiān)結(jié)，又傷津液，使熱勢(shì)更重，通腑瀉熱法可釜底抽薪，下瀉燥結(jié)，使腑氣得通，肺氣得宣，邪熱得解[32]。銀馬解毒顆粒中的大黃具有通腑瀉熱之功[33-34]，這可能是其發(fā)揮解熱作用的獨(dú)特之處。

5 結(jié)論

銀馬解毒顆粒、肺力咳合劑、桔貝合劑、復(fù)方鮮竹瀝液均具有平喘、解熱作用。平喘作用上，四種制劑作用強(qiáng)度相當(dāng)。解熱作用上，銀馬解毒顆粒作用較強(qiáng)且穩(wěn)定，具有時(shí)效關(guān)系。該研究結(jié)果可為臨床合理用藥提供一定的參考依據(jù)。但本次研究?jī)H考察了四種制劑的平喘及解熱作用，其它方面的作用及作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。