王寧

101500北京市密云區(qū)醫(yī)院，北京

自身免疫性疾病(AID)是一種以對自身抗原產(chǎn)生破壞性免疫反應(yīng)為特征的多種疾病，針對這些細(xì)胞抗原的抗體通常稱為抗核抗體(ANA)。自身抗體可以通過激活補(bǔ)體系統(tǒng)，從而介導(dǎo)組織損傷并引發(fā)全身炎癥[1]。ANA 的存在是許多系統(tǒng)性自身免疫性風(fēng)濕病的標(biāo)志和分類標(biāo)準(zhǔn)。ANA 檢測通常是作為初步診斷的重要部分，常用于評估人體自身免疫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)。運(yùn)用間接免疫熒光(IIF)法在基質(zhì)中包被的人上皮細(xì)胞(HEp-2)檢測ANA，目前仍被視為檢測ANA 的金標(biāo)準(zhǔn)，其可以檢測抗體結(jié)合到特定的細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)，導(dǎo)致不同的染色模式及熒光強(qiáng)度。染色模式可分為細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)及有絲分裂亞型。本文分析1 278 例AID患者及78例健康者血清樣本，采用IIF法檢測ANA陽性率、熒光模型及滴度，現(xiàn)報(bào)告如下。

資料與方法

選取2020年1月-2021年1月北京大學(xué)密云區(qū)醫(yī)院就診的患者1 278例，其中男432例，女846例；風(fēng)濕免疫科AID患者254例。同時選取健康者78例，作為對照。

診斷標(biāo)準(zhǔn)：AID 由本院風(fēng)濕病專家根據(jù)疾病的各種分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷。

納入標(biāo)準(zhǔn)：健康者排除因不明原因的慢性發(fā)熱、持續(xù)關(guān)節(jié)疼痛、口腔潰瘍、皮疹、其他慢性全身性疾病、其他免疫疾病、妊娠、腫瘤、急慢性感染、家族史等確診的自身免疫性風(fēng)濕病或與自身免疫性風(fēng)濕病相關(guān)癥狀者。

方法：采用免疫熒光顯微鏡及歐蒙抗核抗體IgG檢測試劑盒(間接免疫熒光法)進(jìn)行檢測。①所有患者空腹抽取外周靜脈血4 mL，離心后分離血清備用。②血清樣本采用磷酸鹽緩沖液(PBS 吐溫緩沖液)按歐蒙試劑推薦起始稀釋度1∶100 稀釋后，覆蓋于包被HEp-2 細(xì)胞和猴肝組織的載片上，室溫孵育30 min。③采用PBS吐溫緩沖液沖洗載片，并浸泡PBS吐溫緩沖液5 min。④再次覆蓋于異硫氰酸熒光素(FITC)標(biāo)記的羊抗人IgG 結(jié)合物，室溫孵育30 min。⑤然后第二次用PBS吐溫緩沖液沖洗載片，并浸泡PBS吐溫緩沖液5 min。⑥最后用封片介質(zhì)進(jìn)行封片。所有程序均由2 名經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員按照試劑盒說明書完成，然后由2名專家使用40倍熒光顯微鏡判讀載玻片，如果熒光滴度≥1∶100，則報(bào)告為陽性。主要的ANA 熒光模型類型包括核均質(zhì)型、核顆粒型、胞漿型、核仁型、著絲點(diǎn)型及兩種或多種核型并存模型。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析，計(jì)數(shù)資料用頻數(shù)和百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

ANA 陽性標(biāo)本分布情況：1 278 例患者ANA 檢測標(biāo)本中陽性720 例，陽性率為56.34%，其中男203 例(15.88%)，女517 例(40.45%)。ANA 陽性標(biāo)本中，滴度1∶100 占比64.58%(465/720)，滴度1∶320 占比15.69%(113/720)，滴度≥1∶1 000 占比19.72%(142/720)。熒光模型以顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主，共418 例，占比32.71%(418/1 278)，在ANA 陽性標(biāo)本中占比58.06%(418/720)，其中女性顆粒型+胞漿型328 例，男性顆粒型+胞漿型90 例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=21.856，P＜0.01)。見表1。

表1 ANA陽性標(biāo)本中不同性別顆粒型+胞漿型比較(n)

AID 患者及健康者ANA 陽性分布情況：AID 患者ANA 陽性例數(shù)為163例，占比64.17%(163/254)；健康者ANA 陽性例數(shù)14 例，占比17.95%(14/78)。AID 患者與健康者ANA 陽性例數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=51.228，P＜0.01)。見表2。

AID 患者及健康者熒光模型與滴度分布情況：AID 患者以顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主，占比53.37%(87/163)；健康者以顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主，占比57.14%(8/14)。AID 患者ANA 滴度中位數(shù)為1∶1 000，健康者為1∶100。

討 論

AID 是指對特定的自身蛋白失去免疫耐受，表達(dá)這些蛋白的器官因免疫系統(tǒng)失調(diào)而受到損傷，身體任何器官均可能成為自身免疫的目標(biāo)。ANA 檢測通常是診斷風(fēng)濕病和非風(fēng)濕病的第一步檢查[2]。有報(bào)告評估自身抗體的效價和熒光模式對于指導(dǎo)臨床診斷均有價值[3]。此外，有研究報(bào)告認(rèn)為ANA 測試結(jié)果可廣泛用于自身免疫性疾病的鑒別診斷，因此該測試結(jié)果可用于排除全身AID(陰性預(yù)測值)，從而更好地為臨床診療提供依據(jù)[4]。本研究通過分析AID 患者ANA 熒光模型和滴度的差異以及健康者ANA 檢測情況，結(jié)果顯示1 278例患者ANA的陽性率為56.34%(720/1 278)，其中以核顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主占58.06%，這與Sharmin 等[2]報(bào)告的結(jié)果相近。核顆粒型即HEP-2 細(xì)胞表現(xiàn)為間期細(xì)胞核呈顆粒樣熒光，核仁陰性；分裂期細(xì)胞濃縮染色體陰性，染色體周圍呈顆粒樣熒光。猴肝組織表現(xiàn)為肝細(xì)胞呈顆粒樣熒光，核仁陰性，熒光強(qiáng)度與HEP-2 細(xì)胞基本一致。胞漿型即分裂間期細(xì)胞胞質(zhì)熒光陽性。本研究熒光模型為核顆粒型+胞漿型兩種模型并存陽性標(biāo)本中，女性占比顯著高于男性(P＜0.05)。有研究報(bào)告顯示，性別的免疫系統(tǒng)差異可能進(jìn)一步導(dǎo)致性別特異的發(fā)病率易感性[5]。性激素不僅控制生殖系統(tǒng)，而且還調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的發(fā)育和功能。女性自身免疫中的性別依賴偏差不僅取決于X染色體，還取決于性激素對免疫系統(tǒng)和靶器官的廣泛影響。雌激素一般被認(rèn)為具有免疫刺激作用，因此在AID中具有致病性。例如系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)會在懷孕期間惡化。雖然雌激素如何調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的確切分子機(jī)制尚未完全闡明，但研究表明其控制T 和B 淋巴細(xì)胞的發(fā)育、內(nèi)穩(wěn)態(tài)、基因表達(dá)和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程，從而影響細(xì)胞功能。而雄激素則被認(rèn)為具有免疫抑制作用[6]。先天和適應(yīng)性免疫因子在整個生命過程中因性別而異，導(dǎo)致對自身免疫疾病、癌癥和傳染病的性別特異易感性。

ANA 是一種對DNA 和其他核抗原具有自我反應(yīng)性的標(biāo)記物，不僅存在于多種AID 中，同時在無AID的健康人中也能觀察到。本研究結(jié)果顯示，17.95%(14/78)的健康人ANA 陽性，這與Mariz 等[7]在2011年的報(bào)告結(jié)果相近?？梢娙绻麤]有AID臨床指征，而進(jìn)行ANA 檢測，可能會引起一部分ANA 陽性的健康人群產(chǎn)生不必要的擔(dān)憂和焦慮。而本研究中AID 患者ANA 陽性率顯著高于健康人(P＜0.01)，這與Mariz等[7]的研究結(jié)果一致。本研究通過分析發(fā)現(xiàn)，健康人群雖然存在ANA 陽性，但ANA 滴度多較低，中位數(shù)為1∶100，而AID 患者ANA 滴度中位數(shù)為1∶1 000。一般認(rèn)為，沒有AID的個體其血清自身抗體水平低于具有AID 的個體[8]。但我們發(fā)現(xiàn)有少數(shù)健康人的ANA滴度達(dá)到1∶320，因數(shù)量有限，未能深入展開研究。AID 患者HEP-2 細(xì)胞以顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主，占53.37%(87/163)，但也有核均質(zhì)型、核仁型、著絲點(diǎn)型、核模型的出現(xiàn)。健康人群HEP-2 細(xì)胞雖然也以顆粒型+胞漿型兩種模型并存為主，占57.14%(8/14)，但沒有出現(xiàn)核均質(zhì)型、核仁型、著絲點(diǎn)型、核模型。本研究結(jié)果表明，ANA 的HEP-2 細(xì)胞出現(xiàn)顆粒型+胞漿型兩種模型并存時，鑒別ANA 陽性的AID 患者及健康人時參數(shù)有限，所以還應(yīng)結(jié)合ANA 的HEP-2 細(xì)胞滴度進(jìn)行綜合分析。而對于核均質(zhì)型、核仁型、著絲點(diǎn)型、核模型等特殊核型的出現(xiàn)，ANA 的模型似乎更有臨床觀察價值?？梢娫谂R床工作中，雖然因間接免疫熒光法其高靈敏度而被認(rèn)為是ANA 篩查檢測的金標(biāo)準(zhǔn)，但如果檢測ANA 滴度較低，則不能將其作為獨(dú)立的AID 診斷指標(biāo)?？梢夾NA 滴度對于進(jìn)行準(zhǔn)確的診斷非常重要[9]。但是本研究有一定的局限性，首先沒有對患者及健康人的自身抗體進(jìn)行隨訪，未能夠評估在多年后，健康人群ANA 陽性個體是否出現(xiàn)AID 的體征和癥狀，其ANA的滴度是否上升、ANA 核型是否出現(xiàn)變化等指標(biāo)，以及對于AID患者應(yīng)對治療后自身抗體的變化值進(jìn)行相應(yīng)觀察。其次，本研究僅納入1年患者，樣本量少，未能將AID患者進(jìn)行再次細(xì)化分組分析，且未能將患者進(jìn)行年齡分組研究，因此需要更大樣本量檢測ANA，可能有助于得出更可靠的結(jié)論。