劉 軍，陳 鑫，劉 騫，程運(yùn)斌，沈 菁

（湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所/農(nóng)產(chǎn)品營養(yǎng)品質(zhì)與安全湖北省重點實驗室，武漢 430064）

敵敵畏是一種廣譜性有機(jī)磷類殺蟲、殺螨劑，具備強(qiáng)烈的熏蒸、觸殺和胃毒作用。敵敵畏已在水稻、小麥、玉米、棉花、葉菜類蔬菜、十字花科蔬菜、葉菜類十字花科蔬菜、甘藍(lán)、青菜、白菜、菜豆、黃瓜、柑橘樹、蘋果樹、梨樹、桃樹、桑樹、茶樹等作物上登記使用［1］。中國在茶樹上登記使用的敵敵畏制劑多達(dá)56 種，但中國還未制定敵敵畏在茶葉中的殘留限量。本研究對浙江省、安徽省、湖北省、江西省、廣東省和貴州省茶葉主產(chǎn)區(qū)開展77.5%敵敵畏乳油在茶葉上的農(nóng)藥殘留試驗，分析茶葉（干、鮮）中敵敵畏的殘留行為，并結(jié)合中國居民的膳食數(shù)據(jù)開展敵敵畏在茶葉上的膳食風(fēng)險評估。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國，Waters公司）；CMVC MV 多功能渦旋器（德國，CMVC 公司）；QS60 全自動QuEChERS 凈化儀（睿科集團(tuán)股份有限公司）；TD5Z 離心機(jī)（上海赫田公司）；MS3 旋渦混合器（德國，IKA 公司）；電子天平（美國，MET?TLER TOLEDO 公司）；20、50、100、200 和1 000 μL精密移液槍（德國，Brand 公司）；Milli-Q 型超純水機(jī)（美國，Millipore 公司）及其他實驗室常用儀器設(shè)備。

敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)品（純度98.9%，Dr.Ehrenstorfer 公司）；甲醇（色譜純，J.T.BAKER）；乙腈（色譜純，J.T.BAKER）；乙腈（分析純，國藥集團(tuán)）；醋酸（分析純，國藥集團(tuán)）；甲酸（色譜純，J.T.BAKER）；氨水（色譜純，上海阿拉?。桓呒兯∕illi-Q 型超純水機(jī)制備）。

1.2 田間試驗

按照《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》［2］和《農(nóng)藥登記殘留試驗區(qū)域指南》［3］的要求，選擇浙江省、安徽省、湖北省、江西省、廣東省和貴州省六省開展77.5%敵敵畏乳油在茶葉上的殘留試驗。設(shè)計2 個施藥劑量，即推薦施藥劑量813.75 ga.i./hm2和1.5 倍推薦施藥劑量1 220.63 ga.i./hm2，施藥次數(shù)設(shè)為2 次和3 次，施藥間隔7 d，每種處理設(shè)3 次重復(fù)，每個小區(qū)面積為30 m2。每種處理距離最后一次施藥5、7和10 d 后采集鮮茶葉和干茶葉樣本。每個小區(qū)內(nèi)隨機(jī)選取至少12 個點位采集生長正常、無病害的鮮茶葉樣品2 份。其中，1 份樣品不少于1 kg，制作鮮茶葉樣品，另1 份樣品不少于2 kg，制作干茶葉樣品。同時開展空白對照試驗。

1.3 殘留分析方法

1.3.1 樣品前處理 將茶葉樣品（鮮、干）用食物攪拌機(jī)加干冰打碎成粉狀，準(zhǔn)確稱量2 g 茶葉樣品（鮮、干）于50 mL 離心管。加入10 mL 水渦旋混勻，靜置30 min，再加入15 mL 乙腈-醋酸混合溶液（99∶1，體積比）及提取鹽包和陶瓷均質(zhì)子，劇烈振蕩1 min，以4 200 r/min 的速度離心5 min。吸取上清液1 mL 至QS60 全自動QuEChERS 凈化儀過m-PFC CP 凈化柱，最后將凈化液過0.22 μm 濾膜于2 mL 進(jìn)樣小瓶中，待檢測［4］。

1.3.2 檢測條件 儀器為ACQUITY UPLC Xevo TQ高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀；色譜柱為ACQUI?TY UPLC BEH C18（100 mm×2.1 mm，粒徑1.7 μm）；柱溫為40 ℃；流動相A 相為0.01%甲酸+0.05%氨水水溶液，B 相為甲醇；流速為0.3 mL/min；進(jìn)樣量為1 μL。梯度洗脫條件見表1。

表1 梯度洗脫條件

離子源為電噴霧（ESI）離子源；掃描方式為正離子掃描；檢測方式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式；毛細(xì)管電壓為3.20 kV；離子源溫度為150 ℃；錐孔氣流速為20 L/h；脫溶劑氣溫度為350 ℃；脫溶劑氣流速為650 L/h。

1.4 膳食風(fēng)險評估方法

根據(jù)原衛(wèi)生部2002 年發(fā)布的《中國不同人群消費膳食分組食譜》和權(quán)威參考資料中的中國居民膳食結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)，結(jié)合農(nóng)藥殘留試驗評估獲取的規(guī)范殘留試驗中值和已制定公布的最大殘留限量（MRLs），計算敵敵畏的國家估算每日攝入量（NEDI，mg）［5-8］，計算公式如下。

式中，STMRi表示農(nóng)藥在某食品中的規(guī)范殘留試驗中值（mg/kg）；STMR-Pi表示加工因子校正的規(guī)范殘留試驗中值（mg/kg）；Fi表示一般人群某食品的消費量（kg）。

然后計算膳食攝入風(fēng)險概率（RQ）。

式中，ADI表示農(nóng)藥每日允許攝入量（mg/kg bw）；bw 表示一般人群平均體重（kg），中國一般人群平均體重按63 kg計算。

當(dāng)RQ≤100%時，表示長期膳食攝入風(fēng)險可以接受，RQ值越小表示風(fēng)險越低；當(dāng)RQ>100%時，表示長期膳食攝入風(fēng)險不可接受，RQ值越大表示風(fēng)險越高。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液分別用鮮茶葉空白基質(zhì)和干茶葉空白基質(zhì)稀釋配得0.001、0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200 mg/L 系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在上述儀器條件下測定，以敵敵畏基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度（c）與對應(yīng)定量離子對峰面積（A）作標(biāo)準(zhǔn)曲線。敵敵畏的鮮茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線方程為，A=3.67×105c+16，相關(guān)系數(shù)為r= 0.999 6；敵敵畏的干茶葉基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液曲線方程為，A=3.35×105c+158，相關(guān)系數(shù)為r= 0.999 5。鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏的最小檢出量分別為為2.0×10-4和2.1×10-4ng（3 倍信噪比計算）。

2.2 正確度與精密度

分別在空白鮮茶葉和干茶葉樣品中添加敵敵畏標(biāo)準(zhǔn)溶液，使茶葉中敵敵畏的濃度分別為0.01、0.05、0.5 mg/kg，每個添加水平重復(fù)5 次。鮮茶葉和干茶葉樣品正確度和精密度結(jié)果見表2 和表3。鮮茶葉中敵敵畏的回收率（正確度）在63%～82%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，即精密度）在2%～10%，干茶葉中敵敵畏的回收率在67%～96%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在2%～9%，鮮茶葉和干茶葉的結(jié)果無顯著差異，均符合NY/T 788—2018《農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》的要求。根據(jù)添加回收率試驗結(jié)果，鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏的方法定量限均為0.01 mg/kg，優(yōu)于已發(fā)布標(biāo)準(zhǔn)方法的定量限。

表2 方法的正確度和精密度（鮮茶葉）

表3 方法的正確度和精密度（干茶葉）

2.3 最終殘留量

鮮茶葉樣品的殘留試驗數(shù)據(jù)見表4。由表4 可知，采收間隔期為5 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.017 mg/kg；采收間隔期為7 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.014 mg/kg；采收間隔期為10 d 的鮮茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.010 mg/kg。

表4 鮮茶葉樣品中敵敵畏殘留數(shù)據(jù)

干茶葉樣品的殘留試驗數(shù)據(jù)見表5。由表5 可見，采收間隔期為5 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.024 mg/kg；采收間隔期為7 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.022 mg/kg；采收間隔期為10 d 的干茶葉樣品中敵敵畏的殘留中值為0.010 mg/kg，殘留最大值為0.025 mg/kg。

表5 干茶葉樣品中敵敵畏殘留數(shù)據(jù)

不同采收間隔期采集的鮮茶葉和干茶葉樣品的殘留試驗中值均不超過定量限（0.01 mg/kg）。鮮茶葉樣品中殘留最大值隨著采收間隔期的延長呈降低趨勢，而干茶葉樣品中殘留最大值無顯著性差異。此外，鮮茶葉樣品中殘留最大值要低于干茶葉樣品中殘留最大值，說明干茶葉的制作過程對敵敵畏有一定的濃縮作用，需要引起關(guān)注。

2.4 膳食風(fēng)險評估結(jié)果

根據(jù)查詢的MRL值及殘留試驗中值，建立了敵敵畏在茶葉上殘留的膳食風(fēng)險評估模型，具體見表6。結(jié)合中國農(nóng)藥登記情況和中國居民的人均膳食結(jié)構(gòu)，普通人群敵敵畏的國家估算每日攝入量是0.177 7 mg，風(fēng)險概率（RQ）為71.1%，通常不會對一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險。

表6 風(fēng)險評估計算

3 小結(jié)

本研究建立了適用于鮮茶葉和干茶葉中敵敵畏殘留分析的快速檢測方法，定量限為0.01 mg/kg，正確度和精密度也均能夠滿足農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留分析的要求。2019 年在浙江省紹興市、安徽省黃山市、湖北省武漢市、江西省九江市、廣東省湛江市、貴州省安順市6 地茶葉中敵敵畏殘留試驗結(jié)果表明，不同采收間隔期采集的鮮茶葉和干茶葉樣品的殘留試驗中值均不超過定量限，鮮茶葉樣品中的最大殘留量低于干茶葉樣品，茶葉加工中敵敵畏的殘留存在一定的濃縮效應(yīng)。結(jié)合茶葉上敵敵畏殘留試驗數(shù)據(jù)和中國居民膳食數(shù)據(jù)開展的膳食風(fēng)險評估結(jié)果表明，茶葉中敵敵畏的膳食攝入風(fēng)險概率為71.1%，通常不會對一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險。推薦77.5%敵敵畏乳油用于茶樹防治食葉害蟲時，最大施藥劑量為813.75 ga.i./hm2，最多施藥3 次，安全間隔期設(shè)為7 d。中國尚未制定茶葉中敵敵畏殘留的最大限量值。國際上，僅歐盟和日本規(guī)定了茶葉中敵敵畏的最大殘留限量值，分別為0.02、0.10 mg/kg?；谘芯拷Y(jié)果，建議推薦0.05 mg/kg 作為中國茶葉中敵敵畏殘留的最大限量值。