徐晶 趙學(xué)群

(1.山東科技職業(yè)學(xué)院，山東 濰坊 261053；2.中提(濰坊)生物科技研究有限公司，山東 濰坊 261205)

半夏是天南星科植物半夏Pinelliaternata(Thunb.) Breit.的干燥塊莖。其藥用歷史悠久，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“半夏味辛平，主傷寒，寒熱，心下堅，下氣，咽喉腫痛，頭眩，胸脹，咳逆，腸鳴，止汗”。其性溫、味辛、有毒，具有降逆止嘔、燥濕化痰、消痞散結(jié)的功效[1-2]。半夏主要化學(xué)成分為半夏淀粉、生物堿、膽胡蘿卜苷、草酸鈣、氨基酸、脂肪酸、無機元素、揮發(fā)油等[3]。半夏生品毒性較大，多經(jīng)白礬、生姜、石灰、甘草等輔料炮制后使用，炮制后其毒性明顯降低，藥性和藥效隨之改變[4-5]?！吨腥A人民共和國藥典》(2020年版)收載有清半夏、姜半夏、法半夏三種炮制品，功效各有側(cè)重。清半夏(輔料為白礬)長于燥濕化痰，姜半夏(輔料為生姜、白礬)偏于降逆止嘔，法半夏(輔料為甘草、生石灰)善和胃燥濕。中藥炮制的核心理論是炮制前后化學(xué)成分的變化引起功效的改變[6-8]。半夏中成分復(fù)雜，主要有效成分尚未明確，需要對其有效成分進行評價[9-12]，目前對半夏成分研究越來越多[13-17]，但對半夏炮制品化學(xué)成分的系統(tǒng)分析和炮制品之間的差異性成分的比較少有研究，尚未見較全面的關(guān)于炮制對脂溶性成分和氨基酸含量影響的報道。實驗采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀和氨基酸分析儀對半夏不同炮制品中脂溶性成分和氨基酸進行分析，并比較清半夏、姜半夏、法半夏之間的成分差異，為半夏炮制品的質(zhì)量控制提供參考，也為臨床用藥的有效性和安全性提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1材料與試劑 清半夏、姜半夏、法半夏購于北京同仁堂有限責(zé)任公司，經(jīng)山東師范大學(xué)樊守金教授鑒定，均符合現(xiàn)行藥典標(biāo)準(zhǔn)。

屈臣氏(Watsons)蒸餾水；石油醚(AR)重蒸；甲醇(AR)；鹽酸(AR)；氨基酸混合標(biāo)樣(美國通用電氣公司)；茚三酮溶液(美國通用電氣公司)。

1.2儀器與設(shè)備 320GC-MS毛細(xì)管氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國VARIAN)；Biochrom 31氨基酸分析儀(美國通用電氣)。

1.3方法

1.3.1樣品前處理 脂溶性檢測樣品前處理。清半夏、姜半夏、法半夏各取500 g，粉碎后，各用3 L甲醇滲漉提取3次，每次4 d；分別合并提取液，38 ℃減壓濃縮成粗浸膏。把粗浸膏分散到600 mL蒸餾水中，依次分別用600 mL的(60～90 ℃)石油醚萃取3次，于38 ℃減壓濃縮，再經(jīng)冷凍干燥器凍干后得到萃取物。各取1 mg，分別溶于10 mL甲醇中，超聲溶解后裝入進樣瓶。

氨基酸檢測樣品前處理。取干燥的清半夏、姜半夏、法半夏粉碎后，過20目篩。分別取0.4 g置于安瓿瓶中，加6 mol·L-1的鹽酸溶液20 mL，抽真空后封口，放置110 ℃烘箱內(nèi)水解24 h，取出冷卻過濾，于100 ℃水浴上蒸去鹽酸，至100 mL容量瓶用0.1 mol·L-1鹽酸溶液稀釋定容，過0.45 μm水相微孔的濾膜，即得。

1.3.2分析方法 GC-MS分析方法：氣相色譜條件，色譜柱為VARIAN VF-5 ms(30 m×0.25 mm×0.25 μm)石英毛細(xì)管柱。柱溫60 ℃(保持2 min)，以5 ℃·min-1升溫至120 ℃，保持2 min，再以5 ℃·min-1升溫至280 ℃；進樣口溫度250 ℃；載氣為高純He(99.999%)，載氣流速1 mL·min-1；進樣量1 μL，采用不分流方式進樣；溶劑延遲3 min。質(zhì)譜條件，電離方式為EI，電子能量70 eV，離子源溫度230 ℃，接口溫度280 ℃，掃描質(zhì)量范圍30～500 amu。數(shù)據(jù)處理采用NIST系統(tǒng)質(zhì)譜庫。

氨基酸分析方法：分離柱直徑4.6 mm×40 mm，柱溫50 ℃，緩沖液泵壓9～12 Pa，流速0.5 mL·min-1，茚三酮流速0.4 mL·min-1。

2 結(jié)果與分析

2.1成分檢測結(jié)果

2.1.1脂溶性成分 按上述條件，用GC-MS對清半夏、姜半夏、法半夏脂溶性成分進行了測定，得到了各自的總色譜離子流譜圖(見圖1)。

圖1 清半夏、姜半夏、法半夏脂溶性成分總離子流圖

對總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后獲得相應(yīng)的質(zhì)譜圖。通過工作站NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫進行檢索，結(jié)合相關(guān)文獻進行人工解析[18-19]，確認(rèn)各化合物，按照峰面積歸一化法計算各化合物的相對百分含量，結(jié)果見表1。

表1 清半夏、姜半夏、法半夏脂溶性成分GC-MS分析結(jié)果

續(xù)表1 清半夏、姜半夏、法半夏脂溶性成分GC-MS分析結(jié)果

2.1.2氨基酸成分 取氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液和供試品，使用氨基酸分析儀對清半夏、姜半夏、法半夏的氨基酸成分和含量進行了測定，結(jié)果見表2。

表2 清半夏、姜半夏、法半夏氨基酸含量測定結(jié)果

2.2成分分析

2.2.1脂溶性成分分析 從表1可見，脂溶性成分以酯類、烷烴類、酸類為主。清半夏共分離鑒定出25個色譜峰，姜半夏共分離鑒定出25個色譜峰，法半夏共分離鑒定出19個色譜峰。清半夏主要成分(相對含量大于5%)依次為棕櫚酸(25.34%)、亞麻醇(17.85%)、酞酸二丁酯(11.69%)、間苯二甲酸二辛酯(7.96%)、油酸(6.73%)、反油酸甲酯(5.66%)、棕櫚酸乙酯(5.50%)。姜半夏主要成分依次為酞酸二丁酯(26.04%)、間苯二甲酸二辛酯(16.07%)、反油酸甲酯(8.19%)、棕櫚酸乙酯(6.50%)。法半夏主要成分為酞酸二丁酯(5.49%)。從脂溶性成分組成及分析中可以看出，清半夏和姜半夏主要成分相似，兩者共有化合物23種，法半夏主要成分和含量與前兩者差別較大。其中姜半夏中酞酸二丁酯、棕櫚酸乙酯、反油酸甲酯、環(huán)己基壬烯、間苯二甲酸二辛酯的相對含量要明顯高于清半夏。

2.2.2氨基酸成分分析 從測定結(jié)果看，清半夏和姜半夏均含有16種氨基酸，法半夏中含有15種氨基酸(未檢測到蛋氨酸)。其中檢測出的蘇氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和賴氨酸7種氨基酸為人體必需氨基酸，組氨酸和精氨酸2種氨基酸為半必須氨基酸。清半夏中必需氨基酸含量占總氨基酸總量的40.7%，姜半夏中必需氨基酸含量占總氨基酸總量的40.2%，法半夏中必需氨基酸含量占總氨基酸總量的40.3%。清半夏中半必需氨基酸含量占總氨基酸總量的10.3%，姜半夏中半必需氨基酸含量占總氨基酸總量的10.4%，法半夏中半必需氨基酸含量占總氨基酸總量的10.4%。因此可以看出，半夏不同炮制品含有的必需氨基酸和半必需氨基酸占比基本一致。半夏炮制品總氨基酸含量順序：清半夏>姜半夏>法半夏。

清半夏中氨基酸主要成分(含量大于0.070 g·100 g-1)依次為天冬氨酸(0.138 g·100 g-1)、谷氨酸(0.104 g·100 g-1)、亮氨酸(0.095 g·100 g-1)、纈氨酸(0.090 g·100 g-1)、精氨酸(0.071 g·100 g-1)；姜半夏中氨基酸主要成分(含量大于0.070 g·100 g-1)依次為天冬氨酸(0.144 g·100 g-1)、谷氨酸(0.101 g·100 g-1)、亮氨酸(0.099 g·100 g-1)；法半夏中氨基酸主要成分(含量大于0.070 g·100 g-1)為天冬氨酸(0.072 g·100 g-1)。不同炮制品半夏均以天冬氨酸含量最高，氨基酸種類差別不大，但含量差別較大。

3 討論

對清半夏、姜半夏、法半夏脂溶性成分進行分析和鑒定，脂溶性成分主要含有酯類、烷烴類、酸類，其中清半夏和姜半夏主要成分相似，而法半夏主要成分和含量與前兩者差別較大。清半夏中有機酸(棕櫚酸和油酸)相對含量較高，占總成分的30.07%，而在姜半夏和法半夏中均未檢出，說明炮制工藝的不同使有機酸成分發(fā)生改變。藥理研究證實半夏中總游離有機酸具有止咳、祛痰、體外抑制腫瘤細(xì)胞的作用[20]，棕櫚酸具有抗腫瘤、抗衰老活性[21-22]。三種炮制品中都含有一定量的角鯊烯和環(huán)氧石竹烯。角鯊烯是一種長鏈三萜化合物，可提高機體免疫、抗紫外線、抗衰老、抗疲勞、抗心腦血管疾病等[23]。環(huán)氧石竹烯，可治療皮膚霉菌病，尤其是短期治療甲霉菌病的新的抗真菌劑[24]，同時還具有止傷痛、消炎抗炎作用[25]。由此可見，脂溶性成分中含量較高的化合物如棕櫚酸、角鯊烯和環(huán)氧石竹烯都具有很好的生物活性，為深入研究半夏的藥用價值和綜合開發(fā)其經(jīng)濟價值提供科學(xué)依據(jù)。

對清半夏、姜半夏、法半夏氨基酸成分進行分析和鑒定，氨基酸種類差別不大，但含量差別較大。其中含有的必需氨基酸和半必需氨基酸占比基本一致，且均以天冬氨酸含量最高，但法半夏氨基酸含量顯著降低，可能是因為炮制方法中用到生石灰，與氨基酸發(fā)生反應(yīng)，從而導(dǎo)致法半夏中氨基酸成分和含量降低，因此炮制方法對半夏氨基酸的含量影響比較大。氨基酸具有一定的藥理活性，半夏不同炮制品中含量最高的氨基酸均為天冬氨酸，其次為谷氨酸和亮氨酸。天冬氨酸具有鎮(zhèn)咳祛痰的功效，含量順序為：姜半夏>清半夏>法半夏。谷氨酸含量其次，對肝病、精神分裂癥、神經(jīng)衰弱均有療效，含量順序為：清半夏>姜半夏>法半夏。亮氨酸可以起到氧化供能、促進蛋白質(zhì)合成和提高免疫功能的作用，含量順序為：姜半夏>清半夏>法半夏。另外，甘氨酸具有鎮(zhèn)吐的功效[26]，含量順序為：姜半夏>清半夏>法半夏，與姜半夏偏于降逆止嘔的功效一致。

4 結(jié)論

目前2020年版《中國藥典》一部中對于半夏炮制品未有統(tǒng)一氨基酸鑒別標(biāo)準(zhǔn)[27]，清半夏的鑒別有精氨酸、丙氨酸、纈氨酸和亮氨酸，姜半夏和法半夏未有氨基酸的鑒別。而氨基酸是反映半夏炮制品活性和炮制品質(zhì)的重要成分，因此建議將精氨酸、丙氨酸、纈氨酸和亮氨酸，以及具有鎮(zhèn)咳祛痰的功效的天冬氨酸，作為統(tǒng)一評價半夏不同炮制品質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。對半夏不同炮制品含量進行測定，可以為半夏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范化提供參考，為進一步探討半夏炮制品的藥理作用和開發(fā)利用提供了科學(xué)依據(jù)。