徐利亞 李瑞敏 魏紅立 侯文欣 崔瀟瑜 劉運(yùn)其

摘要：目的：探討復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸、女貞子和刺五加的鑒別方法。方法：用顯微鑒別的方法探討人參、山茱萸及女貞子的顯微特征;用薄層色譜的方法鑒別刺五加。結(jié)果：顯微鏡下人參、山茱萸、女貞子的顯微特征明顯，刺五加的薄層色譜斑點(diǎn)顯色清晰，分離度較好。結(jié)論：建立的方法準(zhǔn)確，重復(fù)性好，操作簡(jiǎn)單，為復(fù)方斑蝥膠囊的質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：復(fù)方斑蝥膠囊;顯微鑒別;薄層色譜;質(zhì)量控制

復(fù)方斑蝥膠囊主要由斑蝥、人參、黃芪、刺五加、山茱萸、女貞子等11味中藥組成，是一種抗癌藥物。具有破血消瘀、攻毒蝕瘡之功效，可用于治療原發(fā)性肝癌、肺癌、直腸癌[1]、婦科惡性腫瘤、惡性淋巴瘤等。人參味甘、微苦而性微溫，具有的“大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫”之功效，刺五加益氣健脾，補(bǔ)腎安神[2];山茱萸補(bǔ)益肝腎，收澀固脫，女貞子滋補(bǔ)肝腎、明目烏發(fā)，抗腫瘤。復(fù)方斑蝥膠囊可提高患者免疫力，激活抑癌基因，又能殺死癌細(xì)胞，有著雙重治療作用。本實(shí)驗(yàn)增加了制劑中藥材原粉的顯微鑒別和刺五加的薄層色譜鑒別，以控制這幾味要的質(zhì)量，防止不法分子利用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)違法亂紀(jì)。

1、實(shí)驗(yàn)儀器和材料

1.1 儀器

奧林巴斯顯微鏡（OLYMPUS BX53 DP21）、數(shù)控超聲波清洗器（天大天發(fā)KQ-600DE）、硅膠G板（青島海洋化工廠）。

1.2 試藥

復(fù)方斑蝥膠囊（重慶希爾安藥業(yè)有限公司，批號(hào)：200202-1;貴州益佰制藥股份有限公司，批號(hào)：200706;陜西方舟制藥有限公司，批號(hào)：200101 053）。刺五加對(duì)照藥材（中國(guó)食品藥品檢定研究院;批號(hào)：120991-201610）

2方法與結(jié)果

2.1 人參、山茱萸和女貞子的顯微鑒別

本研究采用顯微鑒別方法檢查復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸和女貞子的質(zhì)量狀況。結(jié)果可見(jiàn)其相應(yīng)組織特征。詳見(jiàn)圖1。

取三個(gè)廠家的樣品，研細(xì)，取適量置于載玻片上，滴加水合氯醛試液，酒精燈加熱透化，再蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察，分別在正常光和偏振光下觀察并拍攝照片，白色背景為正常光下拍攝，黑色背景為偏振光下拍攝。

通過(guò)顯微鏡可明顯看到人參、山茱萸及女貞子的顯微特征，具體特征為：草酸鈣簇晶直徑20～68μm，棱角尖銳，偏光顯微鏡下呈五彩色（人參）[2]。纖維少數(shù)，直徑9～40μm，紋孔點(diǎn)狀或“人”字狀，偏光顯微鏡下呈黃白色（山茱萸）[2，4]。外果皮表皮細(xì)胞段面觀呈類扁圓形或類多角形，外壁角質(zhì)層增厚，胞腔被伸入的外壁分隔成若干個(gè)不規(guī)則的小腔，內(nèi)含黃棕色物（女貞子）[2，4]。

2.2 刺五加的薄層色譜鑒別

取本品內(nèi)容物2.5g，加80 %甲醇50ml超聲提取30min ， 濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml溶解，轉(zhuǎn)至分液漏斗中， 用乙醚提取2次，每次15ml，棄去乙醚液，再用三氯甲烷提取2次，每次10ml，合并三氯甲烷液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。取刺五加對(duì)照藥材1g同法制成對(duì)照藥材溶液。按制劑處方取扣除刺五加外的其他藥材依法制成陰性對(duì)照溶液。照薄層色譜法，吸取上述三種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（9：4：1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)， 取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。且陰性對(duì)照無(wú)干擾，斑點(diǎn)清晰，分離度符合要求，詳見(jiàn)圖2。

3 討論

人參、山茱萸、女貞子原粉入藥，顯微鏡下觀察這三味藥顯微特征明顯，可作一項(xiàng)鑒別對(duì)這三味藥進(jìn)行質(zhì)量控制。

刺五加的薄層鑒別中，提取溶劑考察過(guò)乙醇、甲醇、80%甲醇，經(jīng)實(shí)驗(yàn)，80%甲醇提取效率最高，干擾斑點(diǎn)最少。展開(kāi)劑考察了環(huán)己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇和三氯甲烷-甲醇，分離度及斑點(diǎn)清晰程度都不如以甲苯-乙酸乙酯-甲酸為展開(kāi)劑展開(kāi)的效果。在不同溫濕度條件下對(duì)薄層鑒別方法進(jìn)行了考察，結(jié)果標(biāo)明重現(xiàn)性較好。還試驗(yàn)了不同廠家的薄層板，結(jié)果均能很好的呈現(xiàn)。

綜上所述，復(fù)方斑蝥膠囊中人參、山茱萸、女貞子顯微特征明顯，可建立鑒別項(xiàng)用于控制這三味藥的質(zhì)量。刺五加的薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離度符合要求。本研究中的兩種鑒別方法均可為復(fù)方斑蝥膠囊的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 胡自康，李維，蘇春志，等.復(fù)方斑蝥膠囊聯(lián)合化療用于直腸癌根治術(shù)后患者的臨床療效[J].中國(guó)藥物經(jīng)濟(jì)學(xué).2019，（3）：80-83.

中華人民共和國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2020.216.