佘永紅，楊德泉

(湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所，湖南 吉首 416000)

土家藥黃瓜香，又名蔓莖堇菜、七星蓮、黃花草、毛毛香，為堇菜科植物蔓莖堇菜(VioladiffusaGing.)的全草，土家語(yǔ)名“拍替塔王嘎那”.《土家族醫(yī)藥學(xué)》[1]、《土家族藥學(xué)》[2]、《實(shí)用土家族藥物》[3]等載其性冷，味甜、微苦，具有益精助孕，生血補(bǔ)虛，敗毒消腫，中和藥毒等功效；主要用于治療精虧不孕，血虛癥，癰瘡諸毒，藥物中毒，跌打損傷，燙傷等.在二十世紀(jì)八十年代，湘西自治州人民醫(yī)院用黃瓜香全草蒸雞服用方法，治療再生障礙性貧血，湖南省人民醫(yī)院和湖南省勞動(dòng)衛(wèi)生研究所用黃瓜香提取物治療再生障礙性貧血，均獲得一定療效[4].藥理研究表明，黃瓜香具有抗菌、抗炎、調(diào)控免疫、利膽保肝、抗腫瘤、抗氧化等作用[5-11].在醫(yī)藥市場(chǎng)中，黃瓜香存在同名異物現(xiàn)象，如百合科油點(diǎn)草屬植物黃花油點(diǎn)草(Tricyrtismaculata(D. Don) Machride)的干燥全草，藥材名也為黃瓜香[12]，其功效為潤(rùn)肺止咳、理氣止痛、散結(jié)，與堇菜科植物蔓莖堇菜的黃瓜香功效完全不同.為科學(xué)地鑒別土家藥黃瓜香(蔓莖堇菜)藥材，筆者用黃瓜香(蔓莖堇菜)對(duì)照藥材作為對(duì)照，研究建立黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法，以期為黃瓜香藥材的鑒別提供技術(shù)支持.

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑

AUW220D電子天平(日本島津公司)；KM5200DE型超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司)；GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上?？普苌萍加邢薰?.硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司，批號(hào)2017年3月2日，10 cm×20 cm)；硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號(hào)2018年5月15日，10 cm×20 cm)；硅膠G高效薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號(hào)2021年5月28日，10 cm×20 cm).本研究所用試劑的純度均為分析純，水為純化水.

1.2 對(duì)照品與樣品

1.2.1 對(duì)照藥材 筆者在吉首市寨陽(yáng)村采集了黃瓜香對(duì)照藥材，經(jīng)佘永紅主任藥師鑒定為堇菜科植物蔓莖堇菜的全草(圖1).

圖1 黃瓜香植物Fig. 1 Viola diffusa Plants

1.2.2 實(shí)驗(yàn)樣品及來源 2022年4月中旬，筆者在吉首市紅楓林場(chǎng)采集了黃瓜香藥材1號(hào)樣品；2022年5月上旬，筆者在吉首市寨陽(yáng)村采集了黃瓜香藥材2號(hào)樣品.采集的樣品，均洗凈，干燥，備用.

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀

本品多皺縮成團(tuán).主根呈長(zhǎng)圓錐形，直徑2～5 mm，淡黃色至黃棕色，有稀縱皺紋，具多條細(xì)小須根；葉基生，上表面深綠色，下表面灰綠色，展平后葉片呈卵形或卵狀長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)1.5～3.5 cm，寬1～2 cm，先端鈍或稍尖，基部寬楔形，下延于葉柄，邊緣具鈍齒，葉柄具明顯的翅(圖2).

圖2 黃瓜香藥材Fig. 2 Viola diffusa Herbal Medicine

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根的橫切面 根的橫切面呈類圓形.表皮2～3列薄壁細(xì)胞組成，排列疏松.皮層寬廣，細(xì)胞類圓形，薄壁細(xì)胞由外向內(nèi)體積逐漸減小，細(xì)胞間隙不發(fā)達(dá)；木質(zhì)部發(fā)達(dá)，導(dǎo)管單個(gè)或2～6個(gè)聚集而成；韌皮部呈壓扁皺縮狀，環(huán)繞木質(zhì)部排列；無形成層；維管束為有限外韌型(圖3).

2.2.2葉的下表面特征 單細(xì)胞非腺毛，有的略彎曲，基部稍膨大，末端狹尖，長(zhǎng)20～40 μm，直徑4～8 μm.氣孔多數(shù)呈直軸式，少數(shù)不等式(圖4).

圖3 黃瓜香根橫切面Fig. 3 Viola diffusa Root Cross Section

圖4 黃瓜香葉的下表面特征Fig. 4 Viola diffusa Leaf Cross Section

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液制備 稱取黃瓜香藥材樣品粉末(過2號(hào)篩)1 g，加入乙醇30 mL，稀鹽酸10 mL，超聲處理20 min，過濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)偌? mL乙醇溶解，過濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)? mL乙醇溶解，作為供試品溶液.

2.3.2 對(duì)照藥材溶液制備 稱取黃瓜香對(duì)照藥材粉末(過2號(hào)篩)1 g，同2.3.1節(jié)方法制成對(duì)照藥材溶液.

2.3.3 鑒別方法 按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典2020年版》四部通則0502)試驗(yàn)方法，吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(體積比10∶8∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置于紫外光燈(365 nm)下檢視.

結(jié)果顯示，供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，均呈現(xiàn)出相同顏色的斑點(diǎn)(圖5).

S—黃瓜香對(duì)照藥材;1—黃瓜香藥材1號(hào)；2—黃瓜香藥材2號(hào).圖5 黃瓜香薄層色譜圖Fig. 5 Thin Layer Chromatogram of Viola diffusa

2.3.4 耐用性考察 采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的薄層硅膠G薄層板，分別在不同的濕度、溫度條件下，按2.3.3節(jié)方法實(shí)驗(yàn).

(1)硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司，批號(hào)：2017年3月2日)，溫度：28.1 ℃，濕度：70%.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6.

(2)硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠，批號(hào)：2018年5月15日)，溫度：19.8 ℃，濕度：42%.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖7.

S—黃瓜香對(duì)照藥材；1—黃瓜香藥材1號(hào)；2—黃瓜香藥材2號(hào).圖6 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(1)Fig. 6 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (1)

S—黃瓜香對(duì)照藥材；1—黃瓜香藥材1號(hào)；2—黃瓜香藥材2號(hào).圖7 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(2)Fig. 7 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (2)

從圖6、圖7可以看出，耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的色譜斑點(diǎn)清晰，分離度較好，結(jié)果穩(wěn)定，表明本方法耐用性能較好.

3 討論

黃瓜香為全草類藥材，葉多且易碎.本研究選擇黃瓜香根的橫切面和葉的下表皮顯微結(jié)構(gòu)，作為鑒別特征，方法易于操作，能夠鑒別黃瓜香藥材.彭源貴等[13]報(bào)道黃瓜香中含赪桐留醇、棕櫚酸等化學(xué)成分，戴嬌嬌[14]分離鑒定了黃瓜香中化學(xué)成分，其中包含了表木栓酮、木栓酮、桐甾醇、violaic A、violaic B、violaide、clerosterol galactoside、decorinone、decortinol、isodecortinol、stigmast-25-ene-3β,5α,6β-triol、cerevisterol.因以上成分缺乏市場(chǎng)供應(yīng)，故采用已知黃瓜香的單體成分作為對(duì)照品，建立黃瓜香薄層色譜鑒別方法的條件尚不成熟.因此，本研究以黃瓜香(蔓莖堇菜)對(duì)照藥材作為對(duì)照，研究建立了黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法，在不同實(shí)驗(yàn)條件下，供試品與對(duì)照藥材色譜一致，色譜斑點(diǎn)分離清楚.表明該方法穩(wěn)定性好，可以作為土家藥黃瓜香藥材的鑒別方法.

本研究建立的黃瓜香顯微組織鑒別方法和薄層色譜鑒別方法，具有方法簡(jiǎn)便，穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于黃瓜香藥材的質(zhì)量控制.