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        土家藥材黃瓜香的顯微特征及其薄層色譜鑒別*

        2022-02-17 02:15:36佘永紅楊德泉
        關(guān)鍵詞:堇菜鑒別方法薄層

        佘永紅,楊德泉

        (湘西土家族苗族自治州食品藥品檢驗(yàn)所,湖南 吉首 416000)

        土家藥黃瓜香,又名蔓莖堇菜、七星蓮、黃花草、毛毛香,為堇菜科植物蔓莖堇菜(VioladiffusaGing.)的全草,土家語(yǔ)名“拍替塔王嘎那”.《土家族醫(yī)藥學(xué)》[1]、《土家族藥學(xué)》[2]、《實(shí)用土家族藥物》[3]等載其性冷,味甜、微苦,具有益精助孕,生血補(bǔ)虛,敗毒消腫,中和藥毒等功效;主要用于治療精虧不孕,血虛癥,癰瘡諸毒,藥物中毒,跌打損傷,燙傷等.在二十世紀(jì)八十年代,湘西自治州人民醫(yī)院用黃瓜香全草蒸雞服用方法,治療再生障礙性貧血,湖南省人民醫(yī)院和湖南省勞動(dòng)衛(wèi)生研究所用黃瓜香提取物治療再生障礙性貧血,均獲得一定療效[4].藥理研究表明,黃瓜香具有抗菌、抗炎、調(diào)控免疫、利膽保肝、抗腫瘤、抗氧化等作用[5-11].在醫(yī)藥市場(chǎng)中,黃瓜香存在同名異物現(xiàn)象,如百合科油點(diǎn)草屬植物黃花油點(diǎn)草(Tricyrtismaculata(D. Don) Machride)的干燥全草,藥材名也為黃瓜香[12],其功效為潤(rùn)肺止咳、理氣止痛、散結(jié),與堇菜科植物蔓莖堇菜的黃瓜香功效完全不同.為科學(xué)地鑒別土家藥黃瓜香(蔓莖堇菜)藥材,筆者用黃瓜香(蔓莖堇菜)對(duì)照藥材作為對(duì)照,研究建立黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法,以期為黃瓜香藥材的鑒別提供技術(shù)支持.

        1 儀器與試藥

        1.1 儀器與試劑

        AUW220D電子天平(日本島津公司);KM5200DE型超聲波清洗器(昆山美美超聲儀器有限公司);GoodSee-10型薄層色譜成像儀(上??普苌萍加邢薰?.硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司,批號(hào)2017年3月2日,10 cm×20 cm);硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠,批號(hào)2018年5月15日,10 cm×20 cm);硅膠G高效薄層板(青島海洋化工廠分廠,批號(hào)2021年5月28日,10 cm×20 cm).本研究所用試劑的純度均為分析純,水為純化水.

        1.2 對(duì)照品與樣品

        1.2.1 對(duì)照藥材 筆者在吉首市寨陽(yáng)村采集了黃瓜香對(duì)照藥材,經(jīng)佘永紅主任藥師鑒定為堇菜科植物蔓莖堇菜的全草(圖1).

        圖1 黃瓜香植物Fig. 1 Viola diffusa Plants

        1.2.2 實(shí)驗(yàn)樣品及來源 2022年4月中旬,筆者在吉首市紅楓林場(chǎng)采集了黃瓜香藥材1號(hào)樣品;2022年5月上旬,筆者在吉首市寨陽(yáng)村采集了黃瓜香藥材2號(hào)樣品.采集的樣品,均洗凈,干燥,備用.

        2 方法與結(jié)果

        2.1 藥材性狀

        本品多皺縮成團(tuán).主根呈長(zhǎng)圓錐形,直徑2~5 mm,淡黃色至黃棕色,有稀縱皺紋,具多條細(xì)小須根;葉基生,上表面深綠色,下表面灰綠色,展平后葉片呈卵形或卵狀長(zhǎng)圓形,長(zhǎng)1.5~3.5 cm,寬1~2 cm,先端鈍或稍尖,基部寬楔形,下延于葉柄,邊緣具鈍齒,葉柄具明顯的翅(圖2).

        圖2 黃瓜香藥材Fig. 2 Viola diffusa Herbal Medicine

        2.2 顯微鑒別

        2.2.1 根的橫切面 根的橫切面呈類圓形.表皮2~3列薄壁細(xì)胞組成,排列疏松.皮層寬廣,細(xì)胞類圓形,薄壁細(xì)胞由外向內(nèi)體積逐漸減小,細(xì)胞間隙不發(fā)達(dá);木質(zhì)部發(fā)達(dá),導(dǎo)管單個(gè)或2~6個(gè)聚集而成;韌皮部呈壓扁皺縮狀,環(huán)繞木質(zhì)部排列;無形成層;維管束為有限外韌型(圖3).

        2.2.2葉的下表面特征 單細(xì)胞非腺毛,有的略彎曲,基部稍膨大,末端狹尖,長(zhǎng)20~40 μm,直徑4~8 μm.氣孔多數(shù)呈直軸式,少數(shù)不等式(圖4).

        圖3 黃瓜香根橫切面Fig. 3 Viola diffusa Root Cross Section

        圖4 黃瓜香葉的下表面特征Fig. 4 Viola diffusa Leaf Cross Section

        2.3 薄層色譜鑒別

        2.3.1 供試品溶液制備 稱取黃瓜香藥材樣品粉末(過2號(hào)篩)1 g,加入乙醇30 mL,稀鹽酸10 mL,超聲處理20 min,過濾,濾液水浴蒸干,殘?jiān)偌? mL乙醇溶解,過濾,濾液水浴蒸干,殘?jiān)? mL乙醇溶解,作為供試品溶液.

        2.3.2 對(duì)照藥材溶液制備 稱取黃瓜香對(duì)照藥材粉末(過2號(hào)篩)1 g,同2.3.1節(jié)方法制成對(duì)照藥材溶液.

        2.3.3 鑒別方法 按照薄層色譜法(《中國(guó)藥典2020年版》四部通則0502)試驗(yàn)方法,吸取供試品溶液、對(duì)照藥材溶液各5 μL,分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層色譜板上,以甲苯-三氯甲烷-丙酮(體積比10∶8∶3)為展開劑,展開,取出,晾干,置于紫外光燈(365 nm)下檢視.

        結(jié)果顯示,供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上,均呈現(xiàn)出相同顏色的斑點(diǎn)(圖5).

        S—黃瓜香對(duì)照藥材;1—黃瓜香藥材1號(hào);2—黃瓜香藥材2號(hào).圖5 黃瓜香薄層色譜圖Fig. 5 Thin Layer Chromatogram of Viola diffusa

        2.3.4 耐用性考察 采用2個(gè)不同生產(chǎn)廠家的薄層硅膠G薄層板,分別在不同的濕度、溫度條件下,按2.3.3節(jié)方法實(shí)驗(yàn).

        (1)硅膠G薄層板(青島海浪干燥劑有限公司,批號(hào):2017年3月2日),溫度:28.1 ℃,濕度:70%.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6.

        (2)硅膠G薄層板(青島海洋化工廠分廠,批號(hào):2018年5月15日),溫度:19.8 ℃,濕度:42%.實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖7.

        S—黃瓜香對(duì)照藥材;1—黃瓜香藥材1號(hào);2—黃瓜香藥材2號(hào).圖6 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(1)Fig. 6 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (1)

        S—黃瓜香對(duì)照藥材;1—黃瓜香藥材1號(hào);2—黃瓜香藥材2號(hào).圖7 黃瓜香薄層色譜耐用性考察(2)Fig. 7 Durability of Viola diffusa Through Thin Layer Chromatography (2)

        從圖6、圖7可以看出,耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的色譜斑點(diǎn)清晰,分離度較好,結(jié)果穩(wěn)定,表明本方法耐用性能較好.

        3 討論

        黃瓜香為全草類藥材,葉多且易碎.本研究選擇黃瓜香根的橫切面和葉的下表皮顯微結(jié)構(gòu),作為鑒別特征,方法易于操作,能夠鑒別黃瓜香藥材.彭源貴等[13]報(bào)道黃瓜香中含赪桐留醇、棕櫚酸等化學(xué)成分,戴嬌嬌[14]分離鑒定了黃瓜香中化學(xué)成分,其中包含了表木栓酮、木栓酮、桐甾醇、violaic A、violaic B、violaide、clerosterol galactoside、decorinone、decortinol、isodecortinol、stigmast-25-ene-3β,5α,6β-triol、cerevisterol.因以上成分缺乏市場(chǎng)供應(yīng),故采用已知黃瓜香的單體成分作為對(duì)照品,建立黃瓜香薄層色譜鑒別方法的條件尚不成熟.因此,本研究以黃瓜香(蔓莖堇菜)對(duì)照藥材作為對(duì)照,研究建立了黃瓜香(蔓莖堇菜)的薄層色譜鑒別方法,在不同實(shí)驗(yàn)條件下,供試品與對(duì)照藥材色譜一致,色譜斑點(diǎn)分離清楚.表明該方法穩(wěn)定性好,可以作為土家藥黃瓜香藥材的鑒別方法.

        本研究建立的黃瓜香顯微組織鑒別方法和薄層色譜鑒別方法,具有方法簡(jiǎn)便,穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn),可用于黃瓜香藥材的質(zhì)量控制.

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