亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        白及多糖提取工藝及抑菌活性檢測*

        2022-02-17 02:18:26羅玲麗匡勇斌馮秋菊
        關(guān)鍵詞:白及提取液化妝品

        羅玲麗,匡勇斌,喻 淅,張 滔,馮秋菊

        (吉首大學(xué)藥學(xué)院,湖南 吉首 416000)

        白及(Bletillastriata),又名連及草、雪如末、甘根,是蘭科白及屬多年生草本植物[1].味苦、甘、澀、性涼,有止血止痛的功效,常被作為一種止血藥物在臨床上推廣使用[2].研究發(fā)現(xiàn)白及中富含大量的粘膠類物質(zhì),其主要成分是葡萄糖甘露聚糖,可溶于水形成比較粘稠的親水膠液,而白及的止血作用正是與其含有的粘膠類成分有關(guān)[3].白及膠有特殊的黏度特性,其理化性質(zhì)與阿拉伯膠類似,是一種低毒、安全的高分子聚合物,通過相關(guān)藥物活性成分的研究和表征,發(fā)現(xiàn)白及多糖有多種藥理作用,包括抗病毒[4]、抗菌[5-6]、抗氧化[7]和保濕[8]等功效.

        目前,市場上的各種化妝品幾乎全是“化學(xué)化妝品”,其主要原料或半成品基本上是高級脂肪酸族化合物.近年來,具有抗氧化、保濕、美白等功效的天然產(chǎn)物護(hù)膚制品所占有的消費(fèi)市場正在逐步擴(kuò)大.天然浸提物化妝品的配料中主要含有植物浸提物或天然配料,其中所含有的合成化學(xué)配料較少或含量極低,將天然藥物活性成分加入到化妝品中,產(chǎn)品針對性強(qiáng),性能較穩(wěn)定,護(hù)膚效力持久,作用溫和,刺激小,安全系數(shù)較高.植物成分提取方法簡易便行,添加后制得的相應(yīng)產(chǎn)品療效顯著且毒副作用小,因而在國內(nèi)化妝品研發(fā)領(lǐng)域備受關(guān)注.現(xiàn)代研究較多探討白及植物的化學(xué)成分及生物活性,有關(guān)該屬植物民間傳統(tǒng)護(hù)膚利用的報(bào)道較少.為了開發(fā)效果更好的藥妝用品,本研究將提取武陵山區(qū)白及的有效活性成分,并將其添加于現(xiàn)代化妝品中,制成天然植物白及系列化妝品,如白及膏.

        本研究對白及多糖的提取工藝和抑菌作用進(jìn)行了初步探討,為后續(xù)白及膏的制作奠定了一定的基礎(chǔ).依據(jù)相似相溶原理采用適宜的溶劑萃取白及中多糖,根據(jù)溶劑性質(zhì)的不同,提取方法有熱水浸提法[9]、酸提法[10]和堿提法[11]等.因?yàn)槎嗵鞘菢O性大分子化合物,不溶于有機(jī)溶劑[10],因此本研究采用水提醇沉法來提取白及多糖.本研究對白及多糖水提條件進(jìn)行正交優(yōu)化設(shè)計(jì)研究,設(shè)置不同料液比、提取溫度、提取時(shí)間,以多糖提取率為指標(biāo),確定不同因素條件下的最佳提取條件,將提取的白及多糖粗品按照一定配比制得白及膏,對白及膏進(jìn)行抑菌性能檢測,旨在為白及化妝品行業(yè)的綜合開發(fā)利用提供參考依據(jù),拓展中藥白及的藥用范圍和開發(fā)利用價(jià)值.

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器

        材料:白及(購自藥店,產(chǎn)自貴州);試劑:濃硫酸、蒽酮、氯仿、Na2HPO4、KH2PO4、正丁醇、牛肉膏、蛋白胨等(所有試劑純度均為分析純).

        儀器:旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(RE 2000A);電子天平;電熱鼓風(fēng)干燥箱(BGZ-76);萬能粉碎機(jī);醫(yī)用離心機(jī)(L530);真空干燥箱(BZF-50);立式壓力蒸汽滅菌器(YXQ-LS-50SII).

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 白及原材料的預(yù)處理 將購買的白及飲片平鋪于烘盤中,于60 ℃的熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱中干燥至恒重,使用中藥粉碎機(jī)粉碎,過20目篩后裝入密封袋備用.

        1.2.2 白及多糖的提取 準(zhǔn)確稱取白及粉末3 g,置于錐形瓶中,加入75 mL蒸餾水,在80 ℃恒溫水浴鍋中恒溫提取2.0 h,將得到的提取液過4層紗布,收集濾液,濃縮得到一定體積的水提物,向濃縮后的濾液中加入Sevage試劑(氯仿∶正丁醇體積比為5∶1),濾液與Sevage試劑的體積比為5∶1,充分振蕩搖勻,于高速離心機(jī)3 500 r/min下離心15 min,取上清液,加入與上清液同等體積的95%乙醇,充分?jǐn)嚢韬?,密封,室溫下醇?.0 h,抽濾,濃縮到一定體積后進(jìn)行真空干燥,獲得白及總多糖粗品,對其稱重后暫存冰箱備用.

        1.2.3 白及多糖的測定 參照張曉靜[12]的方法,精密稱取干燥的無水葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品配制成0.1 g/L的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液,吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2 mL于試管中,分別加水至2 mL,在冰水浴中加入0.2%蒽酮-濃硫酸溶液8.0 mL,置于沸水浴中反應(yīng)10 min,取出置于冰水浴中10 min.以0.0 g/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白對照,在620 nm波長條件下測定各溶液的吸光值A(chǔ)bs.以葡萄糖的濃度作為X軸,Abs值作為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程Y=5.581 0X+0.026 4,R2=0.993.準(zhǔn)確吸取2.0 mL白及總多糖溶液代替葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液,并按照上述流程進(jìn)行實(shí)驗(yàn),重復(fù)3次,于620 nm波長下測定樣品的吸光度,按照下列公式計(jì)算白及的總多糖提取率:

        白及總多糖提取率W=(C×V/m)×100%.

        其中:C為樣品中多糖的質(zhì)量濃度,g/L;V為樣品的定容體積,mL;m為白及粉末干重,g.

        1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 按1.2.2節(jié)方法提取制備白及多糖粗品,以料液比1∶25(g∶mL)、提取溫度80 ℃、提取時(shí)間2.0 h、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇為基礎(chǔ)水平,依次考察白及總多糖提取工藝中料液比(1∶20,1∶25,1∶30,1∶35,1∶40(g∶mL)),提取溫度(50,60,70,80,90 ℃),提取時(shí)間(2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 h)對提取率的影響(表1).在考察單一因素影響時(shí),其他影響因素水平與基礎(chǔ)水平保持一致,以白及總多糖提取率為指標(biāo),繪制各因素對白及多糖提取率的影響曲線圖.

        表1 白及總多糖提取單因素實(shí)驗(yàn)水平表

        1.2.5 正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn) 以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為基礎(chǔ),考慮經(jīng)濟(jì)成本和操作等因素,選擇料液比、提取溫度和提取時(shí)間進(jìn)行3因素3水平設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn),因素水平表見表2.

        表2 白及總多糖正交實(shí)驗(yàn)因素水平表

        1.2.6 抑菌研究 將大腸桿菌、金黃色葡萄球菌菌種接種于牛肉膏蛋白胨的斜面培養(yǎng)基中,在37 ℃的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24.0 h,用無菌生理鹽水稀釋制成菌懸液.用打孔器將吸水性較強(qiáng)的濾紙打成直徑為6.0 mm的圓形濾紙片,烘干滅菌后分別浸泡于質(zhì)量濃度為0.01,0.02,0.03,0.04,0.05,0.33,0.66 g/mL的白及提取物中,浸泡時(shí)間為2.0 h,浸泡后再烘干備用.對照組則浸泡在無菌水中,其他處理?xiàng)l件同前.

        抑菌實(shí)驗(yàn)操作如下:用移液器移取300 μL菌懸液于牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基上,用三角形涂布器將菌懸液均勻涂于培養(yǎng)基上,用白及提取物浸泡處理過的濾紙貼于平板上,每個(gè)平板貼3片,其中1片為空白對照,放入37 ℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)24.0 h后,取出測定抑菌圈直徑,比較抑菌效果.每種細(xì)菌平行接種3個(gè)平板.

        白及膏化妝品配方:參考馬世宏等[13]工藝方法,對其進(jìn)行改進(jìn),按照雙氧水∶甘油∶丙二醇體積比為5∶3∶3的比例配置A相組分,二甲基硅油∶羊毛脂∶硬脂酸∶十六醇體積比為2∶3∶2∶2的比例配置B相組分,白及提取物∶去離子水體積比為3∶7的比例配置C相組分.將B相攪拌加熱至85 ℃,保溫20 min;A相與C相攪拌加熱至45 ℃,將B相加入A相與C相混合液中,合并在乳化設(shè)備中乳化30 min,冷卻至45 ℃,加入C相攪拌均勻后冷卻至40 ℃出料,制得成品后取1 mg溶于1 mL無菌水中備用,進(jìn)行抑菌測試,方法與白及多糖提取液測定方法相同.將藥店購買的一夫百應(yīng)抑菌膏作為陽性對照,同法測定其抑菌性.

        表3 白及膏配方

        2 結(jié)果

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

        使用蒽酮-濃硫酸法測定白及提取物的總多糖,以葡萄糖溶液作為對照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,如圖1所示.

        圖1 葡萄糖溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig. 1 Glucose Standard Curve

        2.2 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        2.2.1 料液比對白及多糖提取率的影響 如圖2所示,在料液比為1∶20~1∶35(g∶mL)范圍內(nèi),隨著提取溶劑的體積不斷增大,白及多糖提取率也不斷增加,當(dāng)料液比為1∶35(g∶mL)時(shí),白及多糖提取率達(dá)到最大值17.09%,而繼續(xù)增大料液比,白及多糖提取率呈現(xiàn)下降趨勢,可能是由于在料液比為1∶35(g∶mL)時(shí)達(dá)到了白及多糖提取的最大飽和,因此本研究選擇1∶35(g∶mL)作為最優(yōu)料液比.

        圖2 料液比對白及多糖提取率的影響Fig. 2 Effect of Material to Liquid Ratio on Bletilla striata Polysaccharide Extraction Efficiency

        2.2.2 提取溫度對白及多糖提取率的影響 如圖3所示,溫度從50 ℃升高到90 ℃,隨著提取溫度的不斷升高,白及多糖提取率也逐漸增加,可能是因?yàn)闇囟鹊纳呒觿×朔肿訜徇\(yùn)動(dòng)和分子擴(kuò)散運(yùn)動(dòng),這有利于白及多糖的溶出,從而增加了白及多糖提取率.在80 ℃前后,白及多糖提取率的變化前者大于后者,可能是較高的溫度對白及多糖產(chǎn)生了分解破壞作用,因而提取率的增加幅度有所降低.因此本研究選擇80 ℃作為最優(yōu)提取溫度.

        圖3 提取溫度對白及多糖提取率的影響Fig. 3 Effect of Temperature on Total Bletilla striata Polysaccharide Extraction Efficiency

        2.2.3 提取時(shí)間對白及多糖提取率的影響 如圖4所示,提取時(shí)間從2 h延長至6 h,隨著提取時(shí)間的延長,白及多糖提取率不斷增加,可能是因?yàn)樘崛r(shí)間越長,越能夠使白及多糖充分地溶解出來.白及多糖提取率在3 ~ 4 h的變化率大于4 ~ 5 h,考慮到實(shí)際情況,本研究選擇4 h作為最優(yōu)提取時(shí)間.

        圖4 提取時(shí)間對白及多糖提取率的影響Fig. 4 Effect of Time on Total Bletilla striata Polysaccharide Extraction Efficiency

        2.3 正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,選取表2中不同水平因素進(jìn)行正交優(yōu)化,對結(jié)果進(jìn)行極差分析以此來確定最佳的提取條件.由表4中的極差分析數(shù)據(jù)結(jié)果可以看出來,極差R(B)>R(C)>R(A),說明3個(gè)因素對白及多糖的提取影響大小依次為提取溫度(B)、提取時(shí)間(C)、料液比(A),其中提取溫度對提取效果影響最為顯著.根據(jù)正交設(shè)計(jì)系列實(shí)驗(yàn)可得,白及多糖的最佳提取條件為A2B1C2,即料液比1∶35(g∶mL),提取溫度80 ℃,提取時(shí)間4.0 h,在此提取條件下白及多糖得率為25.97%.

        表4 白及總多糖正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        2.4 抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        采用濾紙片法測定白及多糖對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用,設(shè)置不同質(zhì)量濃度梯度白及多糖進(jìn)行測試(質(zhì)量濃度分別為0.01,0.02,0.03,0.04,0.05 g/mL),測定樣品及對照品的抑菌圈直徑大小.由圖5可知在該濃度梯度下抑菌圈均不明顯,可知在上述濃度梯度范圍內(nèi)白及多糖對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果不明顯.

        從左到右,白及多糖質(zhì)量濃度依次為0.01,0.02,0.03,0.04,0.05 g/mL,A為對照品圖5 不同質(zhì)量濃度白及多糖的抑菌效果Fig. 5 Inhibitory Effect of Different Concentrations of Bletilla striata Polysaccharid

        為進(jìn)一步驗(yàn)證白及多糖的抑菌效果,選取市售的一夫百應(yīng)抑菌膏作為陽性對照,增大白及多糖提取液濃度進(jìn)行抑菌測試,同時(shí)對制備的白及膏也進(jìn)行了抑菌測試.由表5、圖6可知,當(dāng)白及多糖提取液質(zhì)量濃度增大至0.33 g/mL和0.66 g/mL時(shí),其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌作用明顯增強(qiáng).尤其是當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到0.66 g/mL時(shí),白及多糖提取液對大腸桿菌的抑菌效果優(yōu)于一夫百應(yīng)抑菌膏.與一夫百應(yīng)抑菌膏相比,白及膏對大腸桿菌的抑菌效果良好,而對金黃色葡萄球菌的抑菌效果較差.

        表5 不同樣品的抑菌測試

        A—無菌蒸餾水對照品;B—0.33 g/mL的白及多糖提取液;C—0.66 g/mL的白及多糖提取液;D—市售的一夫百應(yīng)抑菌膏;E—白及膏.圖6 不同質(zhì)量濃度試劑對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制效果Fig. 6 Inhibitory Effect of Different Reagent Concentrations on Escherichia Coli and Staphylococcus Aureus

        3 結(jié)論

        本研究采用水提醇沉法提取白及多糖,設(shè)計(jì)單因素實(shí)驗(yàn)、正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)確定白及多糖的最優(yōu)提取工藝為料液比1∶35(g∶mL),提取溫度80 ℃,提取時(shí)間4.0 h,在此提取條件下,白及多糖提取得率為25.97%.當(dāng)白及多糖質(zhì)量濃度為0.33 g/mL時(shí),其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌有明顯的抑菌作用,當(dāng)質(zhì)量濃度提高至0.66 g/mL時(shí),白及多糖提取液抑菌效果較強(qiáng),對大腸桿菌的抑菌效果優(yōu)于市售的一夫百應(yīng)抑菌膏.本研究結(jié)果可為白及后期的抑菌研究提供理論依據(jù),為進(jìn)一步開發(fā)其相關(guān)抑菌性研究奠定基礎(chǔ).關(guān)于處方白及膏的制備,其抑菌效果雖低于市售抑菌膏,但也證實(shí)處方的白及抑菌性能存在進(jìn)一步提高的空間,仍需進(jìn)一步研究.

        猜你喜歡
        白及提取液化妝品
        黃花白及中1個(gè)新的芐酯苷類化合物及促凝血活性
        中草藥(2023年20期)2023-10-19 11:31:36
        亞麻木脂素提取液滲透模型建立與驗(yàn)證
        白及SSR-PCR擴(kuò)增體系的優(yōu)化
        中成藥(2018年12期)2018-12-29 12:25:32
        近紅外光譜技術(shù)鑒別白及粉及其混偽品
        穿山龍?zhí)崛∫翰煌兓椒ǖ谋容^
        中成藥(2018年2期)2018-05-09 07:20:06
        圣誕化妝品包裝很雷同?那是因?yàn)槟銢]看見這些!
        2018年,化妝品要“減負(fù)”!——便攜式化妝品成新熱點(diǎn)
        山香圓葉提取液純化工藝的優(yōu)化
        中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:28
        如何讓你的化妝品發(fā)揮更大的功效
        健康女性(2017年3期)2017-04-27 22:30:01
        三七白及治上消化道出血
        中老年健康(2015年1期)2015-05-30 14:54:13
        亚洲精品国产老熟女久久| 69一区二三区好的精华| 国产人妻精品一区二区三区不卡| 久久AV中文综合一区二区| 日韩一二三四区免费观看| 手机av在线中文字幕| 国产农村妇女精品一二区| 亚洲人免费| 久久麻豆精亚洲av品国产蜜臀| 国产精品一区二区三区免费视频| 97久久草草超级碰碰碰| 亚洲中文字幕无线无码毛片| 青青草手机成人自拍视频 | 变态另类手机版av天堂看网| 四虎国产精品永久在线国在线| 午夜成人理论无码电影在线播放 | 国产欧美精品一区二区三区–老狼 | 国产精品综合久久久久久久免费| 日韩精品极品免费在线视频 | 亚洲人成77777在线播放网站 | 亚洲成在人线视av| 真实单亲乱l仑对白视频| 亚洲网站免费看| 久久综合激情的五月天| 综合色就爱涩涩涩综合婷婷| 国产午夜成人久久无码一区二区| 东风日产系列全部车型| 国产成人一区二区三区乱| 国产精品一区二区无线| 97在线视频免费| 日本精品一区二区三区试看| 天堂网www资源在线| 色丁香色婷婷| 国产精品久久久看三级| 未发育成型小奶头毛片av| 日韩成人无码一区二区三区| 中文字幕在线一区乱码| 精品日韩一级免费视频| 人妻少妇精品中文字幕av蜜桃| 一本一道AⅤ无码中文字幕| 国产极品大奶在线视频|