方 芳

（愛優(yōu)諾營養(yǎng)品有限公司，江西九江 332000）

泛酸也稱作維生素B5、遍多酸，是人體必需的13 種維生素之一，是一種水溶性維生素，其性質偏酸性并廣泛存于多種食物中，故而得名[1]。其功能是在體內(nèi)轉變成輔酶A 或?；d體蛋白的形式參與能量代謝和一些生物合成[2]?！妒称钒踩珖覙藴?食品中泛酸的測定》（GB 5009.210—2016）[3]中泛酸的測定，其中將微生物法作為泛酸檢測的第一法，微生物法由于具有較高靈敏度和可靠性得到國際權威機構的認可。本研究中采用第二法-高效液相色譜法，同時參考AOAC[4]的方法，使用泛酸檢測試劑盒[5]進行嬰幼兒配方乳粉及原料中泛酸的測定，分析嬰幼兒配方羊奶粉及原料的檢測數(shù)據(jù)，并考察原料與成品之間的關聯(lián)性。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

泛酸試劑盒；泛酸鈣標準品；鹽酸（AR）；磷酸（AR）；磷酸二氫鉀（AR）；七水合硫酸鋅（AR）；乙腈（HPLC）；一級水。

1.2 儀器設備

培養(yǎng)箱（37±1）℃；恒溫水浴鍋；酶標儀（620 nm）；超凈工作臺；微量可調(diào)移液器；LC-20AT 高效液相色譜儀（配SPD 檢測器）；BSA224S 分析天平（感量0.1 mg）；PHS-3C 雷磁pH 計；QYYS-10A 純水儀；TG16-WS 離心機；KQ5200DB 超聲波清洗器。

1.3 試驗方法

1.3.1 液相法

液相色譜法的參數(shù)如下。色譜柱：C18色譜柱（Welch，粒徑5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動相：0.02 mol/L 磷酸二氫鉀溶液+乙腈=95+5；流速：1.0 mL/min；紫外檢測波長：210 nm；柱溫：（28 ±0.5）℃；進樣量：10 μL。

準確稱取適量試樣，精確至0.001 g，一般固體試樣約5 g，置于100 mL 錐形瓶中，加入40～50 ℃溫水至30 mL。直接超聲提取20 min。取出試樣液，冷卻至室溫，用0.1 mol/L 鹽酸調(diào)節(jié)pH 值至5.0±0.1，加入5 mL 0.5 mol/L 硫酸鋅溶液，充分混合。轉入50 mL 容量瓶中，用水定容至刻度并充分混勻后，轉入離心管3 000 r/min 離心5～10 min，取上清液過0.45 μm 濾膜，濾液待上機測定。

1.3.2 微生物法

稱取1 g（精確至0.000 1 g）均質樣品至50 mL 無菌離心管中，加入約30 mL 無菌蒸餾水，搖勻，加蒸餾水至40 mL。在95 ℃水浴中提取30 min，期間振蕩至少5 次，確保離心管緊閉。迅速冷卻至30 ℃以下。然后離心（轉速≥8 000 r/min），根據(jù)樣品標示濃度對樣品進行稀釋。

取出需要數(shù)量的微孔板條并在板架上固定，移取150 μL 培養(yǎng)基至微孔中，然后移取150 μL 標準品或稀釋的樣品至指定的微孔中。取出粘合箔并除去上面的保護層，將其平放在微孔板條上，用手將粘合箔平壓，使其充分封閉微孔板條。在（37±1）℃黑暗條件下孵育20～24 h。將微孔板旋渦混勻，用酶標儀于波長620 nm 條件下讀取濁度。使用軟件RIDA SOFT Win_NET Version1.98 進行計算（4P 法）。

2 結果與分析

2.1 標準曲線的建立

由圖1、圖2 可知，泛酸微生物法標準曲線的相關系數(shù)為0.999 5，滿足《實驗室質量控制規(guī)范 食品理化檢測》（GB/T 27404—2008）附錄F F.2 校準曲線不低于0.99 的要求，線性良好。高效液相色譜法相關系數(shù)r=0.999 9，表明在1.0～32.0 μg/mL 范圍內(nèi)，無基質干擾法線性良好。

圖1 泛酸微生物法標準曲線

圖2 泛酸高效液相色譜法標準曲線

2.2 重復性與回收率

取同一批樣品，按1.3.2 項下方法制備6 批待測樣品進行重復性試驗，同時進行低、中、高3 種濃度的加標回收率試驗，結果見表1、表2。由表1 和表2可知，測得樣品中泛酸平均含量為3 303 μg/100 g，RSD為0.5%，回收率在93.9%～101.9%，平均回收率為98.2%，回收率較高，相對標準偏差較小，重復性較好，此方法適用性較好。

表1 重復性試驗結果

表2 回收率試驗結果

2.3 液相色譜法與微生物法數(shù)據(jù)比對

2.3.1 配方羊奶粉數(shù)據(jù)統(tǒng)計

取配方羊奶粉樣品，分別按1.3.1、1.3.2 項方法制備6 批待測樣品進行重復性試驗，高效液相色譜法、微生物法兩種方法的檢測數(shù)值的標準偏差、RSD值、CV值統(tǒng)計結果如表3 所示。由表3可知，嬰幼兒配方羊奶粉的微生物法與高效液相色譜法數(shù)值相比，計算CV值均超出10%，存在明顯差異。

表3 嬰幼兒配方羊奶粉泛酸的統(tǒng)計數(shù)值

2.3.2 羊乳清粉數(shù)據(jù)統(tǒng)計

選取羊乳清粉，分別按1.3.1、1.3.2 項方法制備6 批待測樣品進行重復性試驗，將高效液相色譜法、微生物法兩種方法的檢測數(shù)值進行匯總比較。標準偏差、RSD值、CV值統(tǒng)計結果如表4 所示。由表4可知，高油脫鹽羊乳清粉的高效液相色譜法數(shù)值與微生物法數(shù)值相比，計算CV值在均超出10%，存在明顯的差異。

表4 高油脫鹽羊乳清粉泛酸檢測數(shù)值統(tǒng)計

2.3.3 泛酸檢測圖譜對比

如圖3、圖4 所示，嬰幼兒配方羊奶粉與其原料高油脫鹽羊乳清粉泛酸的出峰情況基本一致：目標峰出峰情況較差、分離效果不佳、雜質峰相對較多且干擾較大。

圖3 嬰幼兒配方羊奶粉

圖4 高油脫鹽羊乳清粉

3 結論與討論

綜上，在用高效液相色譜法進行乳粉中泛酸檢測時會存在檢測不穩(wěn)定的現(xiàn)象，且這種不穩(wěn)定現(xiàn)象可追溯至原料，并與原料存在一定的關聯(lián)性。

食品中泛酸的含量檢測一般以微生物法為主，其適用范圍廣，靈敏度較高，經(jīng)濟適用，但局限性在于操作復雜，且要求較高，不適用于批量樣品的檢測。而高效液相色譜法操作簡單，可用于批量檢測，但對于某些基質復雜的樣品無法準確定量。因此，在檢測食品中泛酸時，需根據(jù)實際情況選擇合適的方法進行檢測。