白菊萍 張菊梅

【摘要】目的：探索細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)在胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取我院老年性胸腹腔積液標(biāo)本129例作為研究對象，均進(jìn)行常規(guī)涂片、液基細(xì)胞學(xué)制片、細(xì)胞蠟塊制作石蠟切片，經(jīng)染色后進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查。結(jié)果：改良細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)操作流程簡單，不需要特殊設(shè)備，且能夠有效提升胸腹腔積液惡性細(xì)胞檢出率及細(xì)胞學(xué)檢查的應(yīng)用范圍，此次研究胸腹腔積液標(biāo)本129例，經(jīng)細(xì)胞學(xué)檢查良性病變91例（70.5%），轉(zhuǎn)移性腫瘤35例（27.2%），原發(fā)性腫瘤3例（2.3%）。結(jié)論：胸腹腔積液細(xì)胞蠟塊技術(shù)避免了傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片檢查的局限性，通過細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)的實(shí)施，使細(xì)胞蠟塊成為細(xì)胞學(xué)檢查通向組織病理及分子病理的橋梁，為臨床疾病的診斷和治療提供更多可靠依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 ?胸腹腔積液 ?脫落細(xì)胞學(xué) ?細(xì)胞蠟塊制作 細(xì)胞免疫化學(xué) ?靶向治療

中圖分類號：R561.3

胸腹腔積液是晚期或復(fù)發(fā)惡性腫瘤的嚴(yán)重并發(fā)癥之一[1]，也是許多惡性腫瘤及一些良性病變的常見臨床表現(xiàn)[2]，對于伴發(fā)胸腹腔積液的惡性腫瘤來說，胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查關(guān)系到腫瘤的分型、分期、治療方案的選擇和預(yù)后判斷等，同時(shí)對胸腹腔積液中檢出的惡性腫瘤細(xì)胞可進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)和藥物敏感基因檢測等[3]。胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查，可以初步判定疾病的性質(zhì)，具有簡便易行，患者痛苦少，不需要特殊設(shè)備等優(yōu)點(diǎn)，是胸腹腔積液患者診斷及鑒別診斷的重要手段之一。隨著微創(chuàng)無創(chuàng)診療及免疫組化、分子生物學(xué)等精準(zhǔn)施治技術(shù)的發(fā)展，細(xì)胞學(xué)檢查在胸腹腔積液患者疾病診斷、鑒別診斷、判斷轉(zhuǎn)移性腫瘤的組織來源以及為患者提供靶向治療依據(jù)等應(yīng)用中越來越凸顯其重要性[4]，但常規(guī)胸腹腔積液細(xì)胞涂片檢查的陽性率普遍偏低，加之傳統(tǒng)方法涂片因細(xì)胞堆積、分布不均、含紅細(xì)胞多、惡性細(xì)胞量少[5]，且無法保存有效的診斷細(xì)胞成分，繼而無法進(jìn)行疾病診斷、鑒別診斷及免疫靶向治療所需要的細(xì)胞免疫化學(xué)、特殊染色、分子基因檢測等，給胸腹腔腫瘤性積液疾病的診斷及鑒別診斷帶來了不少困擾，限制了胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查在臨床中的廣泛應(yīng)用。胸腹腔積液細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)就是將送檢的胸腹腔積液，通過技術(shù)流程的處理，制作成細(xì)胞蠟塊，將其細(xì)胞成分保存于蠟塊中，從而將細(xì)胞蠟塊進(jìn)行常規(guī)石蠟切片、HE染色、細(xì)胞免疫化學(xué)染色、特殊染色，靶向藥物敏感基因檢測等檢查，判斷胸腹腔積液中細(xì)胞的性質(zhì)、類型，達(dá)到對腫瘤細(xì)胞精確診斷的技術(shù)。經(jīng)過大量臨床病例的探索研究，分析總結(jié)了一種高效、快速、操作流程簡單的細(xì)胞蠟塊制作技術(shù)，現(xiàn)將技術(shù)要點(diǎn)及操作流程介紹如下：

1一般資料與方法

1.1一般資料

選取我院2019年9月—2020年8月送檢的老年性胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的樣本共129例作為研究對象。年齡55—85歲，男性患者73例，女性患者56例，男女之比約為1.3：1。

1.2主要技術(shù)流程及方法

1.2.1標(biāo)本送檢量

建議臨床盡可能抽取100mL以上的胸腹腔積液送檢，如果抽取的樣本量少于100mL，則應(yīng)全部送檢。

1.2.2送檢時(shí)間的要求

胸腹腔積液離體后半小時(shí)內(nèi)送檢到相關(guān)檢查科室處理，如暫時(shí)不能送檢應(yīng)將標(biāo)本冷藏于1-4℃冰箱內(nèi)，但冷藏時(shí)間不應(yīng)超過24 h。

1.2.3存放送檢樣本容器的要求

建議存放于硬質(zhì)不吸水密閉潔凈容器（推薦使用鹽水瓶），不建議使用軟質(zhì)引流袋存放及送檢。

1.2.4 抗凝與預(yù)固定

通常不需要抗凝和預(yù)固定處理，但若要長距離轉(zhuǎn)送或隔日處理則建議使用10%0.106mol/L枸櫞酸鈉或肝素抗凝劑抗凝，并采用50% 酒精與漿膜腔積液1：1混合預(yù)固定。

1.2.5細(xì)胞蠟塊制作流程與方法

（1）將送檢的胸腹腔積液標(biāo)本靜止放置20～30 min待自然沉降后，傾去或吸除上清液，留底部液體約100mL進(jìn)行離心處理，（每份樣本用1～2支離心管），推薦使用具有自動平衡功能的垂直離心機(jī)。同時(shí)吸取沉淀物進(jìn)行常規(guī)涂片及液基細(xì)胞學(xué)制片經(jīng)巴氏染色或HE染色后做對照，如圖1、圖2所示。

（2）離心管建議用50～100 mL一次性尖底離心管進(jìn)行離心處理，初次離心用2500～3000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速離心5min（高轉(zhuǎn)速，短時(shí)間）;如果沉淀物少可重復(fù)離心（2000轉(zhuǎn)/分轉(zhuǎn)速），離心5 min;如果沉淀物血液含量大于沉淀物的1/2時(shí)，建議使用清洗步驟，（即使用1%冰醋酸酒精液處理，并進(jìn)行第二次離心沉淀，如圖3所示。

（3）離心沉淀完成后，用吸管將上清液吸除，只留沉淀物于離心管底部，然后向離心管沉淀物中加入10%中性福爾馬林液30～50mL，放置振蕩器上輕輕振蕩混勻。

（4）然后將混勻后的沉淀物低速離心（800～1000轉(zhuǎn)/分）15～20min后，取出離心管放樣本架上靜止固定2 h以上。

（5）待常規(guī)取材時(shí)用長把小勺從離心管中取出細(xì)胞團(tuán)塊（如果體積較小，需用濾紙包裹），放入包埋盒，如圖4所示，與當(dāng)日取材后的組織標(biāo)本進(jìn)行常規(guī)脫水后制片、閱片。

（6）對閱片中細(xì)胞學(xué)檢出惡性細(xì)胞或可疑惡性細(xì)胞的切片，用相應(yīng)的細(xì)胞蠟塊切片做細(xì)胞免疫化學(xué)染色、特殊染色或切取細(xì)胞蠟塊組織進(jìn)行分子病理或靶向基因檢測。細(xì)胞蠟塊切片HE染色效果如圖5所示，細(xì)胞免疫化學(xué)染色效果如圖6所示，（各種染色及分子、靶向基因檢測具體操作方法不在此敘述）。

3研究結(jié)果

（1） 129例老年性胸腹腔積液經(jīng)細(xì)胞學(xué)檢查良性病變91例（70.5%），轉(zhuǎn)移性腫瘤35例（27.2%）原發(fā)性腫瘤3例（2.3%），檢查結(jié)果統(tǒng)計(jì)見表1。

（2） 35例惡性胸腹腔積液經(jīng)免疫組化染色腫瘤分型結(jié)果統(tǒng)計(jì)見表2。

4討論

細(xì)胞蠟塊是進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)，特殊染色，分子病理及未來研究等檢查的有效檢材，與傳統(tǒng)涂片聯(lián)合使用可以提高檢測的敏感性和特異性[6]，此項(xiàng)技術(shù)制作細(xì)胞蠟塊流程簡單，方法可靠，不需要特殊設(shè)備就能有效提高胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率和準(zhǔn)確性，對檢出的惡性腫瘤細(xì)胞不但能夠做到準(zhǔn)確分型，而且能夠?yàn)榛颊邆€(gè)體化治療提供精準(zhǔn)的檢測依據(jù)。

與傳統(tǒng)細(xì)胞涂片檢查相比具有以下重要臨床意義：（1）增加了目標(biāo)細(xì)胞的數(shù)量、密度，并能使目標(biāo)細(xì)胞得到有效保存，既能重復(fù)多次切片檢查，又能輔助腫瘤性積液免疫細(xì)胞化學(xué)，特殊染色等檢測，有效提高了胸腹腔積液患者腫瘤性疾病診斷的陽性率。（2）對檢出的腫瘤性積液通過免疫細(xì)胞化學(xué)、特殊染色等檢查對腫瘤細(xì)胞類型能夠做到準(zhǔn)確分型，為腫瘤患者精準(zhǔn)化治療提供更多參考依據(jù)。目前胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)的制片方法有傳統(tǒng)手工涂片、液基細(xì)胞學(xué)制片、細(xì)胞學(xué)印片等技術(shù)[7]，都存在陽性率低和無法進(jìn)行后續(xù)的輔助診斷檢查等諸多弊端，通過此方法將胸腹腔積液標(biāo)本制作成細(xì)胞蠟塊，有效彌補(bǔ)了細(xì)胞學(xué)檢查的不足，大大提高了胸腹腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的陽性率和應(yīng)用范圍，為惡性腫瘤患者提供更為準(zhǔn)確，有效的診斷及治療依據(jù)，值得在癌癥防治工作及臨床醫(yī)療機(jī)構(gòu)中大力推廣使用。

參考文獻(xiàn)

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