馮月 段飛鵬 李一圣 邱書奇

摘 要 目的：建立不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物的高效液相色譜法（HPLC）指紋圖譜，并進(jìn)行其抗炎作用的譜效關(guān)系研究。方法：制備12批不同產(chǎn)地金釵石斛（S1～S12）的醇提物樣品。采用HPLC法檢測(cè)，并結(jié)合《中藥指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012年版）》建立12批金釵石斛醇提物的指紋圖譜并進(jìn)行共有峰指認(rèn)和相似度評(píng)價(jià)。以炎癥因子[白細(xì)胞介素4（IL-4）、IL-6]含量為抗炎指標(biāo)，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)考察12批金釵石斛醇提物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的炎癥模型RAW264.7巨噬細(xì)胞的抗炎作用;采用灰色關(guān)聯(lián)度分析法分析金釵石斛醇提物指紋圖譜中各共有峰與抗炎指標(biāo)的關(guān)聯(lián)度。結(jié)果：12批金釵石斛醇提物共有18個(gè)共有峰，指認(rèn)了12號(hào)峰為石斛酚，各樣品相似度為0.911～0.996。金釵石斛S1～S12醇提物均可顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4的含量（P<0.05或P<0.01），金釵石斛S1～S8、S10醇提物均可顯著降低細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6的含量（P<0.05或P<0.01）。經(jīng)灰色關(guān)聯(lián)度分析發(fā)現(xiàn)，除4、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且5、7號(hào)峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8;除9、14、4、3、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且1、12、13號(hào)峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8。結(jié)論：12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物的HPLC指紋圖譜的相似度較高、所含成分一致性較好;其中1、5、7、12（石斛酚）、13號(hào)峰所代表的化學(xué)成分可能是金釵石斛潛在的抗炎藥效成分。

關(guān)鍵詞 金釵石斛;高效液相色譜;指紋圖譜;抗炎作用;譜效關(guān)系

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the HPLC fingerprints of ethanol extracts of Dendrobium nobile from different habitats， and to study spectrum effect relationship of its anti-inflammatory effect. METHODS： The ethanol extracts from 12 batches of D. nobile from different habitats （S1-S12） were prepared. The fingerprints of ethanol extracts from 12 batches of D. nobile were established by HPLC and TCM Fingerprint Similarity Evaluation System （version 2012）. Common peaks were identified and the similarity was evaluated. Using the contents of inflammatory factors （IL-4， IL-6） as anti-inflammatory indexes， ELISA was used to investigate the effects of ethanol extracts from 12 batches of D. nobile on RAW264.7 macrophages in inflammatory model induced by lipopolysaccharide. Grey correlation analysis was used to analyze the correlation between common peaks and anti-inflammatory indexes in the fingerprint of ethanol extract from D. nobile. RESULTS： There were 18 common peaks in ethanol extracts from 12 batches of D. nobile， and No. 12 peak was identified as dendrophenol. The similarity of each sample was 0.911-0.996. The content of IL-4 in cell culture medium was significantly reduced by ethanol extracts of D. nobile S1-S12 （P<0.05 or P<0.01）; the content of IL-6 in cell culture was significantly reduced by ethanol extracts of D. nobile S1-S8， S10 （P<0.05 or P<0.01）. Grey correlation analysis found that except for peaks 4 and 18， the correlation degree between the other common peaks and the content of IL-4 was greater than 0.6， and the correlation degree between peaks 5 and 7 and the content of IL-4 was greater than 0.8; except for peaks 9， 14， 4， 3 and 18， the correlation degree between the other common peaks and the content of IL-6 was greater than 0.6， and the correlation degree between peaks 1， 12 and 13 and the content of IL-6 was greater than 0.8. CONCLUSIONS： HPLC fingerprints of ethanol extracts from 12 batches of D. nobile from different habitats have high similarity and good consistency in composition; the chemical constituents represented by peaks 1， 5， 7， 12 （dendrophenol） and 13 may be potential anti-inflammatory components of D. nobile.

KEYWORDS? ?Dendrobium nobile; HPLC; Fingerprint; Anti-inflammatory activity; Spectrum effect relationship

石斛為蘭科植物金釵石斛Dendrobium nobile Lindl、鼓槌石斛D. chrysotoxum Lindl或流蘇石斛D. fimbriatum Hook的栽培品及其同屬植物近似種的新鮮或干燥莖，其性甘、微寒，具有益胃生津、滋陰清熱的功效[1]?，F(xiàn)代藥理研究表明，石斛具有抗炎、增強(qiáng)免疫力、降血糖、抗衰老、抗腫瘤和保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理活性[2]。相關(guān)研究結(jié)果顯示，金釵石斛被較好地應(yīng)用于慢性咽炎[3]，對(duì)炎癥因子的分泌和炎癥反應(yīng)的發(fā)生具有良好的抑制作用[4-5]。然而，不同產(chǎn)地的金釵石斛因其生長的土壤環(huán)境的異質(zhì)性和微生態(tài)差異性[6]，可能在內(nèi)在性狀、化學(xué)成分、藥理活性等方面表現(xiàn)出一定的差異[7]，而這些方面的差異在一定程度上影響著金釵石斛的臨床藥效。因此，對(duì)不同產(chǎn)地金釵石斛的內(nèi)在質(zhì)量進(jìn)行考察是必要的，可為其質(zhì)量控制以及臨床用藥提供一定的參考。

目前，相關(guān)研究以中藥化學(xué)成分譜和中藥藥效活性為切入點(diǎn)進(jìn)行中藥譜效關(guān)系的研究，可以更加全面地對(duì)中藥質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)，并為其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供新思路[8-9]。已有研究采用譜效關(guān)系研究來考察不同產(chǎn)地中藥材的內(nèi)在質(zhì)量差異，并篩選出潛在的藥效成分[10-12]，因此，本研究參考文獻(xiàn)[13-14]方法將12批不同產(chǎn)地金釵石斛以乙醇煎煮回流提取制備醇提物，并建立該醇提物的高效液相色譜（HPLC）指紋圖譜;以白細(xì)胞介素4（IL-4）、IL-6為炎癥指標(biāo)[15]，結(jié)合灰色關(guān)聯(lián)度分析法[16]，初步探討金釵石斛抗炎作用的藥效基礎(chǔ)，為該藥材的內(nèi)在質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：e2695/2998型HPLC儀（美國Waters公司），BSA323S型電子精密天平（北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司），Milli-Q Advantage A10型超純水機(jī)（美國Millipore公司），SB-1200型數(shù)顯恒溫水浴鍋、N-1200B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司），F(xiàn)D-1C-80型冷凍干燥機(jī)（上海比朗儀器制造有限公司），109922-7730型CO2培養(yǎng)箱（美國Thermo Fisher Scientific公司），5810F型臺(tái)式離心機(jī)（德國Eppendorf公司），TUNE型多功能酶標(biāo)儀（美國Molecular Devices公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用12批金釵石斛藥材（編號(hào)S1～S12）分別購自四川省樂山市夾江縣、貴州省赤水市、云南省昭通市鎮(zhèn)雄縣，經(jīng)深圳市龍崗區(qū)耳鼻咽喉醫(yī)院中藥新藥研究室李一圣副主任中藥師鑒定為蘭科植物金釵石斛D. nobile Lindl的干燥莖。其他藥品與試劑有：石斛酚對(duì)照品、地塞米松對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為111875-201202、100129-201506，純度均不低于99%），DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基（美國HyClone公司，批號(hào)AE25719279），0.25%胰酶-EDTA（美國Gibco公司，批號(hào)25200-056），胎牛血清（美國ScienCell公司，批號(hào)19797），脂多糖（美國Sigma公司，批號(hào)L2630），IL-4酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（深圳欣博盛生物科技有限公司，批號(hào)M190521-003a），IL-6? ELISA試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)JUUIH4ECKG）;甲醇為色譜純，甲酸為分析純，水為超純水。不同產(chǎn)地金釵石斛藥材來源信息見表1。

1.3 細(xì)胞

本研究所用小鼠源性RAW264.7巨噬細(xì)胞株購自美國ATCC公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 金釵石斛醇提物HPLC指紋圖譜的建立

2.1.1 金釵石斛醇提物的制備 將12批金釵石斛藥材以打粉機(jī)制成粗粉。精密稱取各批藥材粗粉各25 g，分別置于圓底燒瓶中，加入90%乙醇625 mL后，置于60 ℃水浴鍋內(nèi)回流提取2次，每次1 h;過濾，合并2次的濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至20 mL;將濃縮后溶液轉(zhuǎn)入燒杯中，繼續(xù)置于60 ℃水浴鍋中充分揮干乙醇，即得金釵石斛醇提物浸膏。將該浸膏置于-80 ℃條件下冷凍過夜，然后置于冷凍干燥機(jī)中凍干，即得金釵石斛醇提物粉末（以生藥量計(jì)，得率為6.11%）

2.1.2 色譜條件 色譜柱為Sapphire C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相為0.1%甲酸（B）-甲醇（D），梯度洗脫（0～10 min，5%D→10%D;10～20 min，10%D→20%D;20～28 min，20%D→30%D;28～55 min，30%D→60%D;55～65 min，60%D→65%D;65～75 min，65%D→90%D;75～80 min，90%D→10%D）;流速為1.0 mL/min;柱溫為25 ℃;檢測(cè)波長為254 nm;進(jìn)樣體積為20 μL。

2.1.3 供試品溶液的制備 分別稱取“2.1.1”項(xiàng)下制備的12批金釵石斛醇提物粉末25 mg，置于燒杯中，以適量甲醇溶解后，轉(zhuǎn)入25 mL量瓶，以甲醇定容;分別取1 mL上述溶液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得供試品溶液。

2.1.4 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取石斛酚對(duì)照品250 μg，置于燒杯中，以適量甲醇溶解后，轉(zhuǎn)入25 mL量瓶，以甲醇定容;取1 mL上述溶液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，取濾液，即得對(duì)照品溶液。

2.1.5 精密度試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下制備的供試品溶液（S1號(hào)樣品醇提物）適量，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。將10號(hào)色譜峰（出峰時(shí)間適中且峰形較好，下同）作為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.04%～0.45%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為0.55%～2.97%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取S1號(hào)樣品醇提物6份，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。將10號(hào)色譜峰作為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.02%～0.39%（n=6），相對(duì)峰面積的RSD為1.13～2.98%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.1.3”項(xiàng)下供試品溶液（S1號(hào)樣品醇提物），于室溫放置0、2、4、8、12、16、24 h后，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將10號(hào)色譜峰作為參照峰（S），計(jì)算各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。結(jié)果，各共有峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD為0.01%～0.67%（n=7），相對(duì)峰面積RSD為1.75%～2.58%（n=7），表明供試品溶液在室溫放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.8 12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物樣品HPLC指紋圖譜的生成 取“2.1.1”項(xiàng)下制備的12批金釵石斛醇提物粉末，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012年版）》，將色譜峰峰形較明顯、信號(hào)強(qiáng)度較好的S1號(hào)樣品醇提物的色譜圖作為參照色譜圖，運(yùn)用全譜峰匹配法和中位數(shù)法，將時(shí)間窗設(shè)置為0.1，經(jīng)過多點(diǎn)校正后，自動(dòng)匹配生成12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物的HPLC疊加指紋圖譜和對(duì)照?qǐng)D譜R，詳見圖1。

2.1.9 共有峰指認(rèn) 取“2.1.4”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，得到如圖2所示的石斛酚對(duì)照品色譜圖。由圖1可知，12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物一共有18個(gè)共有峰，通過與圖2進(jìn)行對(duì)比，指認(rèn)出12號(hào)峰為石斛酚。

2.1.10 相似度評(píng)價(jià) 采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2012年版）》對(duì)12批金釵石斛醇提物的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果，12批金釵石斛醇提物樣品指紋圖譜的相似度在0.911～0.996范圍內(nèi)，表明這12批樣品的一致性較好，詳見表2。

2.2 金釵石斛醇提物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的 RAW264.7巨噬細(xì)胞抗炎作用的考察

本研究參考文獻(xiàn)[15]的方法，探究金釵石斛醇提物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的炎癥模型RAW264.7巨噬細(xì)胞中炎癥因子（IL-4、IL-6）含量的影響，以此評(píng)價(jià)其抗炎作用。

2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) RAW264.7巨噬細(xì)胞采用含10%胎牛血清和1%青霉素-鏈霉素雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱“培養(yǎng)基”），于37 ℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（以下培養(yǎng)條件相同），取對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.2.2 金釵石斛醇提物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4、IL-6含量的影響 取RAW264.7巨噬細(xì)胞，按5×104個(gè)/孔接種于96孔板，然后分為正常對(duì)照組、模型組、地塞米松組（陽性對(duì)照，100 μg/mL，給藥質(zhì)量濃度根據(jù)文獻(xiàn)[17]設(shè)置）和12批金釵石斛（S1～S12）醇提物組（100 μg/mL，給藥質(zhì)量濃度根據(jù)本課題組前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果設(shè)置） ，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。正常對(duì)照組加入培養(yǎng)基200 μL，模型組細(xì)胞加入含100 ng/mL脂多糖的培養(yǎng)基200 μL，各給藥組加入含100 ng/mL脂多糖和相應(yīng)藥物的培養(yǎng)基200 μL;細(xì)胞培養(yǎng)24 h后，收集培養(yǎng)液，以3 000 r/min離心5 min，取上清液，按照相應(yīng)ELISA 試劑盒說明書方法操作;采用酶標(biāo)儀于450 nm波長下測(cè)定吸光度，計(jì)算上清液中IL-4、IL-6含量。采用SPSS 24.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)結(jié)果以x±s表示。組間比較采用單因素方差分析，方差齊時(shí)，采用 LSD檢驗(yàn);方差不齊時(shí)，采用 Dunnetts T3檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

結(jié)果，與正常對(duì)照組比較，模型組細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4、IL-6含量均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，地塞米松組細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4、IL-6含量均顯著降低（P<0.01），金釵石斛S1～S12醇提物組細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），金釵石斛S1～S8、S10醇提物組細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-6含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），表明12批金釵石斛醇提物對(duì)細(xì)胞中IL-4、IL-6含量均具有不同程度的抑制作用;且貴州省赤水市產(chǎn)金釵石斛（S1～S4）醇提物的抑制作用較強(qiáng)，云南省昭通市鎮(zhèn)雄縣產(chǎn)金釵石斛（S5～S8）醇提物次之，四川省樂山市夾江縣產(chǎn)金釵石斛（S9～S12）醇提物則相對(duì)較弱，詳見表3。

注：與正常對(duì)照組比較，**P<0.01;與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

Note： vs. normal group，**P<0.01; vs. model group，#P<0.05，##P<0.01

2.3 譜效關(guān)系分析

2.3.1 抗炎指標(biāo)的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化 將“2.2.2”項(xiàng)下RAW264.7巨噬細(xì)胞培養(yǎng)液中IL-4、IL-6含量按以下公式進(jìn)行數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化：IL-4抑制率=[1-（給藥組IL-4含量-正常對(duì)照組IL-4含量）/（模型組IL-4含量-正常對(duì)照組IL-4含量）]×100%;IL-6抑制率=[1-（給藥組IL-6含量-正常對(duì)照組IL-6含量）/（模型組IL-6含量-正常對(duì)照組IL-6含量）]×100%?？寡字笜?biāo)的數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化結(jié)果見表4。

2.3.2 數(shù)據(jù)處理 采用均值法將“2.3.1”項(xiàng)下12批金釵石斛醇提物的抗炎活性指標(biāo)的轉(zhuǎn)化數(shù)據(jù)與其共有峰峰面積數(shù)據(jù)進(jìn)行歸一化處理[18-19]。將歸一化后的抗炎活性指標(biāo)設(shè)置為母序列Y（k），18個(gè)共有峰歸一化后峰面積設(shè)置為子序列為Xi（i表示共有峰編號(hào)1、2、3……18），然后計(jì)算母序列與子序列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)Ai（k）：Ai（k）=

[Δi（k）min+ρ×Δi（k）max]/[Δi（k）+ρ×Δi（k）max]，其中Δi（k）=|Y（k）-Xi |，分辨系數(shù)ρ為0.5。

2.3.3 灰色關(guān)聯(lián)度分析 根據(jù)“2.3.2”項(xiàng)下得到的數(shù)據(jù)，采用灰色關(guān)聯(lián)度分析法計(jì)算母序列與子序列的灰色關(guān)聯(lián)系數(shù)Ai（k）的平均值，即關(guān)聯(lián)度。當(dāng)關(guān)聯(lián)度大于0.8，則表示母序列與子序列關(guān)聯(lián)度較大;當(dāng)關(guān)聯(lián)度介于0.6～0.8之間，則表示兩者關(guān)聯(lián)度一般;當(dāng)關(guān)聯(lián)度小于0.6，則表示兩者關(guān)聯(lián)度較小[19]。結(jié)果顯示，12批金釵石斛醇提物的18個(gè)共有峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度為0.503 4～0.815 8，除4、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且5、7號(hào)峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8;12批金釵石斛醇提物的18個(gè)共有峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度為0.554 0～0.844 0，除9、14、4、3、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且1、12、13號(hào)峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8，詳見表5、表6。

3 討論

本研究基于12批金釵石斛醇提物HPLC指紋圖譜與其抗炎作用的譜效關(guān)系，初步揭示了不同產(chǎn)地金釵石斛內(nèi)在質(zhì)量的差異以及潛在的抗炎作用成分。由指紋圖譜可知，12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物中有18個(gè)共有峰，并指認(rèn)出12號(hào)色譜峰為石斛酚。由相似度評(píng)價(jià)結(jié)果可知，四川省樂山市夾江縣、貴州省赤水市、云南省昭通市鎮(zhèn)雄縣這3個(gè)產(chǎn)區(qū)的金釵石斛醇提物的相似度較高，均不低于0.9，表明各產(chǎn)地的金釵石斛所含成分一致性較好。

本研究進(jìn)一步研究了12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的炎癥模型RAW264.7巨噬細(xì)胞的抗炎作用，發(fā)現(xiàn)貴州省赤水市產(chǎn)金釵石斛（S1～S4）和云南省昭通市鎮(zhèn)雄縣產(chǎn)金釵石斛（S5～S8）對(duì)細(xì)胞中炎癥因子IL-4、IL-6具有較強(qiáng)的抑制作用;四川省樂山市夾江縣產(chǎn)金釵石斛（S9～S12）也能降低細(xì)胞中IL-4、IL-6水平，但其抑制作用相對(duì)較弱。這表明不同產(chǎn)地金釵石斛所含成分在一致性較好的情況下，其內(nèi)在質(zhì)量仍有可能存在差異。由此筆者推測(cè)，這種差異可能與不同產(chǎn)地的氣候條件、土壤酸堿度、微量元素、植株根際細(xì)菌多樣性等因素有關(guān)[20]。

通過灰色關(guān)聯(lián)度分析發(fā)現(xiàn)，本研究建立的12批金釵石斛醇提物HPLC指紋圖譜的共有峰中，除4、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且5、7號(hào)峰與IL-4含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8;除9、14、4、3、18號(hào)峰外，其余共有峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.6，且1、12、13號(hào)峰與IL-6含量的關(guān)聯(lián)度均大于0.8。由此說明，金釵石斛醇提物發(fā)揮抗炎作用的基礎(chǔ)可能是其各共有峰所代表的化學(xué)成分共同作用的結(jié)果。

綜上所述，本研究建立了12批不同產(chǎn)地金釵石斛醇提物的HPLC指紋圖譜，其中5、7號(hào)峰所代表的成分與抗炎指標(biāo)IL-4的關(guān)聯(lián)度較大，1、12、13號(hào)峰與抗炎指標(biāo)IL-6的關(guān)聯(lián)度較大，由此推測(cè)，1、5、7、12（石斛酚）、13號(hào)峰所代表的化學(xué)成分可能是金釵石斛潛在的抗炎藥效成分。后續(xù)本課題組將完善上述共有峰的指認(rèn)和鑒定，從而進(jìn)一步明確金釵石斛抗炎作用的藥效物質(zhì)，以期為該藥材的整體質(zhì)量控制提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S]. 2020年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：94.

[ 2 ] 張雪琴，趙庭梅，劉靜，等.石斛化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].中草藥，2018，49（13）：3174-3182.

[ 3 ] 虞泓，屈燕，陳心啟.金石斛含片清咽潤喉功效的研究[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，27（5）：440-445.

[ 4 ] KIM J H，OH S Y，HAN S B，et al. Anti-inflammatory effects of Dendrobium nobile derived phenanthrenes in LPS-stimulated murine macrophages[J]. Arch Pharm Res，2015，38（6）：1117-1126.

[ 5 ] 林牧，龔其海，吳芹，等.金釵石斛多糖對(duì)大鼠混合培養(yǎng)皮層細(xì)胞炎癥相關(guān)因子表達(dá)的抑制作用[J].中藥新藥雜志，2016，25（24）：2843-2846.

[ 6 ] 何冬梅，王海，陳金龍，等.中藥微生態(tài)與中藥道地性[J]. 中國中藥雜志，2020，45（2）：290-302.

[ 7 ] 黃林芳，張 翔，陳士林.道地藥材品質(zhì)生態(tài)學(xué)研究進(jìn)展[J].世界科學(xué)技術(shù)（中醫(yī)藥現(xiàn)代化），2019，21（5）：844-853.

[ 8 ] FAN Q，YANG R，YANG F，et al. Spectrum-effect relationship between HPLC fingerprints and antioxidant acti- vity of Angelica sinensis[J]. Biomed Chromatogr，2020，34（2）：e4707.

[ 9 ] LIU H，ZHU S，LIU Q，et al. Spectrum-effect relationship study between HPLC fingerprints and antioxidant of? ? honeysuckle extract[J]. Biomed Chromatogr，2019，33（10）：e4583.

[10] 李毛加，沙玉茹，羅曉敏，等.基于譜效關(guān)聯(lián)分析篩選竹葉椒揮發(fā)油抗菌質(zhì)量標(biāo)志物[J/OL].中草藥，2021（2021-05- 26） [2021-06-06].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/12.1108.r.20210527.1414.006.html.

[11] 劉誼民，許婷，張黃琴，等.基于譜效關(guān)系和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的淫羊藿抗骨質(zhì)疏松物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制探索[J/OL].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2021（2021-05-26） [2021-06-06].https：//doi.org/10.13422/j.cnki.syfjx.20210917.

[12] 侯小濤，陳曉璐，郝二偉，等.基于譜效關(guān)系的肉桂改善腎陽虛作用的質(zhì)量標(biāo)志物（Q-Marker）研究[J].中草藥，2021，52（9）：2597-2607.

[13] JI S H，LEE S A，HONG S S，et al. Phenanthrenes from Dendrobium nobile. and their inhibition of the LPS-induced production of nitric oxide in macrophage RAW 264.7 cells[J]. Bioorg Med Chem Lett，2010，20（12）：3785-3787.

[14] 許莉.金釵石斛化學(xué)成分及其應(yīng)用研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[15] 唐蕾，吳堅(jiān)，于顧然，等.益氣養(yǎng)陰逐瘀方對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞炎癥模型體外抗炎活性的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2019，25（1）：141-148.

[16] 張贊，黃逯，張慧，等.壯藥玉葉金花抗炎鎮(zhèn)痛作用的譜效關(guān)系研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2020，36（6）：870-874.

[17] 劉曼，張紅霞，周璐，等.受體相互作用蛋白3介導(dǎo)自身免疫性肝炎肝臟單核細(xì)胞來源巨噬細(xì)胞募集[J].中華消化雜志，2021，41（1）：35-42.

[18] 劉雯，劉云，劉進(jìn)寶，等.基于灰色關(guān)聯(lián)分析的藤茶不同極性部位在小鼠體內(nèi)抗炎作用的譜-效關(guān)系研究[J].中國藥房，2020，31（19）：2382-2386.

[19] 阮沛樺，鄧紅，傅詠梅，等.基于灰色關(guān)聯(lián)度的疊鞘石斛葉抗氧化部位的篩選[J].熱帶作物學(xué)報(bào)，2020，41（8）：1700- 1707.

[20] 安忠琦，詹偉，吳慶珊，等.金釵石斛根際可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及抑菌活性研究[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2018，40（3）：586-602.

（收稿日期：2021-04-25 修回日期：2021-06-07）

（編輯：唐曉蓮）