王恩輝，張志然，王崇瑞，張瓔鸞，楊兵成

【摘要】 結(jié)合我國(guó)食品抽查細(xì)則中的規(guī)定，系統(tǒng)梳理各檢測(cè)方法的適用性與局限性，便于檢測(cè)機(jī)構(gòu)在獸藥殘留檢測(cè)及監(jiān)管部門(mén)制定抽檢方案上采用正確的檢測(cè)方法，確保檢測(cè)報(bào)告的合規(guī)性以及檢測(cè)結(jié)論的合理性。

【關(guān)鍵詞】 獸藥殘留;檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn);研究進(jìn)展

【DOI編碼】 10.3969/j.issn.1674-4977.2021.06.002

Research Progress of Veterinary Residues Testing Standards and Methods in China

WANG En-hui，ZHANG Zhi-ran，WANG Chong-rui，ZHANG Yin-luan，YANG Bing-cheng

（Yantai Standard Measurement Inspection Center，Yantai 264003，China）

Abstract： The advantages and limitations of different detection methods were systematically reviewed. It is convenient for testing institutions and regulatory authorities to adopt correct methods. Ensuring the compliance of test reports and test conclusions.

Key words： veterinary drug residues;test standard;research progress

由于獸藥在疾病防治、提高動(dòng)物存活率以及改善農(nóng)副產(chǎn)品品質(zhì)等方面具有重要作用[1]，部分養(yǎng)殖場(chǎng)在使用含藥添加劑的飼料時(shí)不僅未按規(guī)定執(zhí)行休藥期，還施用多類別獸藥，導(dǎo)致同一農(nóng)副產(chǎn)品中獸藥殘留超標(biāo)且超標(biāo)種類多樣化，進(jìn)而影響我國(guó)農(nóng)副產(chǎn)品的進(jìn)出口貿(mào)易[2-4]。目前檢測(cè)機(jī)構(gòu)發(fā)現(xiàn)獸藥殘留超標(biāo)的主要項(xiàng)目有抗生素類（氯霉素、四環(huán)素、喹諾酮類、磺胺類）、硝基呋喃類（呋喃唑酮等）、精神類（地西泮等鎮(zhèn)靜劑）和激素類藥物（β-受體激素、雌性激素、雄性激素等）。獸藥殘留超標(biāo)的農(nóng)副產(chǎn)品已被證實(shí)具有“致癌、致畸、致突變”的危害。為切實(shí)守護(hù)消費(fèi)者舌尖上的安全，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部聯(lián)合國(guó)家衛(wèi)健委與市場(chǎng)監(jiān)管總局，在“十三五”期間制定了GB 31650—2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》[5]，該標(biāo)準(zhǔn)替代農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)中的相關(guān)部分，明確了動(dòng)物源性食品中104種（類）獸藥的最大殘留限量、154種允許用于食品動(dòng)物但不需要制定殘留限量的獸藥，以及9種允許治療用但不得在動(dòng)物性食品中檢出的獸藥，為檢測(cè)機(jī)構(gòu)在結(jié)果判定以及監(jiān)管部門(mén)的行政處罰上提供了準(zhǔn)確標(biāo)桿。雖然我國(guó)在獸藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的制定上取得突破，但由于我國(guó)現(xiàn)行有效的獸藥殘留檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)繁多，使檢測(cè)機(jī)構(gòu)和監(jiān)管部門(mén)在方法選擇和抽檢方案的制定上存在困擾。為此，GB 31650《國(guó)家食品抽查細(xì)則》2019版與2021版梳理了現(xiàn)行獸藥殘留的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，分析其前處理方法及儀器選擇的適用性與局限性，為檢測(cè)機(jī)構(gòu)及監(jiān)管部門(mén)提供理論支撐。

1 前處理的現(xiàn)狀

目前國(guó)內(nèi)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)獸藥的溶解性（脂溶性或水溶性）開(kāi)發(fā)了液液萃取、固相萃取、離子交換，以及衍生化（硝基呋喃、磺胺類）等全方位的樣品前處理方法?？偨Y(jié)發(fā)現(xiàn)：獸殘?zhí)崛「鶕?jù)其溶解性基本使用乙腈、乙腈-水溶液或緩沖鹽溶液，在提取液的凈化上分為正己烷萃取去除脂肪、二氯甲烷液液分配凈化、氮吹或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)近干后復(fù)溶解、固相萃取柱或陽(yáng)離子交換柱凈化以及QuEChERS試劑盒凈化等5種方式。由于檢測(cè)物質(zhì)的不同，各標(biāo)準(zhǔn)推薦的固相萃取柱及其凈化原理存在一些差別，分別通過(guò)范德華力、極性或非極性作用（利用HLB、C18固相萃取柱的親水或親脂性）、陰陽(yáng)離子交換（PRS、MAX固相萃取柱）結(jié)合目標(biāo)物，待去除樣本中雜質(zhì)后用試劑破壞這種吸附力，洗脫待測(cè)目標(biāo)物。

值得注意的是檢測(cè)氟苯尼考時(shí)，GB/T 22338—2008[6]采用C18固相萃取柱，而檢測(cè)喹諾酮時(shí)，GB/T 21312—2007[7]推薦使用HLB固相萃取柱，在檢測(cè)氯丙嗪時(shí)，SN/T 2113—2008[8]則使用OasisHLB固相萃取柱。已有研究發(fā)現(xiàn)HLB與OasisHLB可取代C18，前兩者的優(yōu)勢(shì)是吸附容量更大，一般是C18的3～10倍，且操作更加簡(jiǎn)便，萃取小柱干涸不會(huì)影響回收率，適合性質(zhì)各異的多種物質(zhì)提取，同時(shí)前兩者不受硅醇基的影響，對(duì)極性物質(zhì)的提取回收率更高[9]，然而受到檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的限制，檢測(cè)機(jī)構(gòu)在食品安全抽檢過(guò)程中仍要嚴(yán)格按照細(xì)則推薦的固相萃取柱，如要變更需進(jìn)行回收率、飽和率以及有效期的驗(yàn)證，并制定相關(guān)的作業(yè)指導(dǎo)書(shū)。

以GB/T 21317—2007[10]和GB/T 21312—2007為例，我們發(fā)現(xiàn)其前處理過(guò)程基本一致，這是由于二者提取的物質(zhì)極性類似，均為水溶性獸藥殘留。受此啟發(fā)，QuEChERS處理技術(shù)逐步發(fā)展起來(lái)，根據(jù)待檢測(cè)物質(zhì)親水、親脂性將溶解性或極性相似的物質(zhì)采用同一QuEChERS試劑盒提取，采用通用的C18或其他萃取柱進(jìn)化，實(shí)現(xiàn)一次提取可以同時(shí)上機(jī)檢測(cè)多種物質(zhì)的目的，極大地提高了檢測(cè)機(jī)構(gòu)的檢測(cè)效率，但由于國(guó)家食品安全抽查細(xì)則未推薦使用，目前QuEChERS處理技術(shù)多被用于企業(yè)委托檢驗(yàn)以及風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)篩查。此外，由于標(biāo)準(zhǔn)不同，檢測(cè)機(jī)構(gòu)在測(cè)定同一獸殘時(shí)遇到內(nèi)標(biāo)定量和外部定量的不統(tǒng)一，例如檢測(cè)禽類磺胺時(shí)，GB/T 21316—2007[11]使用外標(biāo)法定量，檢測(cè)水產(chǎn)品磺胺時(shí)，農(nóng)業(yè)部1077號(hào)公告-1—2008[12]使用內(nèi)標(biāo)法定量，給檢測(cè)機(jī)構(gòu)購(gòu)買(mǎi)標(biāo)準(zhǔn)品和前處理工作量增加了負(fù)擔(dān)。

另一方面受各標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中基質(zhì)與回收率的限制，雖有多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)可以用來(lái)檢測(cè)同一獸藥殘留，但需要根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)來(lái)選擇檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和前處理方法。例如檢測(cè)地西泮時(shí)雖然SN/T 2113—2008包含此項(xiàng)目，但標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)推薦中沒(méi)有水產(chǎn)品，而SN/T 3235—2012[13]標(biāo)準(zhǔn)基質(zhì)推薦中包含水產(chǎn)品，因此檢測(cè)水產(chǎn)品中的地西泮時(shí)需要使用后者，進(jìn)而達(dá)到樣品待測(cè)物質(zhì)的回收率最優(yōu)、基質(zhì)效應(yīng)影響最小的目的。此外，檢測(cè)機(jī)構(gòu)在執(zhí)行國(guó)家、省、市食品安全抽查時(shí)，選擇的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)一定是國(guó)家食品安全抽查細(xì)則中推薦的。以檢測(cè)蜂蜜中的氯霉素為例，現(xiàn)國(guó)標(biāo)GB/T 18932.19—2003《蜂蜜中氯霉素殘留量的測(cè)定方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[14]其基質(zhì)完全符合蜂蜜的提取要求，由于抽查細(xì)則中未指定該方法，機(jī)構(gòu)在檢測(cè)蜂蜜中氯霉素時(shí)仍需使用GB/T 22338—2008。又如SN/T 3235—2012除用于檢測(cè)地西泮外，標(biāo)準(zhǔn)中還可以檢測(cè)豬肉中的β-受體激素、抗生素等多種獸藥，但抽查細(xì)則未指定該方法用于檢測(cè)這些項(xiàng)目則無(wú)法使用。綜上，檢測(cè)機(jī)構(gòu)在執(zhí)行政府抽查任務(wù)的合同評(píng)審以及監(jiān)管部門(mén)制定抽檢方案時(shí)，在選擇方法的過(guò)程中除考慮基質(zhì)效應(yīng)的適用性，還要與國(guó)家食品安全抽查細(xì)則相吻合，避免檢驗(yàn)結(jié)論被推翻或行政處罰被異議的情況發(fā)生。

2 儀器處理現(xiàn)狀

伴隨前處理技術(shù)的多樣化，獸藥殘留檢測(cè)設(shè)備逐漸形成了液相色譜LC、氣相色譜GC、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜LC/MS、氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜GC/MS、三重四級(jí)桿液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜LC/MS/MS、三重四級(jí)桿氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜GC/MS/MS并存的儀器檢測(cè)體系。GB 31650—2019與《國(guó)家食品抽查細(xì)則》結(jié)合不同樣品類型與檢測(cè)機(jī)構(gòu)運(yùn)營(yíng)成本給出了多種方法推薦，基本實(shí)現(xiàn)了同一樣品的同一項(xiàng)目可以選擇多個(gè)儀器進(jìn)行檢測(cè)，但都存在各自的優(yōu)缺點(diǎn)。以檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠為例，GB/T 19857—2005[15]和GB/T 20361—2006[16]分別采用LC-MS和LC進(jìn)行檢測(cè)，且二種定量限均為0.5 μg/kg，但由于GB/T 20361—2006采用的是熒光檢測(cè)器，該檢測(cè)器為二維檢測(cè)器，當(dāng)樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)也存在激發(fā)接近波段的熒光時(shí)，會(huì)被檢測(cè)器檢測(cè)到而產(chǎn)生相應(yīng)的信號(hào)，此時(shí)為避免檢測(cè)結(jié)果的假陽(yáng)性，需通過(guò)人為加標(biāo)來(lái)排除。LC-MS根據(jù)待測(cè)物質(zhì)粒子隊(duì)定性時(shí)，據(jù)色譜圖定量達(dá)到三維檢測(cè)目的，但LC-MS常用ESI離子源，其維護(hù)成本較高，提高了運(yùn)行成本。又如檢測(cè)雞蛋中的氯霉素和氟苯尼考時(shí)采用GB/T 22338—2008第一法（氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜GC/MS）和第二法（液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜LC/MS）均可檢測(cè)，但第二法前處理簡(jiǎn)便且測(cè)定低限均為0.1 μg/kg（低于第一法）而被廣泛采用。此外檢測(cè)禽、畜類樣品中的四環(huán)素、多西環(huán)素等物質(zhì)時(shí)，GB/T 21317—2007第一法（液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜LC/MS）與第二法（液相色譜LC）均可用于檢測(cè)，二者的測(cè)定低限均為50 μg/kg，而第一法的定性效果優(yōu)于第二法（采用紫外檢測(cè)器為二維檢測(cè)器）被廣泛采用。近年來(lái)作為紫外檢測(cè)器的升級(jí)——二極管陣列檢測(cè)器，由于其在檢測(cè)時(shí)不僅能吸收紫外波長(zhǎng)還可以展現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的光譜圖，實(shí)現(xiàn)三維定性與定量分析，且該檢測(cè)器維護(hù)成本低于LC/MS的離子源而被越來(lái)越多的檢測(cè)機(jī)構(gòu)選用，在執(zhí)行政府抽查任務(wù)時(shí)，檢測(cè)機(jī)構(gòu)采用二極管陣列檢測(cè)器的液相色譜法時(shí)，需提前做好指導(dǎo)書(shū)的正向偏離備注。綜上，檢測(cè)機(jī)構(gòu)在選用儀器設(shè)備時(shí)在考慮設(shè)備精確度、準(zhǔn)確性以及經(jīng)濟(jì)性時(shí)也須跟國(guó)家食品安全抽查細(xì)則相符合。

3 總結(jié)

據(jù)獸藥的溶解性、極性等特點(diǎn)制定了液液萃取、固相萃取、離子交換、衍生化處理以及QuEChERS試劑盒等全方位前處理手段，在實(shí)現(xiàn)了同一樣品的同一項(xiàng)目可以選擇多個(gè)儀器進(jìn)行檢測(cè)的同時(shí)，逐步向快捷區(qū)分樣品基質(zhì)類型及高度凈化的方向發(fā)展。然而承擔(dān)政府抽查任務(wù)的檢測(cè)機(jī)構(gòu)，在確保檢測(cè)的樣品回收率最優(yōu)、基質(zhì)效應(yīng)影響最小、儀器靈敏度最佳的同時(shí)，必須與國(guó)家食品安全抽查細(xì)則相吻合，確保檢測(cè)報(bào)告的合規(guī)性。因此，我們期望相應(yīng)的監(jiān)管部門(mén)在制定《國(guó)家食品安全抽查細(xì)則》的過(guò)程中應(yīng)考慮檢測(cè)機(jī)構(gòu)的運(yùn)營(yíng)成本，盡量采樣提取方式通用的前處理方法，采用統(tǒng)一的外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法定量，選擇的儀器在保證精度的同時(shí)注重維護(hù)成本，進(jìn)而提升檢測(cè)報(bào)告的質(zhì)量以及監(jiān)管的有效性。

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【作者簡(jiǎn)介】

王恩輝，男，1991年出生，工程師，碩士，研究方向?yàn)槭称钒踩c化學(xué)分析。

通訊作者：張志然，女，1969年出生，高級(jí)工程師，學(xué)士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量安全監(jiān)管、食品化學(xué)分析，934698085@qq.com。