李 娜, 張碧宇, 陳鑫蘭, 隋玉杰
(1. 浙江義譜檢驗檢測技術服務有限公司, 浙江 溫州 325000;2. 溫州市質量技術檢測科學研究院, 浙江 溫州 325000; 3. 溫州市食品藥品檢驗科學研究院, 浙江 溫州 325028)
藜蘆生物堿(Veratrine) 是一種以藜蘆定(Veratrdine) 、 藜 蘆 胺 ( Veratramine) 和 蒜 藜 蘆 堿(Jervine) 為主的混合生物堿, 提取自我國盛產的百合科多年生草本植物藜蘆, 其作用機制與氯化煙酰類農藥相似, 具有觸殺和毒胃作用, 對昆蟲類害蟲有一定的抑制生長和滅殺作用, 可防治棉蚜、 玉米螟、 水稻潛葉蠅、 柑橘葉螨等多種作物害蟲。 藜蘆堿提取于自然植物, 一般認為環(huán)境相容性較好, 近年來在蔬菜水果農藥中的應用逐漸廣泛, 藜蘆堿的登記數(shù)量與產量也不斷增加。 雖然藜蘆堿是一種植物源殺蟲劑, 但對人的神經系統(tǒng)、 呼吸系統(tǒng)、 心血管系統(tǒng)、 消化系統(tǒng)、 生殖系統(tǒng)都有一定的毒性作用,嚴重時可引發(fā)痙攣抽搐、 呼吸暫停、 心律失常, 胚胎畸形等。 目前, 在食品領域還未出臺相關檢測標準, 但在化妝品領域已經在《 化妝品安全技術規(guī)范》(2015 版) 中將藜蘆堿及其鹽類列入了禁用名單[1]。
采用超高效液相色譜- 質譜/ 質譜聯(lián)用法( UPLC-MS/MS) 檢測蔬菜水果中藜蘆堿殘留量, 通過對不同蔬菜水果中藜蘆堿的萃取溶劑、 提取方法、凈化方法及色譜質譜條件進行研究, 確定前處理方法及儀器方法, 建立一個操作性強、 適應性廣、 檢測效率高的檢測方法, 準確評價蔬菜水果中藜蘆堿殘留量的含量, 并對溫州地區(qū)市售不同蔬菜水果進行檢測,達到有效監(jiān)管, 從而更好地維護消費者的健康。
藜蘆定( Veratridine, 71-62-5, 99.7%) , 藜蘆胺( Veratramine, 60-70-80, 100%) , 蒜 藜 蘆 堿( 469-59-0, Jervine, 98.5%) 標準物質, 德國Dr.Ehrenstorfer 公司提供; 乙酸乙酯、 正己烷、 乙腈、甲酸、 無水乙醇均為色譜純; 試驗用水為超純水。
超高效液相色譜- 質譜/ 質譜聯(lián)用( UPLCMS/MS) ; GCB/NH2SPE 固相萃取柱, 500 mg, 6 mL,上海安譜實驗科技股份有限公司產品; Florisil SPE固相萃取柱1 g, 6 mL, 上海安譜實驗科技股份有限公司產品; QuECHERS Clean-up Kit, 900 mg MgSO4+150 mg PSA+15 mg GCB, 15mL, 北京隆年達信科貿有限公司產品; 5430R 型高速冷凍離心機, 德國Eppendorf 公司產品。
1.2.1 試驗樣品
蘋果、 梨、 橘子、 青菜、 青椒等均為市售的水果蔬菜。
1.2.2 QuEChERS 前處理方法[2]
稱取10 g 試樣, 精確至0.01 g, 置于50 mL 離心管中, 加入10 mL 乙腈、 4 g 硫酸鎂、 1 g 氯化鈉、1 g 檸檬酸鈉、 0.5 g 檸檬酸氫二鈉, 均質1 min 后以轉速4 200 r/min 離心5 min, 吸取6 mL 上清液加到裝有900 mg 硫酸鎂及150 mg PSA 的15 mL 塑料離心管中: 對于顏色比較深的試樣在15 mL 離心管中加入885 mg 硫酸鎂、 150 mg PSA 及15 mg GCB, 旋渦混勻1 min。 以轉速4 200 r/min 離心5 min, 準確移取上清液2 mL 于10 mL 離心管中, 40 ℃下水浴氮吹至近干, 加入甲醇1 mL 復溶, 過0.22 μm 濾膜, 待儀器進樣測定。
水果、 蔬菜樣品取樣部位按GB 2763 附錄A 執(zhí)行, 將樣品切碎混勻均一化制成勻漿, 制備好的試樣均分成2 份, 裝入潔凈的盛樣容器內, 密封并標明標記。 將試樣于-18 ℃冷凍保存。
1.4.1 液相色譜條件
色譜柱: Eclipse Plus C18RRDH 1.8 μm, 2.1×50 mm, 柱溫: 35 ℃, 流速: 0.2 mL/min, 進樣量:2.0 μL, 流動相A: 甲醇(0.1%甲酸, 5 mmol/L 乙酸銨), 流動相B: 水(0.1%甲酸, 5 mmol/L 乙酸銨)。
梯度洗脫條件見表1。
表1 梯度洗脫條件
1.4.2 質譜條件
離子源: 電噴霧離子源, 掃描方式: 正離子掃描, 檢測方式: 多反應監(jiān)測( MRM) , 電噴霧電壓1 750 V, 輔助氣溫度300 ℃。
定性離子對、 定量離子對、 裂解電壓及碰撞能量見表2。
表2 定性離子對、 定量離子對、 裂解電壓及碰撞能量
配制不同質量濃度的藜蘆堿標準溶液, 以峰面積為Y 軸, 質量濃度為X 軸, 繪制標準曲線, 線性范圍10~500 ng/mL, 標準曲線的線性良好(R2>0.995) 。 分別在空白果蔬中添加0.005, 0.010, 0.050 mg/kg 3 個質量濃度標準品, 回收率范圍為81.3%~102.5%, 其相對標準偏差(RSD) 的范圍為2.2%~5.6%, 表明該方法穩(wěn)定可靠[3]。
不同樣品加標回收率和精密度見表3。
表3 不同樣品加標回收率和精密度
每種蔬菜水果檢測20 個批次。
不同樣品中藜蘆堿殘留的含量見表4。
表4 不同樣品中藜蘆堿殘留的含量/mg·kg-1
由表4 可知, 藜蘆堿在蔬菜水果中的具有一定的檢出率。
不同提取試劑對試驗回收率的影響見表5。
表5 不同提取試劑對試驗回收率的影響
由表5 可知, 選用乙腈提取為最佳方法。
不同凈化小柱試驗的回收率見表6。
由表6 可知, 選用QuECHERS Clean-up Kit 凈化萃取液回收率較高, 實際操作也較為簡便, 故選用QuECHERS Clean-up Kit 作為凈化方法。
表6 不同凈化小柱試驗的回收率
不同復溶溶劑的回收率表7。
由表7 可知, 不同復溶溶劑的回收率相差不大,相對而言, 已使用甲醇復溶的回收率較高, 又與儀器進樣流動相相同, 所以選用甲醇作為復溶溶劑。
表7 不同復溶溶劑的回收率
通過對不同蔬菜水果中藜蘆堿的萃取溶劑、 提取方法、 凈化方法進行研究, 確定前處理方法及創(chuàng)建最佳色譜質譜條件。 結果表明, 選用乙腈為萃取試劑, 使用QuECHERS Clean-up Kit 作為凈化方法,選用甲醇作為復溶溶劑為最佳前處理方法。 以市場購買的樣品檢測結果得出, 市售的蔬菜水果部分有檢出, 因此有必要對蔬菜水果進行藜蘆堿的監(jiān)測,達到有效監(jiān)管, 更好地維護消費者的健康。