耿海華，徐 倩，卓 建，王 飛，許培曙，姚莉紅，盛紅專

（南通大學(xué)附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，南通 226001）

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ê喎Q冠心?。┦枪跔顒?dòng)脈管腔狹窄或閉塞引起的心臟病,近年來冠心病的發(fā)病率呈進(jìn)一步升高和年輕化態(tài)勢,是嚴(yán)重威脅人類健康的一大疾病。研究[1]發(fā)現(xiàn)炎癥在冠心病事件中發(fā)揮重要作用。

Th1 和Th2 細(xì)胞是CD4+T 細(xì)胞（輔助T 細(xì)胞）的兩個(gè)主要亞群。Th1 細(xì)胞由T 細(xì)胞表達(dá)的T-box（Tbox expressed in T cells，T-bet）特異性調(diào)節(jié),主要分泌腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和干擾素-γ（interferon-γ，IFN-γ）等促炎因子,可引起斑塊不穩(wěn)定[2]。Th2 細(xì)胞由GATA 結(jié)合蛋白3（GATA-binding protein-3，GATA3）特異性調(diào)節(jié),主要分泌白細(xì)胞介素（interleukin，IL）-4、IL-10 等多種抗炎細(xì)胞因子[3]。T-bet/GATA3 最終決定了CD4+T 細(xì)胞的分化方向[4]。正常人體內(nèi)Th1 和Th2 細(xì)胞處于一個(gè)相對(duì)平衡的狀態(tài),Th1/Th2 失衡可引起持續(xù)過度的炎癥反應(yīng)[5]。已發(fā)現(xiàn)Th1/Th2 失衡與腫瘤[6-7]、哮喘[8]、過敏[9-10]等疾病的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有關(guān),但Th1/Th2失衡在冠心病中的作用尚不明確。

T-bet 和GATA3 分別是決定Th1 和Th2 細(xì)胞分化的重要轉(zhuǎn)錄因子,本研究以T-bet/GATA3 比值作為研究指標(biāo),探討其在冠心病中的表達(dá)和意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取2019 年12 月—2020 年12 月在南通大學(xué)附屬醫(yī)院行冠脈造影術(shù)的266 例冠心病患者為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn):（1）臨床資料完整；（2）行冠脈造影術(shù)；（3）符合臨床急性ST 段抬高型心肌梗死（ST-segment elevation myocardial infarction，STEWI）、非ST 段抬高型心肌梗死（non-ST-segment elevation myocardial infarction，NSTEWI）、不穩(wěn)定型心絞痛（unstable angina，UA）的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):（1）有嚴(yán)重肺部感染、痛風(fēng)、結(jié)締組織病等相關(guān)炎癥性疾??；（2）心肌炎患者；（3）術(shù)后合并嚴(yán)重心力衰竭,心功能Ⅲ～Ⅳ級(jí)、一般情況較差者；（4）有嚴(yán)重肝腎功能不全者；（5）合并心房顫動(dòng)、擴(kuò)張型心肌病、肥厚型心肌病等相關(guān)心臟結(jié)構(gòu)性疾病者；（6）合并惡性腫瘤及行放化療者；（7）近期有重大手術(shù)外傷患者；（8）溶栓治療者。所有患者術(shù)前均予阿司匹林、氯吡格雷或替格瑞洛抗血小板聚集及他汀類藥物調(diào)脂穩(wěn)斑治療。研究方案經(jīng)南通大學(xué)附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者均知情同意。

1.2 分組方法

1.2.1 根據(jù)臨床表型分組 根據(jù)臨床綜合癥狀、心電圖和心肌標(biāo)志物等,將有反復(fù)發(fā)作胸悶、胸痛癥狀,冠脈造影排除冠心病的患者作為對(duì)照組（46 例）,220 例冠心病患者分為:STEWI 組（56 例）、NSTEWI組（70 例）和UA 組（94 例）。

1.2.2 根據(jù)冠脈病變程度分組 根據(jù)冠脈造影結(jié)果,對(duì)患者進(jìn)行Gensini 評(píng)分,并按照評(píng)分結(jié)果對(duì)冠狀動(dòng)脈病變程度進(jìn)行分組:45～144 分,重度病變組（67 例）；21～44 分,中度病變組（73 例）；1～20 分,輕度病變組（83 例）；0 分,正常組（43 例）。

1.3 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）用淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell，PBWC）,提取RNA 后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,實(shí)時(shí)免疫熒光定量PCR 檢測患者PBWC 中T-bet、GATA3 mRNA 的表達(dá)。引物如下:GATA3:F:5′-GTGTTACCGTTCACCAGTTGC-3′；R:5′-GCAGGAATAGGGACAAGACAG-3′。T-bet:F:5′-TGGTGCTGCGTCTTGCTTT-3′；R:5′-CTGGCGGGCTGATGGTTAT-3′。β-actin:F:5′-CGGGAAATCGTGCGTGACAT-3′；R:5′-CAGGAAGCAAGGCTGGAAGA-3′。擴(kuò)增程序:95 ℃預(yù)變性5 min,然后95 ℃15 s,60 ℃30 s,72 ℃30 s,40 個(gè)循環(huán)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 使用SPSS 22.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理及分析,符合正態(tài)性分布的計(jì)量資料以表示,以單因素方差分析；不符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示,采用非參數(shù)Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以n（%）表示,采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同臨床亞型組間臨床資料的比較 對(duì)不同臨床亞型組患者的臨床資料進(jìn)行分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)4組患者的性別、高血壓、血糖、B 型鈉尿肽（type B natriuretic peptide，BNP）、膽固醇、低密度脂蛋白、生長刺激表達(dá)基因2 蛋白（growth stimulation expressed gene 2，ST2）、D-二聚體比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05）,年齡和三酰甘油比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）,進(jìn)一步組間比較發(fā)現(xiàn):冠心病組以男性患者居多（P<0.05）,STEWI 組、NSTEWI 組中BNP、膽固醇、低密度脂蛋白、ST2 水平均較UA 組和對(duì)照組顯著升高（均P<0.05）（表1）。

表1 冠心病不同臨床亞型組間臨床資料分析[n，%，，中位數(shù)（四分位數(shù)間距）]

表1 冠心病不同臨床亞型組間臨床資料分析[n，%，，中位數(shù)（四分位數(shù)間距）]

注:與STEWI 組相比,*P<0.05；與NSTEWI 組相比,#P<0.05。

2.2 T-bet/GATA3 在冠心病不同臨床亞型組間的表達(dá)比較 T-bet/GATA3 在STEWI 組中表達(dá)最高,NSTEWI 組、UA 組、對(duì)照組中依次降低（均P<0.05）（圖1）。

圖1 不同臨床表型冠心病患者T-bet/GATA3 表達(dá)比較

2.3 T-bet/GATA3 在不同冠脈病變程度組間表達(dá)比較 與正常組相比,冠脈重度病變組、中度病變組和輕度病變組T-bet/GATA3 均顯著升高（均P<0.05）,但T-bet/GATA3 在這3 組之間的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（圖2）。

圖2 不同冠脈病變程度患者T-bet/GATA3 表達(dá)比較

3 討 論

冠心病是嚴(yán)重威脅人類健康的主要疾病之一,本研究以炎癥調(diào)節(jié)因子T-bet/GATA3 比值為切入點(diǎn),探討其所調(diào)控的Th1/Th2 失衡在冠心病中的作用。

在對(duì)冠心病患者的臨床資料分析中發(fā)現(xiàn),患者主要以男性、合并高血壓、血糖升高者居多,這與冠心病發(fā)病的流行病學(xué)一致；STEWI 組和NSTEWI 組膽固醇、低密度脂蛋白等較UA 組、對(duì)照組顯著升高,冠心病的病理基礎(chǔ)是粥樣斑塊的形成,這與冠心病的病理機(jī)制有關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn),T-bet/GATA3 比值在STEWI 組、NSTEWI 組、UA 組均顯著高于對(duì)照組,提示冠心病患者體內(nèi)Th1 炎癥信號(hào)增加,Th2 炎癥信號(hào)減低,即存在Th1 和Th2 炎癥反應(yīng)的失衡,且是偏向Th1 細(xì)胞的炎癥優(yōu)勢,與X.YAN 等[11]研究結(jié)果一致。同時(shí),Tbet/GATA3 在UA 組、NSTEWI 組和STEWI 組表達(dá)依次升高,說明T-bet/GATA3 的表達(dá)與冠心病臨床表型相關(guān),因此通過檢測T-bet/GATA3 可對(duì)冠心病臨床表型的判斷及病情的評(píng)估提供一定的參考價(jià)值。

Gensini 評(píng)分可量化冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變血管的狹窄程度和解剖位置[12]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),與正常組相比,冠脈重度病變組、中度病變組和輕度病變組T-bet/GATA3 的表達(dá)均顯著升高,但3 組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明T-bet/GATA3 與冠心病斑塊形成有關(guān),而與冠脈狹窄程度無關(guān)。

目前研究[6]發(fā)現(xiàn)乳腺癌患者中存在Th1/Th2 失衡,柴胡皂甙調(diào)節(jié)Th1/Th2 平衡向Th1 轉(zhuǎn)移可抑制乳腺癌的生長。在慢性心力衰竭患者體內(nèi)也發(fā)現(xiàn)Th1、Th2 及其細(xì)胞因子IFN-γ、IL-4 的失衡,百里香酚調(diào)節(jié)Th1/Th2 極化可改善心臟功能[4]。本研究發(fā)現(xiàn)冠心病患者體內(nèi)存在T-bet/GATA3 升高,即Th1/Th2 的失衡,并且傾向于Th1 炎癥方向。調(diào)節(jié)體內(nèi)Th1 和Th2 細(xì)胞炎癥的平衡,可為冠心病的免疫治療提供新的思路。