梁健宇

摘要：目的：探討TTC培養(yǎng)基法對食品進(jìn)行微生物檢驗的價值。方法：遴選本檢驗所需要檢驗的100份食品樣品進(jìn)行研究（2019年03月至2020年12月），由同一位工作人員采集兩份同樣的樣品，其中一份實施TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計數(shù)法檢驗，另一份將樣品送往上級實驗室檢驗，對兩份樣品進(jìn)行同種項目檢測，并以上級實驗室檢驗為金標(biāo)準(zhǔn)，分析不同檢驗方法臨床價值。結(jié)果：平板菌落計數(shù)法檢驗結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率83.00%，TTC培養(yǎng)基法檢驗結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，組間對比P<0.05。結(jié)論：TTC培養(yǎng)基法在食品微生物檢驗中準(zhǔn)確率較高，可作為檢驗食品質(zhì)量的優(yōu)選方案，值得借鑒。

關(guān)鍵詞：TTC培養(yǎng)基法;食品;微生物檢驗;平板菌落計數(shù)法;上級實驗室;食品質(zhì)量

【中圖分類號】G644.5 ? ? ? ? ? ? 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）07--02

受益于社會經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、居民生活質(zhì)量的提升，當(dāng)前我國居民對食品衛(wèi)生要求逐漸升高，但研究發(fā)現(xiàn)食物在加工及運輸過程中受多種因素影響，極易出現(xiàn)衛(wèi)生狀況不合格等情況，究其原因是食物與微生物接觸后導(dǎo)致食物發(fā)生污染，不僅會影響食品質(zhì)量，亦可影響我國居民健康程度，鑒于此需對食品進(jìn)行有效檢驗[1]。目前多通過平板菌落計數(shù)法對食品中微生物菌落總數(shù)進(jìn)行檢驗，但據(jù)悉該方案雖可獲得一定價值，但平板菌落計數(shù)法無法確保檢驗質(zhì)量，近年隨著食品微生物檢驗技術(shù)的發(fā)展，目前TTC培養(yǎng)基法被應(yīng)用在臨床檢驗中，為進(jìn)一步明確其臨床價值，本文遴選2019年03月至2020年12月接收食品樣品100份進(jìn)行研究，具體情況如下。

1資料與方法

1.1一般資料

遴選100份食品樣品進(jìn)行研究，其中48份小吃、46份冷凍飲品、6份能力驗證樣品，均來源于本實驗室檢驗的樣品。TTC溶液來自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，平板計數(shù)瓊脂來自北京陸橋技術(shù)股份有限公司，營養(yǎng)瓊脂來自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

1.2方法

納入研究100份食品樣品均實施TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計數(shù)法檢驗，具體操作方法如下：（1）平板菌落計數(shù)法：為確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性，平板菌落計數(shù)法檢驗需按照國際標(biāo)準(zhǔn)（GB4789.2-2016標(biāo)準(zhǔn)）進(jìn)行，實施前采集25g樣品放入含無菌生理鹽水（225ml）錐形瓶中，通過搖晃使樣品充分混勻;其次吸出1ml樣品（無菌吸管），而后沿著試管壁緩慢注入9ml生理鹽水，通過震蕩混合，得到1：100的樣品溶液;按上述方法制備出1：1000、1：10000的樣品溶液。在檢驗過程中根據(jù)樣品污染情況選擇稀釋合適的樣品溶液，分別吸取1ml放置入無菌器皿中（每個稀釋度做2個器皿），分別提取1ml空白稀釋液放置入2個器皿中（空白對照樣品）。最后對瓊脂培養(yǎng)基進(jìn)行加溫（46℃）處理，將15ml加入器皿中通過轉(zhuǎn)動混勻，當(dāng)出現(xiàn)瓊脂塊后翻轉(zhuǎn)放置在36℃溫度中培養(yǎng)48-50h。（2）TTC培養(yǎng)基法：為確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性，TTC培養(yǎng)基法實施需按照GB4789.2-2016標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，首先取1ml0.5%的TTC溶液（100ml）加入瓊脂培養(yǎng)基中制備出TTC瓊脂培養(yǎng)基，樣品接種及培養(yǎng)方法如平板菌落計數(shù)法。

1.3觀察指標(biāo)

以上級實驗室檢驗結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，分析TTC培養(yǎng)基法、平板菌落計數(shù)法檢驗與金標(biāo)準(zhǔn)符合率。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

食品樣品選用SPSS22.0統(tǒng)計軟件分析準(zhǔn)確率等計數(shù)資料（以n、%表示，X2檢驗），有統(tǒng)計學(xué)意義以P<0.05表示。

2.結(jié)果

上級實驗室檢驗結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對比發(fā)現(xiàn)TTC培養(yǎng)基法檢驗與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，平板菌落計數(shù)法與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為83.00%，組間對比（P<0.05）。詳見表1。

3.討論

隨著社會的發(fā)展近年食品加工企業(yè)得到了快速發(fā)展，市面上食品種類越來越多，但近年食品安全問題層出不窮，不僅嚴(yán)重威脅人體健康，還提高社會大眾對食物安全重視程度[2]。據(jù)悉食品在加工、貯存、運輸過程中會接觸各種微生物，一旦食品中微生物含量超標(biāo)會導(dǎo)致食物變質(zhì)，鑒于此需加強食品的檢驗以明確其是否合格，針對不合格者需及時處理，避免進(jìn)入市場后引起的社會性問題[3]。

既往人們多通過平板菌落計數(shù)法對食品中微生物進(jìn)行檢驗，但其檢驗效果及準(zhǔn)確性一般，但最新研究發(fā)現(xiàn)TTC培養(yǎng)基法在食品檢驗中亦可獲得理想價值，為進(jìn)一步探討TTC培養(yǎng)基法在食品微生物檢驗中價值，本文選擇100份食品樣品進(jìn)行研究，給予其不同方案檢驗以明確準(zhǔn)確率最高方案，為臨床檢驗食品質(zhì)量提供參考，結(jié)果顯示：以上級實驗室結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)發(fā)現(xiàn)平板菌落計數(shù)法檢驗結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率83.00%，TTC培養(yǎng)基法檢驗結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)相符率為99.00%，組間對比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），由此證實TTC培養(yǎng)基法在食品檢驗中更具優(yōu)勢，可替代平板菌落計數(shù)法成為檢驗食品質(zhì)量的首選方案，分析：（1）從理論上將平板菌落計數(shù)法主要是根據(jù)固體培養(yǎng)器皿中微生物沉積情況對菌落數(shù)量進(jìn)行分析，但在實際檢驗過程中需要對待檢樣品進(jìn)行稀釋，將樣品中的微生物分散成單個細(xì)胞，并將取得的稀釋液涂抹在平板上進(jìn)行分析，在實施細(xì)菌培養(yǎng)過程單個細(xì)胞通過繁殖均可形成菌落，不需要借助顯微鏡便可直接發(fā)現(xiàn);其次在菌落計算完畢后可通過稀釋倍數(shù)等對微生物總量進(jìn)行計算，分析其感染程度，通過實踐發(fā)現(xiàn)平板菌落計數(shù)法操作簡單，因此被廣泛應(yīng)用在微生物檢驗過程中，但該方案對操作人員專業(yè)能力要求較高，若操作過程中沒有將各個微生物分開，或平行劃線、扇形劃線等操作要求不達(dá)標(biāo)，不僅會導(dǎo)致微生物集合在一起，還會影響菌落計數(shù)結(jié)果，因此一旦實際操作過程中檢驗人員專業(yè)知識不足或操作水平無法達(dá)到檢驗要求，便會導(dǎo)致檢驗不不合格等情況[4-8]。（2）TTC培養(yǎng)基法作為標(biāo)準(zhǔn)的氧化還原電位為80mV的氧化還原位置，在水中無色但一旦被還原，便會轉(zhuǎn)化為紅色且不會溶于水;研究發(fā)現(xiàn)，大部分微生物中含有脫氫酶，其會導(dǎo)致作用物發(fā)生脫氫效果，因此在實施過程中自瓊脂中加入適量的TTC（每100ml中加入0.5%TTC1ml），借助細(xì)菌微生物特性使其變成紅色，在檢驗過程中通過觀察TTC瓊脂顏色，便可對微生物含量進(jìn)行測定[9]。與平板菌落計數(shù)法相比TTC培養(yǎng)基法準(zhǔn)確率較高，據(jù)悉當(dāng)食品樣品污染程度較嚴(yán)重（每個器皿中微生物含量計數(shù)>200）便會平板計數(shù)無法進(jìn)行，而TTC培養(yǎng)基法檢驗中即使微生物含量計數(shù)>300依舊可準(zhǔn)確檢出微生物數(shù)量，但該方案檢驗成本較高，無法廣泛應(yīng)用在食品微生物檢驗過程中[10]。

食品微生物檢驗結(jié)果受制度、設(shè)備、流程、人為因素等影響，制度因素是指實驗室制定的檢驗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善，醫(yī)院平時在管理中對檢驗標(biāo)準(zhǔn)宣傳不足，導(dǎo)致工作人員在實際檢驗中不按照規(guī)定制度進(jìn)行檢驗，致使檢驗結(jié)果準(zhǔn)確率不高;所謂設(shè)備因素是指進(jìn)行微生物檢驗的設(shè)備出現(xiàn)老化、故障，導(dǎo)致檢驗結(jié)果出現(xiàn)誤差，從而影響檢驗結(jié)果準(zhǔn)確率，還有部分檢驗人員因操作不規(guī)范導(dǎo)致檢驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確;所謂流程因素是檢驗人員對檢驗流程、培養(yǎng)基方法認(rèn)知不足，導(dǎo)致培養(yǎng)基在存貯過程中發(fā)生污染;人為因素是檢驗人員專業(yè)能力不足所致，實驗室管理人員對檢驗人員考核不足，平時沒有加強專業(yè)能力培訓(xùn)會導(dǎo)致其無法滿足檢驗需求，從而出現(xiàn)管理失誤等情況，除上述因素外食品微生物檢驗結(jié)果還受多種因素影響，因此檢驗人員在工作中一定要加強自身專業(yè)素養(yǎng)提升，避免因自身因素影響檢驗結(jié)果準(zhǔn)確率。結(jié)合上述影響檢驗結(jié)果因素，微生物檢驗科室一定要結(jié)合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)定，規(guī)范檢驗制度明確檢驗過程中需要注意事項，從而確保檢驗質(zhì)量;其次在實驗室管理中一定要保持良好的通風(fēng)及照明，并盡量在干凈無菌環(huán)境中進(jìn)行檢驗，避免其他因素造成的污染，同時需按照相關(guān)規(guī)定合理穿戴檢驗服，以確保自身安全性;再者定期對實驗室進(jìn)行消毒，所用設(shè)備均需按照相關(guān)要求消毒、滅菌后使用，同時實驗室要加強質(zhì)量控制，還需重視檢驗制度的制定與完善，降低其他因素對檢驗結(jié)果的影響。為確保微生物檢驗結(jié)果及質(zhì)量，檢驗室需定期引進(jìn)先進(jìn)的設(shè)備，在設(shè)備使用前需首先明確設(shè)備操作方法，還需根據(jù)提示進(jìn)行預(yù)熱，同時對科室內(nèi)專業(yè)人員進(jìn)行培訓(xùn)使其按照相關(guān)流程進(jìn)行工作，而在工作中需保持謹(jǐn)慎的態(tài)度，盡可能準(zhǔn)確記錄培養(yǎng)基顏色、生物學(xué)指標(biāo)等，確保其在培養(yǎng)過程中滿足微生物生長要求，避免影響檢驗結(jié)果準(zhǔn)確率。

注意事項：TTC培養(yǎng)基法檢驗結(jié)果不僅受操作流程規(guī)范程度、無菌制度的影響，還易受檢驗人員專業(yè)能力影響，因此檢驗室在管理中要加強檢驗人員專業(yè)能力的培訓(xùn)，盡可能通過定期培訓(xùn)、講座、技能考核等提高其專業(yè)能力，使其在工作中高質(zhì)量完成各檢驗任務(wù)，還可有效處理突發(fā)事件，確保檢驗結(jié)果準(zhǔn)確性。實驗室環(huán)境也會影響檢驗結(jié)果，因此在實驗室檢驗過程中需合理控制溫度、濕度，盡可能讓各個培養(yǎng)皿干燥、整潔并符合檢驗要求，而操作人員在檢驗前需對各項參數(shù)進(jìn)行檢查，確保其各正常運轉(zhuǎn)且不會影響檢驗結(jié)果。為避免操作流程復(fù)雜影響檢驗結(jié)果，需對食品微生物的檢驗檢測材料、設(shè)備、方式進(jìn)行明確，不可隨意更改，還需對食品微生物進(jìn)行針對性抽檢，以明確其檢驗結(jié)果。

不足之處：基于本研究方案設(shè)計較為簡單，通過對比研究雖可證實TTC培養(yǎng)基法價值，但未明確其對細(xì)菌菌落檢出情況，加之本研究納入樣本數(shù)量較少，無法為檢驗人員提供高質(zhì)量的參考，鑒于此后期需優(yōu)化研究設(shè)計方案，通過多指標(biāo)、多數(shù)據(jù)對比為食品檢驗人員提供參考，還需盡可能擴(kuò)大研究樣本以分析影響檢驗結(jié)果因素，從而展開針對性管理，提高TTC培養(yǎng)基法檢驗價值。

綜上所述，TTC培養(yǎng)基法可提高食品檢驗準(zhǔn)確率，因此可將其作為檢驗食品質(zhì)量的首選方案，值得借鑒。

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