馮學(xué)軒 王 弋 嚴(yán)家榮 饒子亮 梁秋玲 鄺少松(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,廣州528248)
免疫是機(jī)體至關(guān)重要的保護(hù)性生理功能,可有效地識(shí)別危險(xiǎn)信號(hào),抵御外來病原微生物的入侵并清除體內(nèi)有害物質(zhì),最終維持自身內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)。但免疫力一旦下降,機(jī)體的抵抗能力也將隨之降低,容易引起疾病的發(fā)生[1-2]??梢姡岣呙庖吡?duì)維持人體健康有著重要意義。目前,臨床上雖然有著不少的免疫增強(qiáng)劑可用于提高人體免疫力,但成本高,副作用大,并不適合正常人群使用,為此,本研究擬將天然活性蛋白乳清蛋白、小麥蛋白與酵母β-葡聚糖進(jìn)行組合,以求開發(fā)出安全性高、可供正常人群使用的增強(qiáng)免疫力保健食品。
眾多研究指出,蛋白質(zhì)是維持和修復(fù)機(jī)體以及細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),在體內(nèi)水解為氨基酸被吸收后重新合成各種蛋白質(zhì),這其中就包括了免疫細(xì)胞生成和抗體合成所需的蛋白質(zhì),但蛋白質(zhì)在體內(nèi)不能被貯存,必須水解成氨基酸后才能被利用[3-4]。因此,所攝入蛋白質(zhì)的氨基酸構(gòu)成成為了其發(fā)揮作用的關(guān)鍵。乳清蛋白其主要成分為β-乳球蛋白(48%),α-乳白蛋白(19%),它們是必需氨基酸和支鏈氨基酸的良好來源,其中的必需氨基酸含量還遠(yuǎn)高于植物性來源的蛋白質(zhì),這些必需氨基酸參與了絕大多數(shù)免疫因子的合成,而支鏈氨基酸對(duì)于組織的生長(zhǎng)和修復(fù)起著十分重要的作用[5-6]。小麥蛋白則富含谷氨酸和脯氨酸,能提供人體淋巴細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)成分、促進(jìn)免疫球蛋白分泌并調(diào)節(jié)腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng),與乳清蛋白組合可為機(jī)體免疫反應(yīng)提供氨基酸原料,是免疫反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ),但光有物質(zhì)基礎(chǔ)并不能充分調(diào)動(dòng)機(jī)體的免疫效能[7]。因此,本研究創(chuàng)新性地加入了酵母β-葡聚糖。酵母β-葡聚糖具有特殊的三維結(jié)構(gòu),能與巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞表面受體結(jié)合,影響細(xì)胞的信息傳遞過程,激活淋巴細(xì)胞的免疫活性,使其能夠快速地到達(dá)病原所在位置,是免疫反應(yīng)的助推劑,協(xié)助乳清蛋白和小麥蛋白發(fā)揮免疫增強(qiáng)作用[8-10]。但該組合應(yīng)用尚屬首次,其功效也未被驗(yàn)證,為此本研究擬通過一系列免疫試驗(yàn)驗(yàn)證該組合的功效,也為其后續(xù)的開發(fā)利用提供基礎(chǔ)的藥效學(xué)資料。
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境 5 個(gè)實(shí)驗(yàn)分別采用50 只SPF 級(jí)BALB/c 小鼠,雄性,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,生產(chǎn)許可證:SCXK(粵)2018-0002。動(dòng)物飼養(yǎng)在SPF 級(jí)動(dòng)物房。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào):44007200069671、44007200070000、44007200069588、44007200069996、44007200069970,飼養(yǎng)溫度與濕度:20~26℃,40%~70%,采用12 h 晝夜間斷照明。動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水,所有飼料和飲用水均由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。 試驗(yàn)倫理編號(hào):A201910-4、 A201910-2、 A201910-6、 A201910-5、A201910-3。本試驗(yàn)涉及的與動(dòng)物試驗(yàn)相關(guān)的內(nèi)容和程序遵從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用和管理的相關(guān)法律法規(guī)及廣東省醫(yī)學(xué)使用動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)的相關(guān)規(guī)定。
1.1.2 藥物及主要試劑 乳清蛋白、小麥蛋白與酵母β-葡聚糖組合物:每4.2 g 組合物含酵母β-葡聚糖0.14 g,(湯臣倍健股份有限公司);轉(zhuǎn)移因子口服溶液(批號(hào)190315,南京瑞爾醫(yī)藥有限公司);2,4-二硝基氟苯(DNFB,批號(hào)C10266157,麥克林公司);丙酮(批號(hào)20170202-2,廣州化學(xué)試劑廠);橄欖油(批號(hào)C10438064,麥克林公司);薇婷脫毛膏[批號(hào)2022011610H,利潔時(shí)家化(中國(guó))有限公司];氯化鈉注射液(批號(hào)G19052106-1,廣東科倫藥業(yè)有限公司);印度墨汁(批號(hào)1126A18,雷根生物有限公司);無水碳酸鈉(批號(hào)20180709,廣東光華科技股份有限公司);脫纖維綿羊血(批號(hào)Y18N10D103400,源葉生物有限公司);Triton X-100(批號(hào)84000150,北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司);PBS(批號(hào)94F001200,廣州鼎國(guó)科技有限公司);Tris base(批號(hào)7626010160,Genview公司);鹽酸(批號(hào)20170204-1,廣州化學(xué)試劑廠);乳酸鋰(批號(hào)C10096217,麥克林公司);硝基氯化四氮唑(INT,批號(hào)C10079977,麥克林公司);吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS,批號(hào)71222010120,Genview 公司);氧化型輔酶Ⅰ(NAD,批號(hào)8830010130,GENVIEW 公司);刀豆蛋白A(Con A,批號(hào)SLBP2641V,北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司);MTT(批號(hào)7101K,MP 公司);異丙醇(批號(hào)20190303,廣東光華科技股份有限公司)。
1.1.3 主要儀器 JEA3001型電子天平(感量0.1 g,上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司);BSA224S型電子天平(感量0.1 mg,德國(guó)Sartorius 公司);Multiskan GO 型全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀(美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司);GHG-9245A 型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科技有限公司);KDC-2046低速冷凍離心機(jī)(科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司);SW-CJ-2FD型超凈工作臺(tái)(蘇州凈化有限公司);熒光倒置相差顯微鏡(型號(hào)CKX41,日本奧林巴斯公司);CCL-170B-8CO2 培養(yǎng)箱(新加坡ESCO公司)。
1.2 方法 將小鼠隨機(jī)分為陰性對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、組合物低、中、高劑量組,10只/組,共5組。分組后,陽(yáng)性對(duì)照組灌胃轉(zhuǎn)移因子口服液原液,組合物低、中、高劑量組分別按0.7、1.4、2.1 g/kg的劑量灌胃受試物溶液,陰性對(duì)照組動(dòng)物灌胃溶媒(0.5%CMC-Na溶液),灌胃體積20 ml/kg,1次/d,連續(xù)30 d,末次給藥后進(jìn)行下列各項(xiàng)試驗(yàn)。
1.2.1 小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響試驗(yàn) 給藥30 d后各組動(dòng)物安樂死后無菌取脾,將脾置于200 目篩網(wǎng)上并浸于無菌Hank's 液中,輕輕研磨并制成單細(xì)胞懸液,1000 r/min,離心10 min,沉淀細(xì)胞經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后,RPMI1640 完全培養(yǎng)液重懸淋巴細(xì)胞,用臺(tái)盼蘭染色計(jì)算活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95% 以上),用RPMI1640 完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為3×106個(gè)/ml。將每份脾細(xì)胞懸液分2孔加入24孔培養(yǎng)板中,每孔1 ml,一孔加75 μl ConA 液,另一孔加入75 μl培養(yǎng)液作對(duì)照。置細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72 h。培養(yǎng)結(jié)束前4 h,每孔吸去0.7 ml 上清液,加入0.7 ml 不含胎牛血清的RPMI1640 培養(yǎng)液,同時(shí)按50 μl/孔加入5 mg/ml MTT 溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4 h。培養(yǎng)結(jié)束后,每孔加入1 ml 酸性異丙醇,吹打混勻,使紫色結(jié)晶完全溶解后分裝至96 孔板中,每孔做3 個(gè)平行孔,酶標(biāo)儀570 nm 測(cè)定吸光度。按下式計(jì)算脾淋巴細(xì)胞增殖能力。脾淋巴細(xì)胞增殖能力=Con A孔吸光度值?無Con A孔吸光度值。
1.2.2 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn) 給藥25 d,動(dòng)物腹部用薇婷脫毛膏脫毛,面積約為3 cm×3 cm,脫毛后用50 μl 的DNFB 溶液均勻涂抹脫毛區(qū)域致敏。5 d 后,用10 μl 的DNFB 溶液均勻涂抹于小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊,攻擊后24 h 頸椎脫臼處死小鼠,用打孔器取下直徑約為8 mm的耳片,分別稱重。計(jì)算左右耳片重量之差。
1.2.3 小鼠血清溶血素生成試驗(yàn) 給藥27 d,每只小鼠腹腔注射2% 綿羊血壓積紅細(xì)胞懸液0.2 ml。給藥30 d 后動(dòng)物眼眶靜脈竇采血,2000 r/min 離心10 min,取血清。用生理鹽水將血清倍半稀釋11 次共得11個(gè)稀釋度的血清,將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝實(shí)驗(yàn)板內(nèi),每孔100 μl,再加入100 μl 0.5%(v/v)的綿羊血壓積紅細(xì)胞懸液,混勻,于濕潤(rùn)的平盤內(nèi)加蓋37℃溫箱孵育3 h,觀察血球凝集程度:分5 級(jí)(0~Ⅳ)記錄,并按下式計(jì)算抗體積數(shù):抗體積數(shù)=(S1+2S2+3S3+……nSn),式中1、2、3、……n代表對(duì)倍稀釋的指數(shù),S 代表凝集程度的級(jí)別,抗體積數(shù)越大,表示血清抗體越高。0 級(jí),紅細(xì)胞全部下沉,集中在孔底部形成致密的圓點(diǎn)狀,四周液體清澈;Ⅰ級(jí),紅細(xì)胞大部分沉集在孔底成圓點(diǎn)狀,四周有少量凝集的紅細(xì)胞;Ⅱ級(jí),凝集的紅細(xì)胞在孔底形成薄層,中心可以明顯見到一個(gè)疏松的紅點(diǎn);Ⅲ級(jí),凝集的紅細(xì)胞均勻地鋪散在孔底成一薄層,中心隱約可見一個(gè)小紅點(diǎn);Ⅳ級(jí),凝集的紅細(xì)胞均勻地鋪散在孔底成一薄層,凝塊有時(shí)成卷折狀。
1.2.4 小鼠碳廓清試驗(yàn) 給藥30 d 后,各組動(dòng)物按10 ml/kg 的注射體積尾靜脈注射稀釋為原液3 倍的印度墨汁。注入墨汁后2、10 min,分別從眼眶靜脈竇采血20 μl,并立即加到2 ml 0.1%Na2CO3溶液中,以Na2CO3溶液作空白對(duì)照,用酶標(biāo)儀在600 nm波長(zhǎng)處測(cè)定光密度值(OD),同時(shí)剖取肝臟和脾臟稱重,按下式計(jì)算吞噬指數(shù)a:a=體重/(肝重+脾重)(lgOD1?lgOD2)/(t2?t1)。
1.2.5 靶細(xì)胞(YAC-1)傳代 YAC-1細(xì)胞傳代培養(yǎng)3 代后,試驗(yàn)時(shí)將靶細(xì)胞混懸液1000 r/min 離心10 min,沉淀細(xì)胞加入RPMI1640完全培養(yǎng)液吹散,臺(tái)盼蘭染色計(jì)算活細(xì)胞數(shù)后調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105個(gè)/ml。
1.2.6 小鼠NK 細(xì)胞活性試驗(yàn) 給藥30 d 后各組動(dòng)物安樂死后無菌取脾,將脾置于200 目篩網(wǎng)上并浸于無菌Hank's 液中,輕輕研磨并制成單細(xì)胞懸液,1000 r/min離心10 min,沉淀細(xì)胞經(jīng)紅細(xì)胞裂解液裂解紅細(xì)胞后,RPMI1640完全培養(yǎng)液重懸淋巴細(xì)胞,用臺(tái)盼蘭染色計(jì)算活細(xì)胞數(shù)(應(yīng)在95%以上),用RPMI1640完全培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107個(gè)/ml。取靶細(xì)胞YAC-1和效應(yīng)細(xì)胞(脾淋巴細(xì)胞)各100 μl(效靶比50∶1),加入U(xiǎn) 型96 孔培養(yǎng)板中,靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μl;靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和2.5%Triton 各100 μl,上述各項(xiàng)均設(shè)3 個(gè)平行孔,細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h 后將U 型96 孔培養(yǎng)板離心并吸取上清100 μl 置于96 孔培養(yǎng)板中,同時(shí)加入LDH 基質(zhì)液100 μl,反應(yīng)6 min 后每孔加入1 mol/L 的HCl 30 μl,在酶標(biāo)儀490 nm 處測(cè)定光密度值(OD)。按下式計(jì)算NK細(xì)胞活性:NK細(xì)胞活性(%)=(反應(yīng)孔OD?自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD?自然釋放孔OD)×100%。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)采用±s表示,應(yīng)用SPSS21.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)左右耳片重量差值采用秩和檢驗(yàn)。其余各項(xiàng)試驗(yàn)采用單因素方差分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1 小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 結(jié)果見圖1。與陰性對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組、組合物中、高劑量組脾淋巴細(xì)胞增殖能力明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),組合物低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
圖1 Con A誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力Fig.1 Proliferation of mice Con A-induced splenocytes
2.2 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)左右耳片重量差值 與陰性對(duì)照組相比,各組左右耳片重量差值均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,表1)。
表1 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)左右耳片重量差值(±s,n=10,mg)Tab.1 Weight difference between left and right ear of mice in delayed-type hypersensitivity response(±s,n=10,mg)
表1 小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)左右耳片重量差值(±s,n=10,mg)Tab.1 Weight difference between left and right ear of mice in delayed-type hypersensitivity response(±s,n=10,mg)
Groups Negative control Positive control Combination low dose Combination middle dose Combination high dose Dose?20 ml/ kg 0.7 g/ kg 1.4 g/ kg 2.1 g/ kg Weight difference between left and right ear 19.2±5.120.1±2.120.6±4.019.9±2.220.4±5.5
2.3 小鼠血清溶血素生成試驗(yàn) 與陰性對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組、組合物中劑量組血清溶血素抗體積數(shù)明顯升高,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖2),其余各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,圖2)。
圖2 小鼠血清溶血素生成試驗(yàn)抗體積數(shù)結(jié)果Fig.2 Results of antibody titre level in mice serum hemo?lysin production test
2.4 小鼠碳廓清試驗(yàn) 與陰性對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組、組合物低、中劑量組吞噬指數(shù)明顯升高,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,圖3),組合物高劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,圖3)。
圖3 小鼠碳廓清試驗(yàn)吞噬指數(shù)結(jié)果Fig.3 Results of phagocytic index in mice carbon clear?ance test
2.5 小鼠NK細(xì)胞活性試驗(yàn) 與陰性對(duì)照組相比,陽(yáng)性對(duì)照組、組合物高劑量組NK細(xì)胞活性明顯升高(P<0.05,圖4),其余各組無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,圖4)。
圖4 小鼠NK細(xì)胞活性試驗(yàn)結(jié)果Fig.4 Results of mice NK cell activity test
免疫系統(tǒng)作為人體的一道天然屏障,具有免疫監(jiān)視、防御、調(diào)控的作用,可分為特異性免疫和非特異性免疫,前者又分為細(xì)胞免疫和體液免疫,分別由T 淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞發(fā)揮作用,后者則主要由固有免疫細(xì)胞,如單核巨噬細(xì)胞,NK 細(xì)胞等發(fā)揮作用。因此,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)在評(píng)價(jià)免疫功能時(shí)也主要從細(xì)胞免疫、體液免疫、單核巨噬細(xì)胞吞噬能力及NK細(xì)胞活性這四個(gè)方面進(jìn)行[11]。為此,本研究通過脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)、遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)、血清溶血素生成試驗(yàn)、碳廓清試驗(yàn)及NK 細(xì)胞活性試驗(yàn),評(píng)價(jià)乳清蛋白、小麥蛋白與酵母β-葡聚糖組合后對(duì)機(jī)體特異性免疫和非特異性免疫功能的影響。
試驗(yàn)結(jié)果顯示,乳清蛋白和小麥蛋白配伍酵母β-葡聚糖,有2 個(gè)劑量在提高脾淋巴細(xì)胞增殖能力(1.4 及2.1 g/kg),增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力(0.7 及1.4 g/kg)上發(fā)揮作用,有1 個(gè)劑量在提高血清溶血素生成水平(1.4 g/kg)及提高NK細(xì)胞活性(2.1 g/kg)上發(fā)揮作用。由此可見,將天然蛋白提取物乳清蛋白和小麥蛋白與酵母β-葡聚糖組合,確實(shí)具有增強(qiáng)免疫力的功效。且其作用效果初步估計(jì)是以提高細(xì)胞免疫中的脾淋巴細(xì)胞增殖能力及增強(qiáng)非特異性免疫中的巨噬細(xì)胞吞噬能力為主,以提高體液免疫中的血清溶血素生成水平及增強(qiáng)非特異性免疫中的NK細(xì)胞殺傷活性為輔。
在特異性免疫方面,細(xì)胞免疫主要由T 淋巴細(xì)胞介導(dǎo),T 淋巴細(xì)胞的增殖能力決定了效應(yīng)T 細(xì)胞的數(shù)量及細(xì)胞免疫應(yīng)答的強(qiáng)度,直接反映了機(jī)體的細(xì)胞免疫功能[12-14]。乳清蛋白和小麥蛋白在體內(nèi)可分別被水解為必需氨基酸和谷氨酸,必需氨基酸是蛋白合成的重要原料,而谷氨酸則參與三羧酸循環(huán),為蛋白質(zhì)合成提供能源[7,15],這些都為T 細(xì)胞的增殖提供物質(zhì)基礎(chǔ),因此可發(fā)現(xiàn)在淋巴細(xì)胞增殖能力試驗(yàn)中,該組合對(duì)Con A 特異性誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞增殖具有良好的促進(jìn)作用。T 淋巴細(xì)胞的增多,還能協(xié)助參與體液免疫的B細(xì)胞分化成漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體和分泌相關(guān)細(xì)胞因子[16-17],乳清蛋白中的亮氨酸和精氨酸也直接參與免疫因子的合成,酵母β-葡聚糖協(xié)助調(diào)節(jié)細(xì)胞因子表達(dá)[5,10]。因此,動(dòng)物在給予該組合物30 d 后,可見介導(dǎo)體液免疫的抗體成分血清溶血素的抗體積數(shù)升高,側(cè)面反映了B細(xì)胞的增殖分化以及與補(bǔ)體結(jié)合后釋放抗體的能力有所上升[18]。
在非特異性免疫方面,單核巨噬細(xì)胞是非特異性免疫的重要執(zhí)行者,它有利于病原微生物的吞噬,自身衰老損傷細(xì)胞的清除,且有利于對(duì)抗原的攝取、加工、處理、提呈并激發(fā)免疫反應(yīng)[12,19-20]。酵母β-葡聚糖作為新資源食品,其獨(dú)特的三重超螺旋結(jié)構(gòu),最容易被人體吸收,它能促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂,增加單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞數(shù)量[21],也能與淋巴細(xì)胞表面受體結(jié)合,協(xié)助免疫細(xì)胞發(fā)揮作用,被多次報(bào)道具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬能力的功效,在增強(qiáng)非特異性免疫方面表現(xiàn)出色,當(dāng)配伍活性蛋白成分乳清蛋白和小麥蛋白后,其提高單核巨噬細(xì)胞吞噬能力的作用得到進(jìn)一步提高,實(shí)驗(yàn)中2 個(gè)劑量均具有提高單核巨噬細(xì)胞吞噬能力的作用,也是該組合發(fā)揮特異性免疫的主要作用層面[8-9,22]。在此以外,該組合還能提高NK 細(xì)胞活性。NK 細(xì)胞是天然防御的功能細(xì)胞,可對(duì)機(jī)體進(jìn)行免疫清除和免疫監(jiān)視,其殺傷范圍遠(yuǎn)大于T 細(xì)胞,在無致敏源刺激的情況下也能發(fā)揮免疫功能,殺傷多數(shù)受感染細(xì)胞,維護(hù)機(jī)體免受感染[17,23-24]。
通過以上的理論和實(shí)驗(yàn)證明,乳清蛋白和小麥蛋白可為免疫反應(yīng)提供物質(zhì)基礎(chǔ),酵母β-葡聚糖協(xié)助發(fā)揮推動(dòng)效應(yīng),三者結(jié)合可有效地提高機(jī)體的免疫效能。本次研究也為蛋白類成分及多糖類成分的組合應(yīng)用和開發(fā)提供了研究方向和基礎(chǔ)資料。