馬思怡 謝林惠 劉濤 李虹志 袁小紅

摘 要：文章建立高效液相色譜法（HPLC）測定藏紅花藥材中有效成分含量，并與伊朗進口的藏紅花中西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的含量進行對比。文章以九寨溝藏紅花為研究對象;采用反向色譜柱Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）檢測;流動相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;檢測波長：440nm;柱溫：40℃。藏紅花樣品總苷含量分別為18.1%、19.1%、20.7%，伊朗樣品藏紅花總苷含量為16.0%。九寨溝藏紅花質(zhì)量水平高于伊朗藏紅花有效成分含量，均滿足總苷含量>10%的規(guī)定。

關(guān)鍵詞：藏紅花;有效成分;九寨溝;含量測定;高效液相色譜

中圖分類號：R927.2 文獻標識碼：A 文章編號：1674-1064（2021）05-003-02

DOI：10.12310/j.issn.1674-1064.2021.05.002

藏紅花（Crocus sativus L.），又稱西紅花或番紅花，為鳶尾科番紅花屬植物，是一種名貴中藥，其具有活血化瘀、涼血解毒、清肝明目等效用[1]。藏紅花最早由希臘人種植，后來通過印度、尼泊爾等地區(qū)進口，再通過西藏銷往全國各地[2]。藏紅花通過球莖進行無性繁殖，以三根柱頭入藥，具有降血脂[3]、抗腫瘤[4-5]、免疫調(diào)節(jié)[6]、防止骨質(zhì)疏松[7]、抑制糖尿病[8]、抗氧化、抗炎[9-10]、保護視神經(jīng)與視網(wǎng)膜等作用[11]。近年來，藏紅花在上海、浙江、西藏等地均被引種栽培[12]，因土質(zhì)、氣候等差異，各地藏紅花質(zhì)量差異較大，本研究主要是對九寨溝的3個藏紅花樣品有效成分含量進行測定，并與伊朗藏紅花作比較，以考察九寨溝藏紅花藥材的質(zhì)量，可供有關(guān)研究參考。

1 儀器與材料

Agilent 1260高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）、G1315D DAD紫外可見檢測器、G1311C四元梯度混合泵、DT230柱溫箱;EclipseXDB-C18（4.6×250mm 5μm）色譜柱;SB25-12DNT超聲波清洗器（寧波新芝生物科技股份有限公司）;BSA223S電子天平（千分之一賽多利斯科學儀器有限公司）。

西紅花苷-Ⅰ對照品（批號MUST-19071510，質(zhì)量分數(shù)為99.07%）、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌罚ㄅ朚UST-19102910，質(zhì)量分數(shù)為98.28%）（成都曼思特生物科技有限公司）;乙腈為色譜純（賽默飛世爾科技有限公司）;超純水;供試樣品分別為伊朗藏紅花樣品、九寨溝藏紅花樣品。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Eclipse XDB-C18（4.6×250mm 5μm）;流動相：乙腈-水（25：75）;流速：1.0mL·min-1;檢測波長為：440nm;柱溫：40℃;進樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱定西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌愤m量，加稀乙醇（取乙醇529mL，加水至1 000mL）分別制成濃度為30μg/mL和12μg/mL的溶液即得。

2.2.2 供試品溶液的制備

干燥樣品，取適量于研缽中研細，過50目篩，精密稱取10mg樣品粉末于50mL棕色容量瓶中，加適量稀乙醇溶解，置冰浴中超聲處理20min，放至室溫，定容至刻度，搖勻，經(jīng)微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取西紅花苷-Ⅰ對照品溶液（200μg/mL）0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL，西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌啡芤海?00μg/mL）0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，置10mL量瓶中，加稀乙醇定容至刻度，搖勻，在“2.1”色譜條件下，進樣10μL，測定峰面積。以峰面積為縱坐標，對照品含量為橫坐標，繪制標準曲線。西紅花苷-Ⅰ和西紅花苷-Ⅱ的回歸方程分別為：Y=84.109x-128.410（r=0.9936，n=6），Y=42.221x+13.111（r=0.9971，n=6），結(jié)果表明西紅花苷-Ⅰ在0～50.00μg/mL，西紅花苷-Ⅱ在0～20.00μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 加樣回收率實驗

精密稱定已知含量的藏紅花樣品5份各10mg。分別精密加入西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ?qū)φ掌啡芤海?00μg/mL）4.5mL、2.2mL。依法測定，計算西紅花苷-Ⅰ平均回收率為100.16%，RSD為1.87%;西紅花苷-Ⅱ平均回收率為100.78%，RSD為1.95%，結(jié)果如表1所示。

2.5 精密度試驗

精密吸取九寨溝2020年1號供試品溶液10μL，參照“2.1”色譜條件連續(xù)進樣5次，測得西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積的RSD%（n=5）分別為1.70和0.73，表示儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取九寨溝2020年1號供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，分別在0、12、24、36、48h進樣，測其西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積，計算得西紅花苷-Ⅰ峰面積RSD%（n=5）=1.94、西紅花苷-Ⅱ峰面積RSD%（n=5）=1.64。結(jié)果表明供試品溶液在48h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重現(xiàn)性試驗

精密稱取6份2020年3號樣品各10mg，按“2.2.2”供試品溶液制備方法進行操作，精密吸取10μL注入高效液相色譜中進行測定，測其西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ峰面積，計算得西紅花苷-I峰面積RSD%（n=6）=1.98、西紅花苷-Ⅱ峰面積RSD%（n=6）=1.53，結(jié)果表明重現(xiàn)性良好。

2.8 樣品含量測定

表2 不同樣品藏紅花中西紅花苷含量比較

分別精密吸取伊朗、九寨溝藏紅花供試品溶液10μL，將其注入高效液相色譜儀進行含量測定。采用外標法對西紅花苷-Ⅰ、西紅花苷-Ⅱ及總苷含量進行計算。結(jié)果顯示，九寨溝藏紅花有效成分含量較高，三個樣品西紅花苷總含量分別為18.1%、19.1%、20.7%，且有效成分含量均高于伊朗進口藏紅花有效成分含量，結(jié)果如表2所示。

3 結(jié)語

研究結(jié)果表明，九寨溝藏紅花樣品均滿足總苷>10%的藥典規(guī)定，其中2020年3號樣品總苷含量最高，為20.7%;2020年1號樣品總苷含量最低，為18.1%。此外，九寨溝藏紅花有效成分含量均高于伊朗進口藏紅花。九寨溝藏紅花具有較好的質(zhì)量品質(zhì)，表明九寨溝培育基地已經(jīng)具備了較好的藏紅花種植技術(shù)手段，這對于國內(nèi)藏紅花引種具有借鑒意義，且為藥用領(lǐng)域提供了優(yōu)質(zhì)資源。

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