郭楠楠，張芳

鄭州科技學(xué)院，鄭州市食品安全快速檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室（鄭州 450064）

我國(guó)每年生產(chǎn)大量的糧谷類(lèi)加工食品，其中有部分因?yàn)榕R過(guò)期而不能食用，造成巨大的資源浪費(fèi)。對(duì)這些臨過(guò)期食品的再利用就很有研究的價(jià)值，但是這些過(guò)期食品中經(jīng)常含有一些食品添加劑，容易對(duì)產(chǎn)品造成質(zhì)量安全問(wèn)題。因此，對(duì)食品添加劑的含量檢測(cè)尤為重要[1]。目前常用的檢測(cè)方法有氣相色譜法、液相色譜法、離子色譜法、分光光度法等[2-5]。高效液相色譜法具有分析檢測(cè)速度快、檢測(cè)靈敏度高、分離效能高、色譜柱可以反復(fù)使用、易回收、樣品不易破壞和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)[6]。因此，試驗(yàn)擬采用高效液相色譜法同時(shí)快速測(cè)定食品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的含量變化，為研究臨過(guò)期食品的再利用提供數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 主要材料與試劑

在鄭州市高新區(qū)范圍內(nèi)中小型超市和商店里購(gòu)買(mǎi)共三大類(lèi)11小類(lèi)臨過(guò)期食品。分別為方便食品：1-1品牌A清涼片、1-2品牌B宮爆面；膨化食品：2-1品牌C脆面、2-2品牌D米餅、2-3品牌E香饃；糕點(diǎn)食品：3-1品牌F小蛋糕、3-2品牌G華夫餅、3-3品牌H綠豆糕、3-4品牌J軟香酥、3-5品牌K提拉米蘇蛋糕、3-6品牌L板栗餅。每種樣品總質(zhì)量大于100 g。亞鐵氰化鉀、乙酸鋅均為分析純，甲醇、乙酸銨均為色譜純，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜，德國(guó)Dr。

1.2 主要儀器與設(shè)備

電子天平，UW220H 2015LH037（精確到0.001 g）；25 mL容量瓶；50 mL離心管；1 mL進(jìn)樣瓶；移液槍?zhuān)?.5～5 mL量程；槍頭，1 mL；無(wú)菌注射器帶針頭；有機(jī)系濾膜，0.22 μm（德國(guó)MEMBRANA進(jìn)口濾膜）；食品粉碎機(jī)；高頻數(shù)控超聲波清洗器，KQ-5000TDE型（昆山市超聲儀器有限公司）；德國(guó)Sigma 3k150高速冷凍離心機(jī)；高效液相色譜儀，Ultimate 3000（2016LH079），配有紫外檢測(cè)器。

1.3 試驗(yàn)條件

高效液相色譜儀器參數(shù)設(shè)置：色譜柱Accucore C18（1.5 μm×2.1 mm×150 mm）；柱溫30 ℃；流速0.2 mL/min；進(jìn)樣量2 μL；檢測(cè)器，二極管陣列檢測(cè)；波長(zhǎng)230 nm；流動(dòng)相，甲醇-0.02 mol/L乙酸銨（5∶95，V/V）；時(shí)間6 min。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 樣品的前處理

將采集回來(lái)的樣品進(jìn)行分類(lèi)編號(hào)后用錘子把整塊樣品打碎，除去包裝袋，放入食品粉碎機(jī)將其完全粉碎，最后儲(chǔ)存于樣品袋中，保存?zhèn)溆?。稱(chēng)取2 g（準(zhǔn)確至0.001 g）試樣于50 mL具塞離心管中，加約36 mL水，渦旋混勻，于15～25 ℃水浴中超聲10 min，冷卻至室溫后用移液槍加2 mL亞鐵氰化鉀和2 mL乙酸鋅溶液，混勻，把離心管加蓋擰緊放入多管漩渦混合儀中漩渦振蕩3 min，后放入高速冷凍離心機(jī)中，以9000 r/min離心3 min，最后使用無(wú)菌注射器取適量上清液過(guò)0.22 μm濾膜至進(jìn)樣瓶中，待液相色譜儀上機(jī)測(cè)定。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制

配制不同濃度的苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液系列，以甲醇+乙酸銨溶液（5∶95，V/V）為流動(dòng)相，進(jìn)樣2 μL，用移液槍吸取2.66 mL苯甲酸儲(chǔ)備液、2.49 mL山梨酸儲(chǔ)備液、2.09 mL糖精鈉儲(chǔ)備液、2.52 mL安賽蜜儲(chǔ)備液于25 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到4種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，質(zhì)量濃度為100 mg/L。吸取含有4種添加劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 μL+900 μL水，200 μL+800 μL水和500 μL+500 μL水，得到10，20和50 mg/L的濃度點(diǎn)，再?gòu)?0 mg/L和50 mg/L的濃度點(diǎn)中吸取100 μL+900 μL水，得到1 mg/L和5 mg/L的濃度點(diǎn)，再?gòu)? mg/L的濃度點(diǎn)中吸取100 μL+900 μL水，得到0.5 mg/L的濃度點(diǎn)。測(cè)得各個(gè)點(diǎn)的檢測(cè)值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。

1.4.3 結(jié)果計(jì)算

采用外標(biāo)法定量（適用于測(cè)定樣品中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉和安賽蜜的含量），計(jì)算公式：。式中：X為試樣中待測(cè)組分含量，g/kg；C為由標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)得出的樣液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度，mg/L；V為樣品定容體積，mL；m為樣品質(zhì)量，g；1000為由mg/kg轉(zhuǎn)換為g/kg的換算因子。結(jié)果保留3位有效數(shù)字。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

按1.4.2小節(jié)所做的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如表1所示。4種食品添加劑的R2均在0.9998以上，試驗(yàn)表明標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)有較好的線(xiàn)性關(guān)系，符合相關(guān)規(guī)定。

表1 各添加劑的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程及R2

2.2 三大類(lèi)加工食品中四種添加劑的含量變化趨勢(shì)

2.2.1 不同方便食品中添加劑的含量變化

在方便食品品牌A清涼片、品牌B宮爆面中僅檢測(cè)出有山梨酸，其他安賽蜜、苯甲酸及糖精鈉則均未檢出，品牌A清涼片及品牌B宮爆面中山梨酸的含量變化如表2及圖1所示。在方便食品樣品品牌A清涼片1-1、品牌B宮爆面1-2中僅檢測(cè)出山梨酸的含量，其中品牌A清涼片中山梨酸的含量在0.0650～0.109 g/kg之間，其含量在0.08 g/kg上下波動(dòng)。品牌B宮爆面中山梨酸的含量在0.183～0.299 g/kg之間，其中大部分含量在0.2 g/kg上下波動(dòng)。所測(cè)的樣品山梨酸含量的最大值為0.990 g/kg，小于GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的最大使用量1.0 g/kg。品牌A清涼片超過(guò)保質(zhì)期后其中添加的防腐劑山梨酸的含量變化在第9天測(cè)定值最大，品牌B宮爆面超過(guò)保質(zhì)期后其中添加的防腐劑山梨酸的含量變化在第1天測(cè)定值最大，其后檢測(cè)結(jié)果變化幅度較小，無(wú)明顯變化。

表2 方便食品中山梨酸的含量變化

圖1 方便食品中山梨酸的含量變化

2.2.2 不同膨化食品中添加劑的含量變化

在3種膨化食品的檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，2-1品牌C脆面、2-2品牌D米餅中4種添加劑均未檢出，2-3品牌E香饃中僅檢測(cè)出有安賽蜜，其含量變化如表3及圖2所示。在膨化類(lèi)食品樣品2-3香饃中僅檢測(cè)出安賽蜜的含量，安賽蜜的含量在0.112～0.148 g/kg之間，其中大部分含量在0.12 g/kg上下波動(dòng)。所測(cè)的樣品山梨酸含量的最大值為0.148 g/kg，小于GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的最大使用量0.3 g/kg。在膨化類(lèi)食品樣品2-3品牌E香饃超過(guò)保質(zhì)期后其中添加的安賽蜜的含量在第15天測(cè)定最大，其后檢測(cè)含量基本沒(méi)有明顯變化趨勢(shì)。

圖2 膨化食品香饃中山梨酸的含量變化

表3 品牌E香饃中安賽蜜的含量變化

2.2.3 不同糕點(diǎn)食品中添加劑的含量變化

在6種糕點(diǎn)類(lèi)食品的檢測(cè)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，3-3品牌H綠豆糕中未檢出這4種添加劑，其他幾種糕點(diǎn)中僅檢測(cè)出有山梨酸鉀，其含量變化如表4及圖3所示。在這幾種糕點(diǎn)類(lèi)食品中山梨酸的含量變化趨勢(shì)有所不同，品牌F小蛋糕中山梨酸的含量在0.167～0.260 g/kg之間，其中大部分含量在0.2 g/kg上下波動(dòng)。所測(cè)的樣品山梨酸含量的最大值為0.260 g/kg，整體呈現(xiàn)先增后降再增的趨勢(shì)，在第22天時(shí)含量最高；品牌G華夫餅中山梨酸的含量在0.106～0.124 g/kg之間，其中大部分含量在0.12 g/kg上下波動(dòng)，整體來(lái)說(shuō)變化趨勢(shì)不大，幾次測(cè)定的結(jié)果相差不太大；品牌J軟香酥中山梨酸的含量在0.136～0.168 g/kg之間，其中大部分含量在0.15 g/kg上下波動(dòng)，整體來(lái)看隨時(shí)間延長(zhǎng)，其有逐漸增加的趨勢(shì)；品牌K提拉米蘇蛋糕中山梨酸的含量在0.157～0.301 g/kg之間，隨時(shí)間延長(zhǎng)，山梨酸含量呈現(xiàn)出逐漸降低的趨勢(shì)；品牌L板栗餅中山梨酸的含量在0.112～0.148 g/kg之間，隨時(shí)間延長(zhǎng)，山梨酸含量呈現(xiàn)出先增后降的趨勢(shì)，但整體變化不是很明顯。從不同糕點(diǎn)類(lèi)食品中山梨酸的測(cè)定結(jié)果看，均小于GB 2760—2014《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的最大使用量1.0 g/kg，即使超過(guò)保質(zhì)期之后，山梨酸的含量依然未超過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

圖3 不同糕點(diǎn)食品中山梨酸的含量變化

表4 不同糕點(diǎn)食品中山梨酸鉀的含量變化

3 質(zhì)量控制

取一份2.01 g陰性基質(zhì)樣品，添加500 μL 100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)中間液，對(duì)應(yīng)添加濃度為20 mg/kg，樣品按前處理方法制得?；厥章?檢測(cè)值/添加值×100%。對(duì)每種添加劑進(jìn)行5次回收率試驗(yàn)，具體結(jié)果見(jiàn)表5。5次回收率試驗(yàn)中安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的平均加標(biāo)回收率為92.7%～100.9%，符合相關(guān)規(guī)定。

表5 不同添加劑的回收率試驗(yàn)結(jié)果 單位：%

4 結(jié)論

試驗(yàn)以臨過(guò)期糧谷類(lèi)加工食品為研究對(duì)象，通過(guò)高效液相色譜法同時(shí)檢測(cè)樣品中4種添加劑的含量變化，結(jié)果表明：檢測(cè)中，幾種不同的糧谷類(lèi)加工食品中均未檢測(cè)出苯甲酸和糖精鈉；方便食品中僅檢測(cè)到山梨酸，其中品牌A清涼片中山梨酸的具體含量在0.0650～0.109 g/kg之間，品牌B宮爆面中山梨酸的具體含量在0.183～0.299 g/kg之間。膨化食品中僅小香饃中檢測(cè)到有安塞蜜，具體含量在0.112～0.148 g/kg之間。糕點(diǎn)類(lèi)食品中僅檢測(cè)到的山梨酸，其中品牌F小蛋糕中山梨酸的含量在0.167～0.260 g/kg之間，品牌G華夫餅中山梨酸的含量在0.106～0.124 g/kg之間，品牌J軟香酥中山梨酸的含量在0.136～0.168 g/kg之間，品牌K提拉米蘇蛋糕中山梨酸的含量在0.157～0.301 g/kg之間，品牌L板栗餅中山梨酸的含量在0.112～0.148 g/kg之間；從檢測(cè)結(jié)果中可以看出，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，各類(lèi)添加劑在不同臨過(guò)期糧谷類(lèi)食品中的變化趨勢(shì)不同，但經(jīng)過(guò)30 d的監(jiān)測(cè)觀察，即使是超過(guò)保質(zhì)期，各類(lèi)食品中添加劑的含量均未超過(guò)國(guó)標(biāo)規(guī)定。