王猛，朱秋蓉，李升星，石卓功

(1.西南林業(yè)大學(xué) 林學(xué)院，云南 昆明 650224；2.江西省林業(yè)科學(xué)院，國(guó)家林業(yè)局樟樹(shù)工程技術(shù)研究中心，江西 南昌 330032)

板栗(CastaneamollissimaBL.)是殼斗科(Fagaceae)栗屬(Castanea)植物，果實(shí)富含碳水化合物、多酚、維生素、鐵、膳食纖維等。板栗從海拔50～2 800 m均有種植，在我國(guó)栽培面積很廣，多數(shù)地區(qū)采用實(shí)生繁殖，也篩選出許多高產(chǎn)的新品種。板栗花期為5—6月，果熟期為9—10月。板栗的雌雄花比例失調(diào)，雄花數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于雌花的數(shù)量，雄花序先于雌花形成。據(jù)研究在結(jié)果枝上平均1個(gè)雌花擁有4.27～8.62條雄花序，每1結(jié)果母枝僅有2.44朵雌花[1]。

很多果樹(shù)存在直感現(xiàn)象，即雜交種子的胚乳在外在和內(nèi)在性狀上會(huì)表現(xiàn)出父本的遺傳性狀。直感現(xiàn)象對(duì)果實(shí)或者種子的外在品質(zhì)，內(nèi)在品質(zhì)及其他性狀均有影響。據(jù)研究，不同品種的果樹(shù)在授粉后，花粉能直接影響其受精形成的種子或果實(shí)發(fā)生變異[2]。板栗存在直感現(xiàn)象，在接受不同品種的花粉進(jìn)行授粉后，所形成的種子或者果實(shí)會(huì)發(fā)生變異。在花粉直感對(duì)果實(shí)外在品質(zhì)影響的研究中，沙海峰等[3]在對(duì)京白梨(Pyrusussuriensis‘Jingbaili’)的研究發(fā)現(xiàn)花粉直感對(duì)果實(shí)重量有顯著影響；李保國(guó)等[4]在富士蘋(píng)果(Maluspumila)研究中得出花粉直感對(duì)果實(shí)著色會(huì)有影響。在對(duì)果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)的研究中，陳慶紅等[5]在金魁獼猴桃(Actinidiachinensisvar.deliciosa‘Jinkui’)果實(shí)品質(zhì)受到花粉直感現(xiàn)象影響中發(fā)現(xiàn)，不同獼猴桃品種授粉后果實(shí)中可溶性固形物、VC含量均出現(xiàn)明顯的差異;邱燕萍等[6]發(fā)現(xiàn)不同授粉品種的桂味荔枝(Litchichinensis‘Guiwei’)在總糖、總酸、葉綠素等含量表現(xiàn)出明顯差異。在其他性狀方面，有研究表明花粉直感效應(yīng)對(duì)櫻桃(Cerasuspseudocerasus)、火龍果(Hylocereusundatus)、藍(lán)莓(Sementrigonellae)、扁桃(Amygdaluscommunis)等植物果實(shí)的成熟期具有明顯的影響[7-12]。

目前關(guān)于花粉直感機(jī)理的研究主要有兩個(gè)假設(shè)，第一個(gè)假設(shè)認(rèn)為內(nèi)源激素合成與花粉直感現(xiàn)象關(guān)系密切，種子產(chǎn)生的激素(主要是植物生長(zhǎng)素)將負(fù)責(zé)果實(shí)的生長(zhǎng)，種子的數(shù)量(可能是其質(zhì)量)與果實(shí)大小成正相關(guān)[13]；第二個(gè)假設(shè)主要指出觸發(fā)直感效應(yīng)的信號(hào)可能是mRNA[14]。而且，植物內(nèi)源激素在植物的生長(zhǎng)發(fā)育中起到重要的作用，在果實(shí)性狀中，可以使細(xì)胞分裂和增大，在果實(shí)中出現(xiàn)明顯果實(shí)直感，如成熟度、果實(shí)的大小和質(zhì)量等[15-16]。

板栗的直感現(xiàn)象也非常明顯，實(shí)生后代變異類(lèi)型較多，性狀遺傳有嚴(yán)重的分離現(xiàn)象，在一定程度上影響了子代板栗堅(jiān)果的品質(zhì)。因此，本研究通過(guò)轉(zhuǎn)錄組測(cè)序后，對(duì)數(shù)據(jù)分析，研究植物激素信號(hào)代謝在板栗花粉直感中的作用，為將來(lái)通過(guò)人工栽培技術(shù)，有目的的改善果實(shí)品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

樣品采集地位于云南省楚雄州永仁縣，嫁接繁殖的9 a生左右的板栗樹(shù)品種為永豐1號(hào)、永仁早和易門(mén)1號(hào)。供試材料為板栗不同成熟階段種仁，在成熟前約20 d，每隔11 d采樣一次，采樣的3個(gè)時(shí)間為：2018/07/26(70 DAP)、2018/08/07(82 DAP)及2018/08/19(94 DAP)，最后1次采樣為球苞開(kāi)裂的成熟果，共3個(gè)時(shí)期。

所采板栗種仁當(dāng)即處理后用液氮速凍后干冰保存送樣進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，轉(zhuǎn)錄組測(cè)序委托北京諾禾致源科技股份有限公司基于Illumina測(cè)序平臺(tái)，利用雙末端測(cè)序(Paired-End)的方法進(jìn)行測(cè)序，測(cè)3個(gè)授粉組合同一時(shí)期的3組樣品，每個(gè)樣品3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，共9組轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。

1.1 基因差異表達(dá)分析

因轉(zhuǎn)錄與翻譯表達(dá)具有時(shí)間和空間特異性，在不同組織或生長(zhǎng)發(fā)育條件下表達(dá)水平存在顯著差異的基因，定義為差異表達(dá)基因(differential expression gene，DEGs)。使用DESeq2軟件對(duì)3個(gè)時(shí)期不同授粉組合種仁進(jìn)行分析，篩選閾值為padj<0.05且|log2FoldChange|>1，劃分上調(diào)DEG和下調(diào)DEG[17]。通過(guò)R語(yǔ)言和Origin 8.5繪圖。

1.2 差異基因GO富集分析

GO功能顯著性富集分析給出與基因組背景相比，在差異表達(dá)基因中顯著富集的GO功能條目，從而給出差異表達(dá)基因與哪些生物學(xué)功能顯著相關(guān)。該分析首先把所有差異表達(dá)基因向Gene Ontology數(shù)據(jù)庫(kù)(http://www.geneontology.org/)的各個(gè)term映射，計(jì)算每個(gè)term的基因數(shù)目，然后找出與整個(gè)基因組背景相比，在差異表達(dá)基因中顯著富集。GO富集分析方法為GOseq[17]，此方法基于Wallenius non-central hyper-geometric distribution。相對(duì)于普通的Hyper-geometric distribution，此分布的特點(diǎn)是從某個(gè)類(lèi)別中抽取個(gè)體的概率與從某個(gè)類(lèi)別之外抽取一個(gè)個(gè)體的概率是不同的，這種概率的不同是通過(guò)對(duì)基因長(zhǎng)度的偏好性進(jìn)行估計(jì)得到的，從而能更為準(zhǔn)確地計(jì)算出GOterm被差異基因富集的概率。

1.3 差異基因KEGG pathway通路分析

在生物體內(nèi)，不同基因相互協(xié)調(diào)行使其生物學(xué)功能，通過(guò)Pathway顯著性富集能確定差異表達(dá)基因參與的最主要生化代謝途徑和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)是有關(guān)Pathway的主要公共數(shù)據(jù)庫(kù)[19]。Pathway顯著性富集分析以KEGG pathway為單位，應(yīng)用超幾何檢驗(yàn)，找出差異基因相對(duì)于所有有注釋的基因顯著富集的pathway。

1.4 qPCR驗(yàn)證

采用qPCR技術(shù)研究板栗種子發(fā)育過(guò)程中SSS和SS的8個(gè)unigenes的表達(dá)規(guī)律。采用高通量建庫(kù)后剩余的RNA樣本，采用天根反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA第一條鏈。以18sRNA為內(nèi)參基因，采用EvaGreen染料對(duì)篩選出14個(gè)淀粉和蔗糖代謝通路中的DEGs進(jìn)行qPCR驗(yàn)證分析，qPCR引物采用Primer Premier 5進(jìn)行設(shè)計(jì)(表1)，于成都丹鳳科技有限公司進(jìn)行合成。qPCR條件采用2步法進(jìn)行：95 °C 酶激活3 min；95 °C變性10 s，58 °C退火和延伸30 s，共40個(gè)循環(huán)，每次延伸后收集熒光信號(hào)；反應(yīng)結(jié)束后于60 °C 逐漸上升至 95 °C的條件下進(jìn)行溶解曲線分析。試驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，熒光定量Ct值于EXCEL 2010中進(jìn)行整理，樣品的均一化表達(dá)量為2-△Ct(樣品△Ct=樣品Ct值-內(nèi)參Ct值)，以第I時(shí)期自交授粉組合的平均表達(dá)量為對(duì)照，其表達(dá)量定義為1個(gè)單位，計(jì)算不同授粉組合相對(duì)表達(dá)量ratio，其計(jì)算公式為2-△△Ct(△△Ct = 處理組△Ct - 對(duì)照組△Ct)[20]。采用SPSS 21對(duì)每個(gè)對(duì)比組合進(jìn)行單因素方差分析并標(biāo)出顯著性，使用Origin 8.5軟件繪制基因表達(dá)模式的柱狀示意圖。8個(gè)unigenes的名稱(chēng)和引物序列如表1所示。

表1 用于qPCR分析的14對(duì)unigenes引物Tab.1 Unigenes and sequence of 14 primer pairs for qPCR analysis

2 結(jié)果與分析

2.1 測(cè)序數(shù)據(jù)

轉(zhuǎn)錄組測(cè)序每個(gè)樣品至少產(chǎn)生41 212 858 b raw reads，經(jīng)過(guò)測(cè)序質(zhì)量控制，每個(gè)樣品至少得到40 019 732 b Clean reads，總共9個(gè)測(cè)序樣品。各樣品Reads與參考序列比對(duì)率最低為59.55%，各樣品Q(chēng)30堿基百分比均不小于91.1%，每個(gè)樣品的GC含量都在44.18%以上(表2)。原始數(shù)據(jù)已上傳至NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)，SRA登入號(hào)為：PRJNA540079。

表2 測(cè)序數(shù)據(jù)及組裝結(jié)果統(tǒng)計(jì)Tab.2 Transcriptome sequencing and assembly results

2.2 差異表達(dá)分析

對(duì)板栗種仁成熟時(shí)各授粉組合對(duì)比差異基因進(jìn)行統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，同處于種仁成熟第3時(shí)期的授粉組合2和授粉組合1之間差異基因數(shù)量最少，差異基因總數(shù)為2 192個(gè)，其中上調(diào)差異基因數(shù)為1 125個(gè)，下調(diào)差異基因數(shù)位1 067個(gè)；而分別與授粉組合3對(duì)比時(shí)差異基因數(shù)量較多，其中授粉組合3與授粉組合2的差異基因量最多為7 251個(gè)，上調(diào)差異基因數(shù)位3 732個(gè)，下調(diào)差異基因數(shù)位3 519個(gè)；授粉組合3與授粉組合1的差異基因數(shù)量為6 497個(gè)，上調(diào)差異基因數(shù)位3 438個(gè)，下調(diào)差異基因數(shù)位3 059個(gè)(圖1)。綜合得知，在同一時(shí)期各授粉組合間差異基因數(shù)量差異明顯。

圖1 同一時(shí)期各組合對(duì)比差異基因Fig.1 Comparison of different genes among different combinations in the same period

2.3 板栗種仁同一成熟期不同組合間差異表達(dá)基因的GO注釋

對(duì)比組合的GO-term，見(jiàn)圖2，在板栗種仁成熟的第3個(gè)時(shí)期，分子功能(Molecular_function)中的GO-term條目較多，生物進(jìn)程(Biological process)中的 GO-term條目較少。而且從圖中可以看出生物進(jìn)程中主要富集的GO條目為protein phosphorylation(蛋白質(zhì)磷酸化)，oxidation-reduction process(氧化還原過(guò)程)、plant-type cell wall organization(植物型細(xì)胞壁組織)、plant-type cell wall organization or biogenesis(植物型細(xì)胞壁組織或生物發(fā)生)、single-organism metabolic process(單生物代謝過(guò)程)、cell recognition(細(xì)胞識(shí)別)、pollination(授粉)、pollen-pistil interaction(花粉雌蕊相互作用)、recognition of pollen(花粉識(shí)別)、response to auxin(生長(zhǎng)素的響應(yīng))；在分子功能(Molecular_function)中主要富集條目是tetrapyrrole binding(四吡咯結(jié)合)、structural constituent of cell wall(細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分)、kinase activity(激酶活性)、phosphotransferase activity(磷酸轉(zhuǎn)移酶活性)、protein kinase activity(蛋白激酶活性)、oxidoreductase activity(氧化還原酶活性)、ADP binding(腺苷磷酸結(jié)合)、nutrient reservoir activity(養(yǎng)分庫(kù)活動(dòng))、heme binding(血紅素結(jié)合)、phosphorylase activity(磷酸化酶活性)、glycogen phosphorylase activity(糖原磷酸化酶活性)、iron ion binding(鐵離子結(jié)合)。

此外，由圖2可知，在板栗成熟的第3個(gè)時(shí)期，組合2vs組合1和組合3vs組合2，共有的通路為：plant-type cell wall organization(植物型細(xì)胞壁組織)、plant-type cell wall organization or biogenesis(植物型細(xì)胞壁組織或生物發(fā)生)、tetrapyrrole binding(四吡咯結(jié)合)、structural constituent of cell wall(細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分)。組合3vs組合1和組合3vs組合2，共有的通路為nutrient reservoir activity(養(yǎng)分庫(kù)活動(dòng))、heme binding(血紅素結(jié)合)。

圖2 第3時(shí)期各授粉組合的GO富集條目Fig.2 Go enriched items of different pollination combinations in the third period

2.4 板栗種仁同一成熟期不同授粉組合間差異基因KEGG pathway通路富集分析

對(duì)授粉組合1、授粉組合2和授粉組合3在3個(gè)時(shí)期的富集在前15的KEGG通路(圖3)進(jìn)行對(duì)比，3個(gè)組合共同富集的通路有Protein processing in endoplasmic reticulum(內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工)、Plant-pathogen interaction(植物病原體相互作用)、Starch and sucrose metabolism(淀粉和蔗糖代謝)、Phenylpropanoid biosynthesis(苯丙烷生物合成)、Cysteine and methionine metabolism(半胱氨酸和蛋氨酸的代謝)、Glycolysis / Gluconeogenesis(糖酵解/糖異生)、Plant hormone signal transduction(植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo))、Ribosome(核糖體)、Photosynthesis(光合作用)。

圖3 各授粉組合的KEGG富集通路Fig.3 KEGG enrichment pathway in different pollination combinations

由此可知，不同授粉組合的在同一階段，種仁代謝通路有差異，其中共同富集的通路有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、淀粉和蔗糖代謝、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，這表明這些代謝在板栗種仁發(fā)育成熟過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用。

2.5 花粉直感植物激素代謝通路分析

植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)代謝通路中(圖4)，于同一時(shí)期中的各處理組合中皆有差異基因，表明各授粉組合在植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中存在明顯的花粉直感效應(yīng)。

圖4 植物激素信號(hào)傳導(dǎo)(map 04075)Fig.4 Plant hormones signal transduction(map 04075)

在板栗種仁成熟時(shí)期，從板栗種仁轉(zhuǎn)錄組中鑒定出49個(gè)植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)unigenes，編碼22個(gè)蛋白家族(表3)。

編碼基因家族中生長(zhǎng)素反應(yīng)蛋白、生長(zhǎng)素反應(yīng)因子、發(fā)病相關(guān)蛋白1、蛋白磷酸酶2C、生長(zhǎng)素反應(yīng)性GH3基因家族、兩組分響應(yīng)調(diào)節(jié)器ARR-A系列 、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶、F-box蛋白GID2、生長(zhǎng)素流入載體(AUX1 LAX系列)、調(diào)節(jié)蛋白NPR1的unigenes最多，分別從轉(zhuǎn)錄組中鑒定出8個(gè)、6個(gè)、5個(gè)、5個(gè)、3個(gè)、2個(gè)、2個(gè)、2個(gè)、2個(gè)、2個(gè)。在2vs1對(duì)比組合中，生長(zhǎng)素反應(yīng)性GH3基因家族DEGs呈上調(diào)趨勢(shì)；在3vs1對(duì)比組合中，生長(zhǎng)素反應(yīng)蛋白IAA DEGs均為下調(diào)；而在3vs1對(duì)比組合與3vs2對(duì)比組合中均呈下調(diào)表達(dá)；在3vs1對(duì)比組合和3vs2對(duì)比組合中，發(fā)病相關(guān)蛋白1DEGs均下調(diào)；在3vs1對(duì)比組合和3vs2對(duì)比組合中，兩組分響應(yīng)調(diào)節(jié)器ARR-A系列DEGs均呈上調(diào)趨勢(shì)；在3vs1對(duì)比組合和3vs2對(duì)比組合中，生長(zhǎng)素反應(yīng)因子DEGs均下調(diào)；在2vs1對(duì)比組合和3vs1對(duì)比組合中，蛋白磷酸酶2CDEGs 均上調(diào)表達(dá)；在3vs1對(duì)比組合和3v21對(duì)比組合中，生長(zhǎng)素流入載體(AUX1 LAX系列)DEGs均呈下調(diào)趨勢(shì)；在3vs1對(duì)比組合和3v21對(duì)比組合中，F(xiàn)-box蛋白GID2DEGs均呈下調(diào)表達(dá)；此外，絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶DEGs在這2個(gè)對(duì)比組合中呈上調(diào)趨勢(shì)，調(diào)節(jié)蛋白NPR1DEGs均為下調(diào)表達(dá)。

綜合得出，在板栗種仁花粉直感發(fā)育過(guò)程中，影響植物激素代謝的關(guān)鍵酶存在于以下蛋白家族中：生長(zhǎng)素反應(yīng)蛋白、生長(zhǎng)素反應(yīng)性GH3基因家族、發(fā)病相關(guān)蛋白1、兩組分響應(yīng)調(diào)節(jié)器ARR-A系列 、生長(zhǎng)素反應(yīng)因子、蛋白磷酸酶2C、、生長(zhǎng)素流入載體(AUX1 LAX系列)、F-box蛋白GID2、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶[EC:2.7.11.1]、調(diào)節(jié)蛋白NPR1。

表3 在成熟時(shí)期參與了植物激素的代謝途徑所有對(duì)比組合的DEGsTab.3 The DEGs of all comparative combinations involved in the metabolic pathways of plant hormones in mature stage

2.6 熒光定量PCR鑒定

為了驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)的可靠性，根據(jù)unigenes序列設(shè)計(jì)引物，利用qPCR對(duì)淀粉和蔗糖代謝通路中5個(gè)上調(diào)基因和3個(gè)下調(diào)基因的表達(dá)譜進(jìn)行了評(píng)價(jià)。這8個(gè)DEGs的表達(dá)模式與轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)一致，表明轉(zhuǎn)錄組分析具有較高的重復(fù)性和可靠性(圖5)。

圖5 不同授粉組合淀粉和蔗糖合成酶基因相對(duì)表達(dá)量Fig.5 Relative expression levels of starch and sucrose genes in different pollination combinations

3 討論與結(jié)論

板栗種仁在成熟期第3階段的授粉組合，差異基因表達(dá)數(shù)量差異顯著。在對(duì)差異表達(dá)基因的GO分析中，分子功能(Molecular_function)中的GO-term條目較多，生物進(jìn)程(Biological process)中的 GO-term條目較少。在授粉組合中，組合2 vs組合1和組合3 vs組合2，共有的通路為：plant-type cell wall organization(植物型細(xì)胞壁組織)、plant-type cell wall organization or biogenesis(植物型細(xì)胞壁組織或生物發(fā)生)、tetrapyrrole binding(四吡咯結(jié)合)、structural constituent of cell wall(細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)成分)。組合3vs組合1和組合3vs組合2，共有的通路為nutrient reservoir activity(養(yǎng)分庫(kù)活動(dòng))、heme binding(血紅素結(jié)合)。

在各授粉組合中，共同富集的代謝通路有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白質(zhì)加工、淀粉和蔗糖代謝、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等，表明這些代謝在板栗種仁發(fā)育成熟過(guò)程中起著非常關(guān)鍵的作用。

板栗種仁轉(zhuǎn)錄組中鑒定出49個(gè)植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)unigenes，在板栗種仁花粉直感發(fā)育過(guò)程中，影響植物激素代謝的關(guān)鍵酶存在于以下蛋白家族中：生長(zhǎng)素反應(yīng)蛋白、生長(zhǎng)素反應(yīng)性GH3基因家族、發(fā)病相關(guān)蛋白1、兩組分響應(yīng)調(diào)節(jié)器ARR-A系列 、生長(zhǎng)素反應(yīng)因子、蛋白磷酸酶2C、、生長(zhǎng)素流入載體(AUX1 LAX系列)、F-box蛋白GID2、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶[EC:2.7.11.1]、調(diào)節(jié)蛋白NPR1。

板栗的花粉直感效應(yīng)對(duì)糖和淀粉具有重要影響[21]。本研究以含糖量高的品種作為授粉樹(shù)，所授粉后的果實(shí)中的糖含量也相對(duì)較高，以早熟品種授粉結(jié)出的果實(shí)也早實(shí)。表明不同品種的板栗受到不同的花粉直感效應(yīng)的影響。板栗堅(jiān)果在發(fā)育過(guò)程中表現(xiàn)出明顯的花粉直感效應(yīng)。本次研究的KEGG pathway發(fā)現(xiàn)參與蔗糖和淀粉代謝的酶主要有關(guān)鍵酶：UDP-葡萄糖-1-磷酸酯尿甙基轉(zhuǎn)移酶、α-1,4-葡聚糖分支酶、淀粉合成酶、蔗糖合成酶和ADP-葡萄糖焦磷酸化酶，這些酶基因?qū)Π謇醴N仁的淀粉合成代謝起調(diào)控作用。這與前人研究關(guān)于板栗、玉米(Zeamays)、土豆(Solanumtuberosum)、水稻(Oryzasativa)中淀粉合成相關(guān)酶報(bào)道相一致[22-25]。

在板栗種仁成熟的3個(gè)階段，在I-VS-II時(shí)期，DEGs主要集中在細(xì)胞壁相關(guān)的注釋上；I-VS-III時(shí)期，DEGs主要集中在各種離子運(yùn)輸上；II-VS-III時(shí)期只有注釋plant-type cell wall與其他時(shí)期對(duì)比不同，可以推測(cè)在淀粉積累時(shí)期，這部分基因可能起主導(dǎo)作用。GO注釋和KEGG途徑分析表明，栗子仁成熟期間存在各種代謝關(guān)系。在板栗種仁中有差異的主要代謝通路從真核生物的核糖體生物發(fā)生和RNA聚合酶逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)閮?nèi)吞作用和剪接體這2條代謝通路。除淀粉和蔗糖代謝外，研究中所有比較結(jié)果均顯著豐富了RNA轉(zhuǎn)運(yùn)、RNA降解、嘧啶代謝、嘌呤代謝、植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、植物病原體相互作用和甘油磷脂代謝等生物學(xué)功能。

綜合得出,不同授粉組合在不同發(fā)育時(shí)期種仁中淀粉和糖含量在淀粉和蔗糖合成酶、淀粉和蔗糖合成酶基因調(diào)控下存在明顯的花粉直感效應(yīng)。在生產(chǎn)上配置好授粉樹(shù)，對(duì)栗樹(shù)早期高產(chǎn)、提高栗樹(shù)品質(zhì)具有指導(dǎo)意義。