帥 旭 何躍東

1.四川大學(xué)華西婦產(chǎn)兒童醫(yī)院(成都，610041)；2.四川省成都市第五人民醫(yī)院

宮頸癌是婦科常見惡性腫瘤，發(fā)病出現(xiàn)低齡化受到廣泛關(guān)注[1]。宮頸病變的產(chǎn)生是一個持續(xù)且漫長的過程，研究發(fā)現(xiàn)增殖細(xì)胞核抗原(Ki67)、P53等增殖基因、抑癌基因在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中占據(jù)重要地位，對宮頸癌診療及預(yù)后均有作用[2]。蛋白激酶D1(PKD1)為近年來新發(fā)現(xiàn)的腫瘤調(diào)控因子，在多種惡性腫瘤細(xì)胞中均能高表達(dá)，在細(xì)胞黏附、遷移、分化、凋亡等過程中具有調(diào)節(jié)作用[3]。然而國內(nèi)外對PKD1與宮頸癌的關(guān)系研究甚少。因此，本研究收集宮頸標(biāo)本探究PKD1的表達(dá)及與臨床病理學(xué)特征關(guān)系，為宮頸癌診療提供新靶點。

1 資料與方法

1.1 研究對象

收集2018年1月-2019年12月本院就診的宮頸癌患者48例(宮頸癌組)、CINⅢ患者42例(CINⅢ組)及正常宮頸者38例(對照組)的宮頸組織標(biāo)本。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)陰道鏡活檢、宮頸錐切術(shù)、子宮全切術(shù)或?qū)m頸癌手術(shù)取得宮頸組織標(biāo)本，且經(jīng)病理學(xué)檢查證實；②年齡>18歲；③資料齊全。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往放化療史；②既往宮頸手術(shù)史；③合并免疫性疾病或肝腎功能不全；④合并其他惡性腫瘤。本研究通過醫(yī)院倫理委員會審批，研究對象均自愿簽署知情同意書。

1.2 檢測方法

1.2.1免疫組化法3組標(biāo)本切片脫蠟水化，0.3%H2O2-甲醇溶液處理切片；行兩步免疫組化染色，利用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗3次后加PKD1抗體(武漢博士德生物工程有限公司)孵育60min，PBS洗3次加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔PKD1二抗(武漢博士德生物工程有限公司)孵育40min，再PBS洗3次后加入二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液孵育10min；經(jīng)HARRIS蘇木素復(fù)染5min，水洗分化、藍(lán)化，最后脫水封片，行染色封片觀察。

1.2.2閱片及免疫組化評分由病理科醫(yī)師雙盲法閱片，每張切片取10個陽性細(xì)胞富集的高倍視野(×200)觀察；根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)量分別記為0分(無陽性細(xì)胞)、1分(陽性細(xì)胞≤25%)、2分(25%<陽性細(xì)胞≤50%)、3分(50%<陽性細(xì)胞≤75%)、4分(陽性細(xì)胞>75%)；根據(jù)著色強度分別記為0分(未著色)、1分(淡黃色)、2分(棕黃色)、3分(棕褐色)。上述2項評分相加即為最終得分，≤1分為陰性，>1分為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組年齡比較

宮頸癌組年齡(47.62±9.15)歲(34～63歲)，CINⅢ組年齡(46.95±9.02)歲(32～62歲)，對照組年齡(46.71±9.06)歲(33～61歲)。3組年齡比較無差異(P>0.05)。

2.2 PKD1表達(dá)情況比較

3組宮頸標(biāo)本PKD1陽性表達(dá)率及免疫組化評分比較，均為宮頸癌組>CINⅢ組>對照組(P<0.05)，見表1。圖A為宮頸癌宮頸組織PKD1表達(dá)情況，見大量陽性細(xì)胞；圖B為CINⅢ的宮頸PKD1表達(dá)情況，陽性細(xì)胞較多，深染；圖C為CINⅠ的宮頸組織PKD1表達(dá)情況，見少量陽性細(xì)胞，染色較深；圖D為正常宮頸組織PKD1表達(dá)情況，未見陽性細(xì)胞，淡染。具體見圖1(212頁)。

表1 PKD1表達(dá)及評分情況

2.3 PKD1與宮頸癌臨床病理特征及Ki67關(guān)系

宮頸癌組中，PKD1陽性組39例、陰性組9例，兩組年齡、組織學(xué)分型、病灶大小、人乳頭瘤病毒(HPV)感染情況比較無差異(P>0.05)。 FIGO分期、低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki67表達(dá)陽性率PKD1陽性組均高于PKD1陰性組(P<0.05)。見表2。

表2 PKD1與宮頸癌臨床病理特征及Ki67關(guān)系[例(%)]

2.4 PKD1表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征及Ki67表達(dá)相關(guān)性

經(jīng)Spearman秩相關(guān)檢驗，宮頸癌組PKD1免疫組化評分與FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及Ki67免疫組化評分呈顯著正相關(guān)(P<0.05)，與腫瘤分化程度呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見表3。

表3 PKD1與宮頸癌臨床病理特征及Ki67相關(guān)性分析

3 討論

PKD1是PKD蛋白家族成員之一，廣泛參與細(xì)胞內(nèi)關(guān)鍵信號通路傳導(dǎo)[4]。Ganju[5]等發(fā)現(xiàn)PKD1在胰腺癌組織中高表達(dá)，且特異性PKD1蛋白抑制劑能抑制胰腺癌組織增生，控制胰腺癌進(jìn)展。在胃癌組織中，PKD1啟動子異常甲基化，使PKD1表達(dá)下調(diào)，參與胃癌的發(fā)生發(fā)展[6]。故PKD1在不同類型腫瘤細(xì)胞中表達(dá)情況不同，發(fā)揮著不同的生物學(xué)功能。本研究分析了PKD1在宮頸癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示宮頸標(biāo)本PKD1陽性表達(dá)率及免疫組化評分在宮頸癌組中最高，CINⅢ組次之，兩組均顯著高于對照組。說明PKD1不僅在宮頸癌細(xì)胞中高表達(dá)，也在癌前病變中高表達(dá)，且PKD1在正常宮頸組織癌變過程中可能持續(xù)發(fā)揮作用，與國外研究結(jié)果一致[7]。

磷脂酰肌醇-3-激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信號通路在惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸中發(fā)揮重要作用。有研究顯示PKD1可通過抑制磷脂酰肌醇3磷酸(PIP3)的生成，調(diào)控PI3K/Akt信號通路，實現(xiàn)促腫瘤細(xì)胞增殖作用[8]。本研究中宮頸癌PKD1陽性組FIGO分期高于PKD1陰性組，且PKD1免疫組化評分與FIGO分期呈顯著正相關(guān)。說明PKD1可能通過調(diào)控PI3K/Akt信號通路等方式，參與宮頸癌細(xì)胞增殖過程[9]。另據(jù)文獻(xiàn)報道，PKD1還能介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)，通過調(diào)節(jié)組蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性，發(fā)揮促腫瘤血管新生作用[10]。本研究也發(fā)現(xiàn)PKD1陽性組低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率均高于PKD1陰性組，且PKD1免疫組化評分與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)，而與腫瘤分化程度呈顯著負(fù)相關(guān)；即宮頸癌惡性程度越高，PKD1表達(dá)上調(diào)越明顯?？紤]該結(jié)果與PKD1通過調(diào)控PI3K/Akt信號通路、調(diào)節(jié)HDAC活性等多種途徑，發(fā)揮促宮頸癌細(xì)胞增殖、血管新生作用，加速腫瘤細(xì)胞浸潤、轉(zhuǎn)移有關(guān)[11]。

另外，大量研究證實HPV感染與宮頸癌具有顯著相關(guān)性，HPV感染后宮頸上皮細(xì)胞可表達(dá)大量E6蛋白，引起P53抑癌基因大量降解，促進(jìn)腫瘤發(fā)生[12]。而本研究結(jié)果顯示宮頸癌PKD1表達(dá)與HPV感染無明顯相關(guān)性。分析原因可能與樣本量較少，檢驗效能不足有關(guān)[13]。因此，宮頸癌PKD1表達(dá)與HPV感染關(guān)系還需大樣本研究。

近年來，Ki67已成為宮頸癌等惡性腫瘤的重要標(biāo)志物，能反映細(xì)胞群體的增殖活性，其表達(dá)隨著宮頸癌病變程度的加重而增強，與宮頸癌病情發(fā)展及患者預(yù)后情況密切相關(guān)[14-15]。本研究中宮頸癌PKD1陽性組Ki67表達(dá)陽性率高于PKD1陰性組，且PKD1免疫組化評分與Ki67免疫組化評分呈顯著正相關(guān)。說明PKD1可能與Ki67存在協(xié)同效應(yīng)，在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮促進(jìn)作用[16]。

綜上所述，PKD1在宮頸癌及CINⅢ中表達(dá)均上調(diào)，且與宮頸癌FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)，與Ki67表達(dá)情況一致，具有一定臨床應(yīng)用價值，但其作用機制仍需進(jìn)一步探討。