趙艷芳 朱健生 萬 寧 汪鳳儀

1.安徽省蕪湖市婦幼保健院(241001)；2.安徽省婦幼保健院

相關(guān)數(shù)據(jù)統(tǒng)計顯示，我國新生兒出生缺陷總發(fā)生率為5%～6%，且有逐年增長趨勢[1]。出生缺陷中染色體異常是最常見病因，產(chǎn)前胎兒染色體異常篩查是最有效防控措施[2]。血清學(xué)標(biāo)志物檢測及彩超檢查是目前早期篩查出生缺陷的常規(guī)手段，但血清學(xué)標(biāo)志物檢出率為60%～85%，且存在5%假陽性，影響其檢測精度[3]。介入性羊膜腔穿刺或絨毛穿刺檢測染色體異常能夠獲取準(zhǔn)確性高達98%～99%的檢測結(jié)果，成為產(chǎn)前胎兒染色體異常篩查的金標(biāo)準(zhǔn)[4]。但有創(chuàng)操作存在流產(chǎn)風(fēng)險。利用孕婦外周血胎兒游離DNA無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測技術(shù)(NIPT)[5]，在21-三體、18-三體、13-三體、性染色體等染色體異常檢測中敏感性、特異性均優(yōu)于常規(guī)血清學(xué)檢測[6]。本研究對蕪湖地區(qū)984例高齡孕婦產(chǎn)前NIPT檢測結(jié)果及妊娠結(jié)局進行回顧性分析，探討NIPT篩查價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

經(jīng)本院倫理委員會審批批準(zhǔn)，選取2018年9月-2020年1月本院自愿行NIPT檢測的高齡孕婦臨床資料。納入標(biāo)準(zhǔn)：≥35歲單胎妊娠；孕婦及家屬知情自愿要求行NIPT檢測。排除標(biāo)準(zhǔn)：①孕周<12周；②夫妻一方有明確染色體異常；③1年內(nèi)接受過異體輸血、移植手術(shù)、異體細胞治療等；④胎兒超聲檢查提示有結(jié)構(gòu)異常必須產(chǎn)前診斷；⑤有基因遺傳病家族史或提示胎兒罹患基因病高風(fēng)險；⑥孕期合并惡性腫瘤。

1.2 檢測方法

1.2.1標(biāo)本采集采集孕婦空腹外周靜脈血取上清血漿離心處理后取上層血漿，置-80℃待測。

1.2.2 NIPT檢測試劑盒購自安諾優(yōu)達基因科技(北京)有限公司，提取待測樣本中胎兒游離DNA。經(jīng)cffDNA末端修復(fù)及連接反應(yīng)后得到雙鏈DNA分子。經(jīng)PCR擴增后得到DNA測序文庫。采用高通量基因測序技術(shù)進行樣本測序檢測。計算每條染色體reads占比及Z值，分析染色體非整倍體異常情況。

1.2.3染色體核型分析及基因芯片檢測對NIPT檢測提示高風(fēng)險孕婦建議行羊膜腔穿刺產(chǎn)前診斷。告知侵入性產(chǎn)前診斷風(fēng)險，簽署知情同意書后常規(guī)消毒，B超引導(dǎo)下經(jīng)腹羊膜腔穿刺取羊水。①核型分析： 1500r/min離心處理10min，將羊水細胞接種培養(yǎng)7～10d，獲取羊水細胞制片，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)低滲、固定、制片、G顯帶、染色處理后分析細胞核型，并與ISCN2016進行核型比對分析。②基因芯片檢測：應(yīng)用單核苷酸多態(tài)微陣列(美國AffymetrixCytoScan 750K)，按照芯片操作手冊進行DNA消化、擴增、純化、片段化、標(biāo)記信號、雜交、洗片染色及掃描等。采用美國Affymetrix 基因芯片染色體分析軟件(ChAS)將掃描所得原始芯片數(shù)據(jù)進行分析?？截悢?shù)變異的報告閾值是缺失≥200kb，重復(fù)≥500kb。

1.3 妊娠結(jié)局隨訪

對所有NIPT檢測高齡孕婦電話隨訪，記錄產(chǎn)前檢測結(jié)果及妊娠結(jié)局、新生兒狀況等，隨訪截止到2020年7月。

2 結(jié)果

2.1 NIPT篩查

共納入984例研究對象，年齡(40.7±5.5)歲(35～47歲)，孕周(20.6±4.1)周(13～24周)。984例行NIPT技術(shù)檢測，有14例提示染色體篩查結(jié)果異常，篩查陽性率為1.42%。其中21-三體4例、18-三體3例13-三體2例、性染色體異常4例，其他染色體異常1例。

2.2 NIPT篩查與產(chǎn)前診斷對比

對14例NIPT篩查結(jié)果異常的高齡孕婦行羊膜腔穿刺并產(chǎn)前診斷。見表1。

2.3 妊娠結(jié)局

隨訪984例NIPT檢測高齡孕婦，篩查低風(fēng)險970 例中961例正常妊娠，9例因妊娠并發(fā)癥或其他原因終止妊娠。NIPT篩查高風(fēng)險14例經(jīng)產(chǎn)前診斷明確染色體異常10例，其中3例21-三體(47，XN，+21)，2例18-三體(47，XN，+18)、2例13-三體(47，XN，+13)，1例特納綜合征(45，X)及1例XXY綜合征(47，XXY)。其中9例選擇引產(chǎn)終止妊娠；1例胎兒XXX綜合征(47，XXX)堅持妊娠，產(chǎn)后新生兒狀況正常；其余4例產(chǎn)前診斷結(jié)果正常(46，XN)，產(chǎn)后新生兒狀況正常。見表2。

表1 NIPT篩查異常與產(chǎn)前診斷結(jié)果對比情況

表2 14例NIPT檢測高風(fēng)險孕婦羊水穿刺檢測及妊娠結(jié)局

3 討論

大量研究表明[7]，高齡孕婦不僅存在妊娠期并發(fā)癥高風(fēng)險，也存在新生兒出生缺陷風(fēng)險。染色體非整倍體異常是臨床常見出生缺陷，只能通過產(chǎn)前篩查來降低此類出生缺陷。常規(guī)B超檢查和血清學(xué)檢測有助于產(chǎn)前診斷，但假陽性率及假陰性率較高無法確診[8]。羊水穿刺作為新生兒染色體異常排查的“金標(biāo)準(zhǔn)”特異性與靈敏性較高，但介入性檢測有流產(chǎn)和感染風(fēng)險，且患傳染病孕婦不適合羊水穿刺。相關(guān)研究證實[9]，孕12周后孕母外周血游離胎兒DNA片段已夠檢測所需量，DNA片段基本包含胎兒所有基因組序列，通過檢測孕婦外周血游離DNA即可獲得胎兒染色體情況。NIPT可直接檢測孕母外周血胎兒游離DNA而明確新生兒染色體情況，在常規(guī)產(chǎn)檢及染色體異常篩查中有獨特優(yōu)勢。

隨著NIPT技術(shù)的廣泛應(yīng)用，有關(guān)NIPT假陽性案例報道不斷增多。Suzumori[10]等提出NIPT對21-三體異常檢出率為90.1%，假陽性率為0.21%；Hashilon[11]等報道NIPT作為一線篩查方案時其對高危、低危孕婦假陽性率不同；張衛(wèi)華[12]等報道NIPT對21-三體、18-三體、13-三體假陽性率為0.17%，該研究針對非高齡孕婦?？梢?，雖然NIPT優(yōu)于常規(guī)血清標(biāo)志物篩查，但臨床假陽性提示NIPT檢測特異性有限，其陽性預(yù)測值、敏感性仍有待提高。本研究結(jié)果顯示，984例高齡孕婦NIPT檢測陽性率為1.42%，與文獻[13]結(jié)果一致。通過對14例NIPT高風(fēng)險者行產(chǎn)前診斷， 21-三體陽性預(yù)測值為75.0%，18-三體陽性預(yù)測值66.7%；13-三體陽性預(yù)測值為100%，性染色體陽性預(yù)測值為75.0%，他染色體陽性預(yù)測值為0%。考慮本研究對象針對高齡孕婦，且樣本量較少，與文獻[14-15]等結(jié)果存在一定差異。同時檢測技術(shù)的局限性，NIPT對特殊結(jié)構(gòu)異常如染色體倒位、易位不敏感。此外，本研究中尚有4例NIPT檢測異常但產(chǎn)前診斷結(jié)果正常，這可能與限制性胎盤嵌合有一定關(guān)聯(lián)，具體原因需進一步研究。提示，NIPT雖然是一種優(yōu)于常規(guī)血清學(xué)檢測的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷手段，檢測敏感性較好，但特異性受限導(dǎo)致NIPT尚不能徹底取代介入性染色體核型分析、基因芯片等產(chǎn)前診斷方法。

綜上所述，NIPT技術(shù)應(yīng)用于高齡孕婦有較好的篩查價值， NIPT篩查結(jié)果為高風(fēng)險者仍需進行介入性產(chǎn)前診斷，從而避免假陽性或非必要引產(chǎn)。