吳 臻,何富樂

(浙江中醫(yī)藥大學(xué) 1.第一臨床醫(yī)學(xué)院；2.健康管理研究所，浙江 杭州 310053)

畬族藥膳是以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，將藥物與食物相配合，通過烹調(diào)加工而成，具有防病、治病、保健、強(qiáng)身等功效，目前在養(yǎng)生保健領(lǐng)域應(yīng)用甚廣。經(jīng)團(tuán)隊(duì)前期實(shí)地調(diào)研發(fā)現(xiàn)，畬族藥膳所采用的藥材與101種藥食同源物品具有高度的重疊性[1]，其中覆盆子和黃精兩味藥材作為陰陽雙補(bǔ)劑，在畬族藥膳中廣泛應(yīng)用[2]，如鳳鳥騰飛(黃精燉雞)、覆盆子餅等[3]。為進(jìn)一步研究覆盆子和黃精的保健作用，本研究對(duì)腎陰陽兩虛模型小鼠采用不同配比覆盆子黃精顆粒劑進(jìn)行干預(yù)治療，現(xiàn)匯報(bào)如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 選取6～8周齡SPF級(jí)健康雄性BALB/c小鼠70只，體質(zhì)量大于16 g，平均體質(zhì)量(18.91±0.98)g，由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，供應(yīng)商：上海BK公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(滬)2018-0006。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心屏障環(huán)境中，合格證號(hào)：SYXK(浙)2018-0012；飼喂SPF級(jí)飼料，自由飲食，玉米芯墊料。

1.2 藥物 黃柏防己顆粒(生藥含量1∶1)、覆盆子顆粒、黃精顆粒均由浙江景岳堂公司生產(chǎn)。黃柏防己顆粒配成溶液，濃度為1.5 g/mL。

1.3 小鼠腎陰陽兩虛模型建立 70只SPF級(jí)健康雄性BALB/c小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，稱體質(zhì)量標(biāo)記(3%～5%苦味酸溶液)，隨機(jī)選取10只小鼠正常飼養(yǎng)為正常組。其余60只小鼠予以造模藥物1.5 g/mL黃柏防己顆粒溶液灌胃0.5 mL/d，灌胃期間每日上午8點(diǎn)至10點(diǎn)、下午2點(diǎn)至4點(diǎn)對(duì)小鼠的精神狀態(tài)、毛發(fā)松散程度、活動(dòng)程度、飲水和進(jìn)食等一般狀態(tài)進(jìn)行觀察。以《中醫(yī)診斷學(xué)》[4]腎陰陽兩虛證候標(biāo)準(zhǔn)為基礎(chǔ)，參照李慧[5]研究結(jié)果，自擬小鼠腎陰陽兩虛模型判定標(biāo)準(zhǔn)。主癥：①飲水增多；②精神不振；③身體消瘦；④生長遲緩蜷縮；⑤尿量增多。次癥：①安靜時(shí)少動(dòng)，灌藥時(shí)掙扎微弱；②體毛無光澤、豎立、打綹；③拉尾排便、排尿、遺精、便溏；④舌紅。小鼠腎陰陽兩虛模型判定標(biāo)準(zhǔn)：同時(shí)具備3項(xiàng)以上主癥者,或 2項(xiàng)主癥 (后3 項(xiàng)必須占1項(xiàng)) +3項(xiàng)次癥者可診斷。灌胃2周后，60只造模小鼠死亡6只，余54只均造模成功。

1.4 藥物治療 從造模成功的54只小鼠中隨機(jī)挑選50只小鼠分成實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組3、實(shí)驗(yàn)組4、對(duì)照組，每組10只。實(shí)驗(yàn)組小鼠以覆盆子顆粒、黃精顆粒溶液灌胃0.5 mL/d，灌胃21 d。實(shí)驗(yàn)組1(覆盆子∶黃精=1∶1)，實(shí)驗(yàn)組2(覆盆子∶黃精=1∶2)，實(shí)驗(yàn)組3(覆盆子∶黃精=2∶1)，實(shí)驗(yàn)組4(覆盆子∶黃精=5∶1)。對(duì)照組和正常組小鼠均以生理鹽水灌胃0.5 mL/d，灌胃21 d。治療期間無小鼠死亡，結(jié)束后稱體質(zhì)量，觀察癥狀。

1.5 觀察指標(biāo)

1.5.1 行為學(xué)指標(biāo) 對(duì)行為學(xué)指標(biāo)采用分級(jí)計(jì)分法，主、次行為分4級(jí)( 正常、輕、中、重) 計(jì)分,主要行為分別計(jì) 0、2、4、6 分,次要行為分別計(jì) 0、1、2、3 分(見表1)。療效評(píng)定采用尼莫地平法: [( 治療前積分-治療后積分) ÷治療前積分]×100%。每日上午8點(diǎn)至10點(diǎn)、下午2點(diǎn)至4點(diǎn)對(duì)小鼠進(jìn)行一般狀態(tài)觀察。記錄小鼠的毛色(光澤、枯黃)、毛態(tài)(毛少、豎立、柔順)、精神(萎靡、倦怠、嗜臥)、體形(消瘦、肥胖、正常)、飲食、飲水、糞質(zhì)(干燥、稀濕、正常)、糞色(黑、黃、正常)、拉尾排便(-、+)、拉尾排尿(-、+)、運(yùn)動(dòng)(少動(dòng)、靈活)、抵抗(劇烈、微弱)、呼吸頻率、舌質(zhì)(淡紅、暗紅、紫、嫩、癖斑、少津)、舌苔(薄、少、無)、尾色(粉紅、淡白、暗)、尾溫(正常、熱、涼)。

表1 行為學(xué)指標(biāo)量化評(píng)分表Table 1 Quantitative scoring table of behavioral indicators

1.5.2 血磷、血鈣檢測 小鼠眶靜脈取血，收集血漿。采用日立3100全自動(dòng)化分析儀檢測血磷、血鈣水平。

1.5.3 腎臟干濕度檢測 拉尾處死小鼠，取出雙腎，觀察腎臟是否受損并稱取濕質(zhì)量。腎臟置入70℃恒溫烘干24 h，稱取干質(zhì)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，2組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，3組及3組以上組間計(jì)量資料比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 行為觀察 治療前，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組小鼠的行為學(xué)積分均高于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，實(shí)驗(yàn)組2與對(duì)照組小鼠的行為學(xué)積分均高于正常組，實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組3、實(shí)驗(yàn)組4和正常組小鼠的行為指標(biāo)積分均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。治療后，各實(shí)驗(yàn)組小鼠陰陽兩虛癥狀均有改善：體毛漸趨光澤、柔順，體形漸趨正常，糞質(zhì)、糞色漸趨正常，拉尾排便、排尿減少，運(yùn)動(dòng)靈活，舌質(zhì)淡紅，舌苔薄，尾色粉紅，尾溫正常。

表2 小鼠行為學(xué)積分比較 (分)Table 2 Comparison of behavioral scores in mice (points)

2.2 血磷和血鈣水平 治療前，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的血鈣水平均低于正常組，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的血磷水平均低于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，對(duì)照組和各實(shí)驗(yàn)組血鈣水平均增高、血磷水平均下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。治療后，各實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的血鈣水平均高于正常組，實(shí)驗(yàn)組4的血鈣水平高于對(duì)照組，正常組、實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組4的血磷水平均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 小鼠血磷和血鈣水平比較Table 3 Comparison of blood phosphorus and blood calcium levels in mice

2.3 腎臟干濕質(zhì)量差值 正常組腎臟干濕質(zhì)量差值為(0.341 8±0.021 9)g，對(duì)照組為(0.331 0±0.028 9)g，實(shí)驗(yàn)組1為(0.224 3±0.015 5)g，實(shí)驗(yàn)組2為(0.321 9±0.032 9)g，實(shí)驗(yàn)組3為(0.276 0±0.017 6)g，實(shí)驗(yàn)組4為(0.266 1±0.026 2)g。單因素ANOVA檢驗(yàn)結(jié)果顯示，各組的腎干濕度差值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=28.153，P<0.001)。實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組3、實(shí)驗(yàn)組4與正常組和對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

《素問·陰陽應(yīng)象大論》云：“陰陽者，天地之道也，萬物之綱紀(jì)，變化之父母，生殺之本始，神明之府也”。陰陽為人體之本，陰陽兩虛是陰陽互根互用關(guān)系失調(diào)所呈現(xiàn)出的一種病理變化，腎為先天之本，為全身陰陽之本，所謂“五臟之陰氣，非此不能滋；五臟之陽氣，非此不能發(fā)”。腎陰陽兩虛臨床主要表現(xiàn)為畏寒肢冷、肌瘦乏力、肢體酸疼且沉重、面足浮腫、口渴多飲、咽干舌燥、面白無華、陽瘺早泄、小便清長、夜尿頻多、大便溏薄、舌淡紅胖嫩、苔薄白或白膩、脈沉細(xì)或沉遲無力等癥狀，嚴(yán)重的甚至影響人們的日常生活。

本研究采用防己黃柏顆粒對(duì)正常小鼠進(jìn)行14 d造模干預(yù)，經(jīng)行為學(xué)積分表評(píng)分，符合腎陰陽兩虛癥狀。予以不同配比的覆盆子黃精顆粒劑干預(yù)治療21 d。治療后，實(shí)驗(yàn)組1、實(shí)驗(yàn)組3、實(shí)驗(yàn)組4小鼠的行為指標(biāo)積分均明顯低于對(duì)照組，提示覆盆子黃精顆粒除配比為2∶1外，均能顯著改善小鼠行為學(xué)。為進(jìn)一步探討覆盆子黃精顆粒對(duì)模型小鼠體內(nèi)微量元素代謝的影響，本研究對(duì)治療前后模型小鼠的血鈣、血磷水平進(jìn)行檢測，治療前的陰陽兩虛模型小鼠表現(xiàn)為“低鈣高磷”狀態(tài)，與吳欣莉等[6]認(rèn)為腎陰陽兩虛證存在低鈣高磷狀態(tài)相一致。治療后，實(shí)驗(yàn)組4的血鈣水平明顯高于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組2、實(shí)驗(yàn)組4的血磷水平明顯低于對(duì)照組，提示實(shí)驗(yàn)組4(覆盆子∶黃精=5∶1)對(duì)血鈣、血磷的代謝影響最大，表明覆盆子可以促進(jìn)機(jī)體對(duì)鈣離子、磷離子的吸收[7]，可顯著改善“腎陰陽兩虛證低鈣高磷”狀態(tài)，為機(jī)體陰陽平衡提供客觀物質(zhì)基礎(chǔ)。

綜上所述，覆盆子黃精顆粒比例為5∶1時(shí)對(duì)腎陰陽兩虛模型小鼠行為學(xué)、腎干濕度、機(jī)體微量元素的療效最為顯著，在后續(xù)研究中需進(jìn)一步研究藥食同源食品改善臨床癥狀虛實(shí)狀態(tài)的最佳配比，探尋中醫(yī)證候與客觀物質(zhì)間的相關(guān)性。