◎ 李國光

（上海輝文生物技術(shù)股份有限公司，上海 201318）

銀耳在我國是最受歡迎的食用菌和藥用真菌之一，又稱為雪耳或者白蘑菇，現(xiàn)在市場上的銀耳幾乎都是是商業(yè)化栽培所得[1]。銀耳的子實體富含蛋白質(zhì)、多糖、膳食纖維、多種礦物質(zhì)、微量元素和維生素[2]。子實體中的銀耳多糖主要是酸性多糖，具有提高人體免疫[3]、抑制腫瘤[4]、抗衰老[5]及清除自由基[6]等生物學(xué)功能。有研究表明，子實體中提取的銀耳多糖主鏈為由α-（1，3）-糖苷鍵組成的甘露聚糖，主鏈的2，4，6 位上鏈接有葡萄糖、木糖、巖藻糖及葡萄糖醛酸等殘基組成的側(cè)鏈[7]。有研究者認(rèn)為食用菌多糖是具有益生元效應(yīng)的活性物質(zhì)，如GUO等人利用銀耳多糖，以雞為研究的對象，通過對雞盲腸的分析發(fā)現(xiàn)，多糖能夠發(fā)酵產(chǎn)生揮發(fā)性脂肪酸，改善腸道內(nèi)微生物菌群的組成和活性。同時進(jìn)行體外實驗，證明銀耳多糖能夠促進(jìn)雙歧桿菌生長[8]。本研究利用體外實驗分析銀耳多糖益生元效應(yīng)情況，為銀耳多糖益生元的進(jìn)一步研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

銀耳多糖，MRS 液體培養(yǎng)基和MRS 瓊脂培養(yǎng)基，TPY 液 體 培 養(yǎng) 基 和TPY 瓊 脂 養(yǎng) 基，TSB 肉 湯液體培養(yǎng)基和TSA 瓊脂培養(yǎng)基。青春雙歧桿菌（編號：GDMCC1.278）、長雙歧桿菌嬰兒亞種（編號：GDMCC1.207）、嗜酸乳桿菌（編號：GDMCC1.208）、鼠李糖乳桿菌（編號：GDMCC1.325）、大腸桿菌（編號：GDMCC1.737）和沙門氏菌（編號：GDMCC1.237），所有菌株購自廣東省微生物菌種保藏中心。

1.2 儀器與設(shè)備

SX-BHC 生物安全柜（蘇州凈化設(shè)備有限公司）、恒溫培養(yǎng)箱（上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司）、搖床（上海世平實驗設(shè)備有限公司）、高壓蒸汽滅菌鍋（上海博迅醫(yī)療生物儀器股份有限公司）和pH 計（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 菌種活化

凍干粉菌種活化，首次活化，干粉要全部用完，不能保留，干粉用盡量少的MRS、TYP、TSB 培養(yǎng)液溶解，接種在5 mL 液體培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)。將雙歧桿菌接種于TPY 液體培養(yǎng)基，37 ℃厭氧培養(yǎng)48 h；乳酸菌接種于MRS 液體培養(yǎng)基，37 ℃培養(yǎng)24 h，。將大腸桿菌及沙門氏菌接種于肉湯液體培養(yǎng)基37 ℃培養(yǎng)24 h，分別涂片、染色、鏡檢，觀察菌體形態(tài)正確后，開始后續(xù)研究。

1.3.2 不同濃度銀耳多糖對有益菌和有害菌的影響

銀耳多糖為實驗室提取保存，用去離子無菌水配制成濃度為0.10%、0.05%、0.01%的液體，取一個96孔平板，在孔中加入90 μL 銀耳多糖溶液，分別接入10 μL 的青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌嬰兒亞種、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、大腸桿菌和沙門氏菌菌液，放在厭氧搖床上培養(yǎng)37 ℃，24 h，取出OD600檢測（檢測前輕微晃動96 孔板）。

1.3.3 不同益生元調(diào)節(jié)腸道菌群作用

采用GAM 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基（未加葡萄糖），對照組1不加葡萄糖，實驗組分別為0.10%、0.05%、0.01%銀耳多糖，每組設(shè)置3 個平行，每個樣品裝液量為50 mL，滅菌處理，取新鮮健康人的糞便10 g 加入到200 mL 生理鹽水中充分混合，分別取上清1 mL 加入到空白組和實驗組中，37 ℃發(fā)酵培養(yǎng)24 h。

檢測發(fā)酵24 h 后發(fā)酵液中腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌和乳酸菌的值，以及發(fā)酵液中的pH 值，并計算B/E值，值越高表示益生菌在體內(nèi)的定植抗力越強(qiáng)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度銀耳多糖對有益菌和有害菌的影響

由圖1 可知，不同濃度的銀耳多糖對微生物生長的影響不同，對雙歧桿菌和乳酸桿菌，銀耳多糖能夠促進(jìn)其生長且成劑量關(guān)系，0.5%的銀耳多糖對青春雙歧桿菌、長雙歧桿菌嬰兒亞種、嗜酸乳桿菌、鼠李糖乳桿菌的生長促進(jìn)效果最顯著。而對于大腸桿菌和沙門氏菌來說，銀耳多糖抑制作用不明顯，也沒有很好的促進(jìn)效果?？傮w來看，銀耳多糖可以作為一種益生元促進(jìn)腸道有益微生物的生長。

2.2 不同濃度銀耳多糖對腸道菌群調(diào)節(jié)作用

由表1 可知，發(fā)酵24 h 后，腸道菌群數(shù)量測定，不同濃度銀耳多糖與對照組相比較，雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌和腸球菌均增多，但乳桿菌和雙歧桿菌增加顯著（p<0.01）；與對照組相比，3 個實驗組的pH值明顯降低（p<0.05），但各試驗組間差異無顯著性（p>0.05）；發(fā)酵24 h 后測得的B/E值可以發(fā)現(xiàn)0.01%濃度銀耳多糖組最高，表明腸道微生物定植抗力更強(qiáng)。

表1 發(fā)酵24 h 后腸道菌群數(shù)量測定結(jié)果表（單位：CFU·g-1）

3 結(jié)論

研究結(jié)果表明，銀耳多糖可以作為一種益生元發(fā)揮益生元效應(yīng)，從體外實驗可以發(fā)現(xiàn)隨著銀耳多糖的含量提高，雙歧桿菌和乳酸菌的數(shù)量明顯增多，同時大腸桿菌和沙門氏菌等有害菌的生長不明顯。發(fā)酵24 h腸道菌群數(shù)量測定 ，各實驗組腸道菌與對照組相比較雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌和腸球菌均增多；pH值降低，各試驗組間差異無顯著性（p>0.05）。銀耳多糖對有害菌群（腸桿菌、腸球菌）的增殖效果要弱，而銀耳多糖對人體腸道內(nèi)的有益菌群（雙歧桿菌、乳桿菌）增殖有明顯促進(jìn)作用。