徐勇存 金鑫雷 楊明君 范偉贈 張平

(浙江天豐生物科學有限公司檢測中心，浙江 金華 321000)

35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油是由氯氟吡氧乙酸異辛酯原藥、氰氟草酯原藥、異噁草松原藥及乳化劑溶解在適宜的溶劑中配制而成的,是水稻田選擇性莖葉處理三元復配除草劑,可用于防除千金子、稗草、馬唐、牛筋草、狗尾草、雙穗雀稗、空心蓮子草等雜草。目前包含此3 種有效成分復配混劑的檢測方法未見公開報道。本文列舉的氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松檢測方法可將氯氟吡氧乙酸異辛酯、氰氟草酯、異噁草松及其雜質快速的分離、檢測。有利于幫助企業(yè)組織生產,并進行科學全面的質量管理,維護公司產品的信譽和用戶的利益。

1 實驗部分

1.1 儀器設備

高效液相色譜儀LC1260:配有二極管陣列檢測器(美國Agilent 公司)；色譜柱:Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm (美國Agilent 公司)；電子天平:BP211D (德國賽多利斯公司)；超聲波清洗器:KQ-400B (昆山市超聲儀器有限公司)；超純水機:Milli-Q (美國Millipore 公司)。

1.2 試劑

甲醇:色譜純(美國TEDIA 天地試劑公司)；磷酸:分析純(國藥集團化學試劑有限公司)；氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣、氰氟草酯標樣、異噁草松標樣:采購自國家農藥質量監(jiān)督檢驗中心(沈陽),其質量分數(shù)分別為98.8%、98.7%、97.6%；35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油樣品(6.0%氯氟吡氧乙酸異辛酯加20.0%氰氟草酯加9.0%異噁草松):浙江天豐生物科學有限公司。各有效成分結構式見圖1、圖2、圖3。

1.3 標準溶液和試樣溶液的制備

1.3.1 標樣溶液的配制

稱取氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣0.012g、氰氟草酯標樣0.040g、異噁草松標樣0.018g (精確至0.00002g) 置于100mL 容量瓶中,加甲醇溶解,超聲波浴槽中脫氣10min,取出降至室溫后,定容,搖勻,經微孔濾膜過濾,此為標樣溶液。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約0.20g (精確至0.00002g) 置于100mL容量瓶中,加甲醇溶解,超聲波浴槽中脫氣10min,取出降至室溫后,定容,搖勻,經微孔濾膜過濾,此為試樣溶液。

1.4 HPLC 分析條件

流動相:Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28(V/V)；流速:1.8mL·min-1；檢測器波長:235nm；柱溫:45℃；進樣體積:5μL。

1.5 測定和分析

在上述操作條件下,待儀器基線穩(wěn)定后,連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液,計算各針有效成分響應值的重復性,待相連兩針各有效成分的峰面積變化小于1.5%時,按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油典型的標樣、試樣色譜圖見圖4、圖5,異噁草松保留時間約0.6min、氰氟草酯保留時間約1.7min、氯氟吡氧乙酸異辛酯保留時間約3.6min。

2 結果和討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱的選擇

選用Agilent Eclipse Plus C18,50mm × 4.6mm(i.d.) 1.8μm；Agilent Eclipse Plus C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm；Thermo BDS HYPERSIL C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm 色譜柱進行試驗。經過試驗發(fā)現(xiàn),3 根色譜柱都能較好地分離各有效成分及雜質,但是Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm(i.d.) 1.8μm 色譜柱各有效成分的保留時間短,出峰快,檢測時間短,故選擇Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm 色譜柱。

2.1.2 檢測波長的選擇

用二極管陣列檢測器(DAD) 進行光譜掃描,結果在235nm 波長處各有效成分(氯氟吡氧乙酸異辛酯、氰氟草酯、異噁草松) 吸收值較大,各雜質在此波長下吸收值很小,故選擇235nm 為檢測波長。

2.1.3 流動相的選擇

選用甲醇-0.05%磷酸水溶液、甲醇-水溶液不同配比濃度時,經過試驗發(fā)現(xiàn)當流動相選用Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28 (V/V) 時,各有效成分及雜質得到很好的分離,峰形對稱。

2.2 方法線性關系的測定

稱取一定量的氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣、氰氟草酯標樣、異噁草松標樣 (精確至0.00002g) 置于50mL 容量瓶中,用甲醇溶解,定容。用移液管分別移取上述標準溶液1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL 至50mL 容量瓶中,加甲醇定容。在同一色譜條件下測定上述5 個濃度的氯氟吡氧乙酸異辛酯(氰氟草酯或異噁草松) 峰面積,以質量濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標作圖,測定其線性回歸方程。結果見圖6、圖7、圖8。

結果表明,氯氟吡氧乙酸異辛酯(氰氟草酯或異噁草松) 在此分析條件下具有良好的線性關系。氯氟吡氧乙酸異辛酯線性回歸方程為y=4503.5x-7.6121,相關系數(shù)R2=0.9994。氰氟草酯線性回歸方程為y=7633.6x+20.959,相關系數(shù)R2=0.9997。異噁草松線性回歸方程為y=2760.5x+3.4615,相關系數(shù)R2=0.9995。

2.3 方法精密度的測定

選取一批合格的35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油樣品,按上述方法平行檢測5次,方法精密度測定結果見表1。氯氟吡氧乙酸異辛酯標準偏差為0.03,相對標準偏差為0.50%；氰氟草酯標準偏差為0.06,相對標準偏差為0.30%；異噁草松標準偏差為0.04,相對標準偏差為0.42%。各組分的相對標準偏差均小于Horwits 公式計算值,證明此方法精密度較高,符合方法確認要求。

2.4 方法準確度的測定

在已知質量分數(shù)的35%氯氟吡氧乙酸異辛酯·氰氟草酯·異噁草松乳油試樣中,加入一定量的氯氟吡氧乙酸異辛酯標樣、氰氟草酯標樣、異噁草松標樣,按上述方法檢測5 次,測定結果見表2,結果表明,氯氟吡氧乙酸異辛酯的平均回收率為99.07%,氰氟草酯的平均回收率為99.38%,異噁草松的平均回收率為99.16%,此方法具有較高的回收率。

表1 方法精密度測定結果

表2 方法準確度測定結果

3 總結

經過以上試驗表明,此檢測方法具有線性關系好、精密度高、回收率高、檢測速度快的特點,適用于企業(yè)生產過程中該產品的定性定量檢測。