龐賢春

（廣西北海市婦幼保健院遺傳實驗室，廣西 北海）

0 引言

隨著我國二胎政策的放開，人們婚育觀念的改變及輔助生殖技術(shù)的進步，近年來，高齡（≥35 歲）孕婦的數(shù)量迅速增加。而高齡孕婦生產(chǎn)染色體異常胎兒的概率遠高于適齡孕婦[1,2]。由于高齡產(chǎn)婦的卵子老化，其染色體不分離的發(fā)生概率升高，胎兒染色體異常的概率也隨之增長，進而導(dǎo)致畸形兒的生育率增加。[3]。下面我們對2015-2019年來本院做產(chǎn)前診斷的高齡孕婦羊水細胞染色體核型結(jié)果分析如下。

1 對象與方法

1.1 對象

2015 年1 月至2019 年12 月來本院行羊水穿刺的高齡孕婦（其中包含無創(chuàng)染色體產(chǎn)前篩查高風(fēng)險，不良孕產(chǎn)史）1196 例，孕周17-24 周，均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 梁色體核型檢驗

在B 超引導(dǎo)下，經(jīng)腹部羊膜腔穿刺術(shù)，無菌操作，抽取2ml 羊水棄去，再抽取20ml 羊水分別等量置于2 支15ml無菌離心管中，1500r/min 離心10min,在超凈工作臺無菌操作，棄上清，留2.5ml 細胞懸液，分別接種于兩個裝有不同廠家的培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶，用無菌吸管吹打混勻，分別放置在37℃含5%CO2的不同的兩套培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)7d，取出培養(yǎng)瓶于倒置顯微鏡下觀察羊水細胞的生長情況，進行添液或者換液處理。繼續(xù)培養(yǎng)1-2d 后，倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)有6-8 個克隆且有許多圓形透亮的細胞時加入秋水仙素阻斷，胰酶脫落，低滲，固定收獲細胞，滴片，80℃烤片3-4h，常規(guī)下G 顯帶，并進行核型分析。每例標本常規(guī)計數(shù)至少20 個細胞，并在萊卡染色體分析系統(tǒng)下分析5 個核型，記錄任何觀察到的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常的核型。如有可能有性染色體異常病例的標本，則應(yīng)至少計數(shù)30 個細胞，如疑嵌合體，計數(shù)50 個以上細胞，對一些多態(tài)性染色體及標記性染色體加做C 帶或N 帶加以驗證。根據(jù)人類遺傳學(xué)國際命名體制ISCN(2013)標準進行描述染色體核型，并出具染色體核型分析報告。

1.2.2 C 顯帶

用5%Ba(OH)2和2 X SSC 處理，Giemasa 染色，在油鏡下觀察分散好、長度適中的著絲粒區(qū)深染的染色體。

1.2.3 N 顯帶

用50%AgNO3銀染，Giemasa 染色，在油鏡下觀察分散好、長度適中的有黑色銀染顆粒的染色體。

2 結(jié)果

2.1 染色體異常核型及異常檢出率

1196 例高齡孕婦（≥35 周歲）羊水標本培養(yǎng)成功1194 份，成功率為99.8%。共檢出染色體異常71 例，異常檢出率為5.9%(71/1196)，其中染色體數(shù)目異常50 例，染色體結(jié)構(gòu)異常3 例，染色體多態(tài)性13 例，嵌合體5 例。

2.2 常見異常染色體種類及異常率

在本研究中高齡孕婦三體綜合征胎兒共38 例：其中21-三體為31 例，異常率 2.59% （31/1196）;18-三體為5 例，異常率0.42%（5/1196）;13- 三體2 例，異常率0.17%（2/1196）,其次為性染色體異常14 例（包括性染色體數(shù)目異常及嵌合體)，異常率1.17%（14/1196）,多態(tài)性核型13 例，異常率1.09%(13/1196),見表1。

表1 常見異常染色體種類及異常率

3 討論

在臨床中，由于新生兒染色體病而導(dǎo)致其出現(xiàn)遺傳類疾病的現(xiàn)象十分常見，羊水染色體核型分析作為重要的產(chǎn)前細胞遺傳學(xué)診斷方法，能夠有效預(yù)防染色體病患兒的出生。不做篩查是我國現(xiàn)行的產(chǎn)前診斷策略，其僅將高齡作為施行有創(chuàng)產(chǎn)前診斷的唯一指標[4]。產(chǎn)前診斷技術(shù)為減少出生缺陷提供了胎兒遺傳學(xué)信息，目前最為常用的產(chǎn)前診斷技術(shù)為羊膜腔穿刺和絨毛穿刺，因為在操作中存在較大的醫(yī)療風(fēng)險，導(dǎo)致妊娠丟失的發(fā)生，丟失率分別為0．06%-1.3%及0.5%-2%[5]，同時還會為產(chǎn)婦帶來較大的心理壓力。

已有大量文獻報道，高齡是影響孕婦中胎兒染色體異常的重要因素之一，孕婦年紀與發(fā)生率呈正比，尤其是T21[6]。本研究1196 例高齡孕婦，胎兒染色體異常核型71例，異常發(fā)生率達5.9%，其中三體綜合征38 例，占總異常率53.5%，21-三體為31 例，18-三體5 例，13-三體2 例，與此前研究中高齡孕婦由于染色體不分離導(dǎo)致染色體數(shù)目異常的概率增加相符合。可見，高齡妊娠由于卵子老化、染色體不分離的概率較高，導(dǎo)致各種染色體數(shù)目異常的概率大大增加。三體核型仍然是胎兒最常見的異常核型，染色體畸變常被認為是引起三體綜合癥的主要原因，在親代的配子形成時或妊娠初期受精卵卵裂時出現(xiàn)染色體不分離，導(dǎo)致一個配子含多條染色體，另一個配子染色體缺失，受精后形成三體型或單體型異常的子代。由于3 條染色體載有相同的基因，破壞了遺傳物質(zhì)間的平衡，導(dǎo)致胎兒染色體異常[7-10]。高齡孕婦21 及18-三體綜合征的檢出率可通過遺傳咨詢進行羊水染色體分析得到有效增加，減少給社會和家庭帶來的負擔(dān)。性染色體異常14 例（包括性染色體數(shù)目異常及嵌合體)，多態(tài)性核型13 例，占總異常率18.31%,其中以inv（9）最為多見，此外，結(jié)構(gòu)異常共檢出3 例胎兒常染色體結(jié)構(gòu)異常。如果從表型正常的父母遺傳而來的常染色體結(jié)構(gòu)異常，胎兒出現(xiàn)異常表型的風(fēng)險較低。而新發(fā)常染色體結(jié)構(gòu)異常、單親二體或者斷裂點剛好在致病基因的位點上，就可能出現(xiàn)畸形的胎兒。其異常效應(yīng)取決于非平衡片段基因的數(shù)量和功能表達。通常非平衡片段越大，所含的基因越多，表達的致病基因就越多，胎兒發(fā)生畸形的風(fēng)險就越大。多態(tài)變異的構(gòu)成及意義，1196 例標本中共檢出13 例染色體多態(tài)變異，過去認為染色體異染色質(zhì)區(qū)及隨體區(qū)所含基因少，不具有表型效應(yīng)，但近年來，在一定內(nèi)環(huán)境影響下，這些多態(tài)性變異可導(dǎo)致臨床表型異常也有報道[11,12]。

根據(jù)高齡產(chǎn)婦是產(chǎn)前診斷的重點對象這一顯著特征，本文特選取1196 例高齡產(chǎn)婦的羊水細胞作為研究樣本，并對其進行染色體核型分析，進而對高齡產(chǎn)婦所孕育胎兒的各種染色體疾病的發(fā)生率及其染色體異常的主要核型進行探究，為單一高齡因素孕婦人群的產(chǎn)前篩查與診斷方案研究提供參考，并且作為依據(jù)為遺傳咨詢和產(chǎn)前診斷提供有力支撐。