曾雪亮　李蓓　曾韜慧　鐘文敏

【摘要】 目的：研究穿心蓮內(nèi)酯對(duì)大鼠心律失常的作用機(jī)制。方法：將2019年10月-2020年10月從江西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買的90只清潔級(jí)雄性大鼠，隨機(jī)分為氯仿誘發(fā)心律失常組（A組，n=10）和氯仿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（B組，n=10）;腎上腺素誘發(fā)心律失常組（C組，n=10）和腎上腺素誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（D組，n=10）;氯化鈣誘發(fā)心律失常組（E組，n=10）和氯化鈣誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（F組，n=10）;烏頭堿誘發(fā)心律失常組（G組，n=10）和烏頭堿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（H組，n=10）;正常對(duì)照組（I組，n=10）。觀察A～F組心律失常出現(xiàn)時(shí)間和心律失常持續(xù)時(shí)間，比較G、H組室性早搏（VP）、室性心動(dòng)過速（VT）和室顫（VF）的持續(xù)時(shí)間，比較A～I(xiàn)組大鼠血清Ca²⁺、LDH水平。結(jié)果：B組與A組、D組與C組、F組與E組比較，心律失常出現(xiàn)時(shí)間均顯著推遲，心律失常持續(xù)時(shí)間均顯著縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。H組VP、VT、VF均顯著短于G組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與I組比較，A、C、E、G組大鼠Ca²⁺、LDH水平均顯著升高（P<0.05）;B組與A組、D組與C組、F組與E組、H組與G組比較，血清中Ca²⁺、LDH水平均顯著降低（P<0.05）。結(jié)論：穿心蓮內(nèi)酯對(duì)氯仿、腎上腺素、氯化鈣、烏頭堿引起心律失常具有對(duì)抗作用，能夠降低血清LDH與Ca²⁺水平，是抗心律失常的有效藥物。

【關(guān)鍵詞】 穿心蓮內(nèi)酯 心律失常 心律失常出現(xiàn)時(shí)間 心律失常持續(xù)時(shí)間

Anti-arrhythmic Effects and Mechanism of Andrographolide/ZENG Xueliang， LI Bei， ZENG Taohui， ZHONG Wenmin. //Medical Innovation of China， 2021， 18（15）： 00-010

[Abstract] Objective： To study the mechanism of Andrographolide on arrhythmia in rats. Method： A total of 90 clean male rats who purchased from Jiangxi Provincial Laboratory Animal Center from October 2019 to October 2020 were randomly divided into Chloroform-induced arrhythmia group （group A， n=10） and Chloroform-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （group B， n=10）， Adrenerinol-induced arrhythmias （group C， n=10） and Adrenerinol-induced arrhythmias combined with Andrographolide group （group D， n=10）， CaCl2-induced arrhythmia group （group E， n=10） and CaCl2-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （F group， n=10）， Aconitonine-induced arrhythmia group （group G， n=10） and Aconitine-induced arrhythmia combined with Andrographolide group （group H， n=10）， normal control group （group I， n=10）. The occurrence time and duration of arrhythmia in group A to F were observed. The duration of ventricular premature beats （VP）， ventricular tachycardia （VT） and ventricular fibrillation （VF） in group G and group H were compared. The levels of serum Ca²⁺and LDH in group A to I were compared. Result： Compared with group A， group B， group D and group C， and group F and group E， the occurrence time of arrhythmia were significantly delayed and the duration of arrhythmia were significantly shortened， the differences were statistically significant （P<0.05）. VP， VT and VF in group H were significantly shorter than those in group G， the differences were statistically significant （P<0.05）. Compared with group I， the Ca²⁺and LDH levels in group A， group C， group E and group G were significantly increased （P<0.05）. Compared with group A， group D， group C， group F and group E， and group H and group G， serum Ca²⁺and LDH levels were significantly decreased （P<0.05）. Conclusion： Andrographolide can antagonize arrhythmia induced by chloroform， Adrenerinol， calcium chloride and aconitine， reduce serum LDH and Ca²⁺levels， and is an effective drug against arrhythmia.

[Key words] Andrographolide Arrhythmia Occurrence time of arrhythmia Duration of arrhythmia

First-authors address： The First Affiliated Hospital of Gannan Medical College， Ganzhou 341000， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2021.15.002

心律失常為內(nèi)科易發(fā)癥狀，表現(xiàn)為心臟搏動(dòng)異常，引起胸悶、低血壓、心悸等癥狀[1-2]。可單獨(dú)發(fā)病或與心血管病并發(fā)，導(dǎo)致心臟衰竭或猝死[3-4]。中醫(yī)對(duì)于心律失常的治療手段通過中藥配方實(shí)現(xiàn)心肌微循環(huán)，擴(kuò)張血管改善心律失常，治療效果顯著[5-6]。穿心蓮內(nèi)酯作為中藥提取物，具有多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，在多種疾病中發(fā)揮作用[7-8]。臨床對(duì)于中成藥緩解心律失常研究的選藥范圍小，本次研究首次以穿心蓮內(nèi)酯作為實(shí)驗(yàn)藥劑，通過建立多種模型，探討穿心蓮內(nèi)酯對(duì)不同原因?qū)е滦穆刹积R的作用機(jī)制，為心律失常藥物治療提供數(shù)據(jù)支持。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 2019年10月-2020年10月從江西省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心購買清潔級(jí)雄性大鼠90只（體質(zhì)量230～250 g），隨機(jī)分為9組，氯仿誘發(fā)心律失常組（A組，n=10）和氯仿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（B組，n=10）;腎上腺素誘發(fā)心律失常組（C組，n=10）和腎上腺素誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（D組，n=10）;氯化鈣誘發(fā)心律失常組（E組，n=10）和氯化鈣誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（F組，n=10）;烏頭堿誘發(fā)心律失常組（G組，n=10）和烏頭堿誘發(fā)心律失常并穿心蓮內(nèi)酯組（H組，n=10）;正常對(duì)照組（I組，n=10）。各組適應(yīng)喂養(yǎng)一個(gè)月后建立模型。麻醉實(shí)驗(yàn)符合一般動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理學(xué)原則。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)處理系統(tǒng)（正華生物儀器設(shè)備有限公司），恒速泵（益邦生物醫(yī)療公司），低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（麥科儀科技有限公司），可見分光光度計(jì)（菲勒儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 氯仿誘發(fā)心律失常模型 B組大鼠尾部靜脈勻速注射穿心蓮內(nèi)酯，將4 mL氯仿棉球放在倒置的600 mL燒杯內(nèi)，依次放入A、B組大鼠于該燒杯內(nèi)，每換1次大鼠加1 mL氯仿，大鼠吸入氯仿至呼吸停止即刻轉(zhuǎn)移至操作臺(tái)，打開大鼠胸腔，查看大鼠心室狀況，計(jì)算心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。

1.3.2 腎上腺素誘發(fā)心律失常模型 C、D組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后舌下靜脈注入腎上腺素（生產(chǎn)廠家：上海禾豐制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H31021062，規(guī)格：1 mL︰1 mg）40 μg/kg，

D組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯（生產(chǎn)廠家：重慶漢華制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字Z50020470，規(guī)格：50 mg/片），藥片在研缽中研碎，緩慢加入純化水，邊加邊研磨（藥片及純化水比例1︰1.5），加入0.05%維生素E抗氧，觀察記錄由腎上腺素引起的心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。

1.3.3 氯化鈣誘發(fā)心律失常 E、F組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后頸外靜脈注射3.5%氯化鈣注射液（生產(chǎn)廠家：國藥集團(tuán)容生制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H20065400，規(guī)格：10 mL︰0.3 g）120 mg/kg，F(xiàn)組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，查看大鼠心室狀況，計(jì)算心律失常出現(xiàn)時(shí)間及持續(xù)時(shí)間。

1.3.4 烏頭堿誘發(fā)心律失常模型 G、H組大鼠禁食12 h，麻醉并固定大鼠，針狀電極刺進(jìn)四肢和胸腔皮下，建模后采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)查看并記錄大鼠心電圖。0.5 h后舌下靜脈注射烏頭堿溶液（生產(chǎn)廠家：甘肅蘭藥藥業(yè)有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國藥準(zhǔn)字H62021137）2 μg/min，H組10 s內(nèi)快速靜脈注射穿心蓮內(nèi)酯，監(jiān)測心電圖變化，觀察記錄由烏頭堿引起的室性早搏（ventricularprematurebeat， VP）、室性心動(dòng)過速（ventriculartachycardia， VT）和室顫（ventricularfibrillation， VF）持續(xù)時(shí)間。

1.3.5 各組大鼠LDH、Ca²⁺水平 采集各組大鼠眼眶血液離心得到上清液，使用Ca²⁺測定試劑盒、LDH測定試劑盒測定各組大鼠血清中Ca²⁺、LDH水平，操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 21.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用χ²檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)氯仿所致大鼠心律失常的影響 與A組比較，B組大鼠心律失常出現(xiàn)時(shí)間延后，心律失常持續(xù)時(shí)間縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)腎上腺素所致大鼠心律失常的影響 與C組比較，D組大鼠心律失常出現(xiàn)時(shí)間顯著推遲，心律失常持續(xù)時(shí)間明顯縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

2.3 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)氯化鈣所致大鼠心律失常的影響 與E組比較，F(xiàn)組大鼠心律失常出現(xiàn)時(shí)間顯著推遲，心律失常持續(xù)時(shí)間也顯著縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

2.4 穿心蓮內(nèi)酯對(duì)烏頭堿所致大鼠心律失常的影響 G、H組注入烏頭堿即刻發(fā)生心律失常。與G組比較，H組VP、VT、VF均縮短，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

2.5 各組大鼠LDH、Ca²⁺水平比較 與I組比較，A、C、E、G組大鼠Ca²⁺、LDH水平均顯著升高（P<0.05）;B組與A組、D組與C組、F組與E組、H組與G組比較，血清中Ca²⁺、LDH水平均顯著降低（P<0.05）。見表6。

3 討論

心律失常包括室性早搏、室性心動(dòng)過速和心室顫動(dòng)。室性早搏是心臟興奮性過高，導(dǎo)致心室沖動(dòng)過早的室性收縮[9]。心律失常發(fā)展具有持續(xù)性，從心悸、早搏逐漸可發(fā)展為惡性心律失常，最終引起眩暈，且不同階段癥狀預(yù)后差異不大，并無直接的相關(guān)性[10]。室性心動(dòng)過速是心肌傳導(dǎo)纖維、心室肌等部位的快速性心律失常，頻率高于100次/min，有單形和多形室性心動(dòng)過速，單行室性心動(dòng)過速包括非持續(xù)性和持續(xù)性室性心動(dòng)過速[11-12]。室性心動(dòng)最終演變?yōu)槭翌潱鸹颊呒毙遭繹13]。心室顫動(dòng)表現(xiàn)為心室肌高頻率收縮致心臟暫停排血，大面積局部組織缺血[14]。研究證明，離子通道受阻與心律失常密切相關(guān)，建立動(dòng)物模型用于研究中藥抗心律失常具有特異性。氯仿進(jìn)入機(jī)體引起神經(jīng)麻痹，進(jìn)而影響離子通路[15]。腎上腺素促進(jìn)交感神經(jīng)沖動(dòng)，Ca²⁺離子通道開放，膜外離子內(nèi)流，心肌自律性提高，出現(xiàn)心律失常[16]。氯化鈣改變多種離子流向，Na⁺離子內(nèi)流改變?nèi)O化速率，引起Ca²⁺離子內(nèi)流，進(jìn)而促使心肌細(xì)胞鉀離子電導(dǎo)異常出現(xiàn)振蕩電位，最終導(dǎo)致心律失常[17]。烏頭堿促使細(xì)胞Na⁺離子通道打開，加速Na⁺離子內(nèi)流，加強(qiáng)心房傳導(dǎo)組織自律性，引起室性、室上性異位節(jié)律，等多種心律失常[18]。穿心蓮內(nèi)酯具有抗炎、抗菌效果，在心血管疾病治療中也具有使用價(jià)值[19]。

本實(shí)驗(yàn)首次以穿心蓮內(nèi)酯研究心律失常，在建立心律失常模型后，注射穿心蓮內(nèi)酯后大鼠心律失常發(fā)生時(shí)間推遲，持續(xù)時(shí)間減少，結(jié)果與李亞萍等[20]研究結(jié)果類似，表明穿心蓮內(nèi)酯與安神定志湯對(duì)氯仿、氯化鈣、腎上腺素和烏頭堿引起的心律失常具有對(duì)抗作用。有研究表明甘松提取物具有膜的穩(wěn)定作用，阻滯心肌鈣離子通道開放[21]，根據(jù)本實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠血清檢測結(jié)果，注射穿心蓮內(nèi)酯大鼠血清Ca²⁺離子水平和LDH明顯改善，可能與穿心蓮內(nèi)酯促進(jìn)離子通道開放有關(guān)，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體物質(zhì)代謝。引起心律失常的原因眾多，本實(shí)驗(yàn)首次選用穿心蓮內(nèi)酯對(duì)建模大鼠心律失常的影響，但并未建立較為新穎的心律失常模型，可根據(jù)心律失常致病原因做進(jìn)一步研究。

綜上所述，穿心蓮內(nèi)酯對(duì)心律失常具有拮抗作用，可以用于心律失常的治療，具有研究意義和治療價(jià)值。

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（收稿日期：2021-03-17） （本文編輯：姬思雨）