□ 徐騰洋 牛燦杰 朱 帥 鄭仕劍 盛華棟 浙江方圓檢測(cè)集團(tuán)股份有限公司

三氯生（TCS）和三氯卡班（TCC）是廣譜抗菌劑，抗菌劑機(jī)理主要是其既能夠作用于細(xì)菌的細(xì)胞壁[1]，阻礙細(xì)菌對(duì)于必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝入；又能夠穿透細(xì)胞壁進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部，使細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆變性，從而殺死細(xì)菌[2—4]。食品包裝紙由于和食品接觸，對(duì)其抗菌性要求較高，適當(dāng)?shù)南虬b紙中加入一定的抗菌劑，可以延長(zhǎng)食品保質(zhì)期。目前國(guó)內(nèi)關(guān)于三氯生和三氯卡班的檢測(cè)方法研究主要集中在化妝品、洗滌用品方面，對(duì)食品中三氯生和三氯卡班的檢測(cè)方法也有一定的研究，但關(guān)于食品接觸材料方面的研究較少，本文建立了食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的測(cè)定方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

三氯生、三氯卡班：美國(guó)Sigma公司。甲醇（色譜純），美國(guó)貝克（J.T.Baker）；乙腈（色譜純），美國(guó)貝克（J.T.Baker）；乙酸銨（分析純）廣州化學(xué)試劑廠。

LC—20AD 高 效 液 相 色 譜 儀（帶 二極管陣列檢測(cè)器），日本島津公司；高速冷凍離心機(jī)，美國(guó)Thermo 公司； 分 析 天 平（MS105DU）， 瑞 士METTLER TOLEDO 公 司； 超 聲 儀（DS—5510DTH），上海生析超聲儀器有限公司；Milli—Q 超純水制備器，美國(guó)Milipor 公司。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別稱取三氯生和三氯卡班10 mg放入10 mL 容量瓶中，加甲醇定容，配成1.0 mg/mL 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，配制成標(biāo)準(zhǔn)混合工作液，濃度分別為三氯生0.2、1.0、5.0、20.0 mg/L與100.0 mg/L，三氯卡班0.05、0.5、2.0、20.0 mg/L 與100.0 mg/L。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Accucore PFP（4.6 mm×10 mm，5 μm）；流速：1.0 mL/min；柱溫：35 ℃；進(jìn)樣量：20 μL；掃描波長(zhǎng)：190 ～400 nm。

1.2.3 樣品處理

稱取1 g 樣品于50 mL 離心管中，加入20 mL 乙腈，均質(zhì)1 min，再超聲10 min，10 000 r/min 離心，將上清液轉(zhuǎn)移至雞心瓶中，旋蒸，1 mL 乙腈定容，過0.22 μm 微孔濾膜，濾液上機(jī)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件優(yōu)化

2.1.1 波長(zhǎng)選擇

對(duì)三氯生和三氯卡班進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，吸收光譜如圖1。三氯卡班在205 nm 和264 nm 有特征吸收；三氯生在202 nm 和280 nm 有特征吸收?？紤]到200 ～210 nm 波長(zhǎng)下，有吸收的物質(zhì)較多，故選擇264 nm 做為三氯卡班的檢測(cè)波長(zhǎng)，280 nm 做為三氯生的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.1.2 色譜柱及色譜條件選擇

比 較WondaSil C18（250 mm×4.6 μm，5 μm），Eclipse XDB—C18柱（250 mm×4.6 μm，5 μm），Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）3 根色譜柱對(duì)目標(biāo)物的分離效果，發(fā)現(xiàn)對(duì)于前兩個(gè)色譜柱，改變甲醇乙腈和水的比例，三氯生和三氯卡班都無法完全分離。

而 采用Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）色譜柱，在甲醇水的比例在76 ∶24 的情況下，完全分離，見圖1，主要原因是三氯卡班和三氯生的結(jié)構(gòu)非常相似，都含有3 個(gè)氯和2 個(gè)苯環(huán)，極性相近，一般的C18色譜柱很難分離它們，Accucore PFP 固定相中的氟化基團(tuán)增強(qiáng)了對(duì)鹵代化合物的保留，從而較好分離三氯生和三氯卡班。

所以，最終采用的色譜柱為Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm），流動(dòng)相為甲醇∶水=76∶24。

2.2 樣品前處理過程優(yōu)化

三氯生和三氯卡班的脂溶性較好，在水中溶解性較小，采用甲醇作為提取試劑。

本實(shí)驗(yàn)研究C18柱、HLB 柱和NH2柱的凈化效果，從回收率來看，C18小柱和HLB 小柱的回收率都達(dá)到80%以上，NH2回收率較低。C18小柱的凈化效果更好，色譜圖上沒有干擾目標(biāo)物質(zhì)的雜峰，故選擇C18作為食品包裝紙中檢測(cè)三氯生和三氯卡班的凈化濃縮小柱。

圖1 采用Accucore PFP 時(shí)三氯生（TCS）和三氯卡班（TCC）色譜圖

2.3 方法學(xué)驗(yàn)證

2.3.1 線性范圍、檢出限

為繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，針對(duì)1.2.1 所配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液采用優(yōu)化后的條件進(jìn)行檢測(cè)。以峰面積為縱坐標(biāo)Y，目標(biāo)組分濃度為橫坐標(biāo)X，計(jì)算線性回歸方程，以3 倍信噪比（S/N=3）計(jì)算檢出限，結(jié)果見表1。

2.3.2 方法回收率和精密度

在包裝紙中加標(biāo)，TCS 的加標(biāo)水平 為0.04、0.4、1.0 mg/kg，TCC 的加標(biāo)水平為0.01、0.4、1.0 mg/kg，每個(gè)水平設(shè)6個(gè)平行，按照前述步驟處理，TCS 的回收率在80.2%～91.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.3%～4.5%，TCC 的回收率在87.3%～95.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.5%～2.1%?？傮w來說，回收較好，精密度較高，適用于一般樣品檢測(cè)。

表1 三氯生和三氯卡班的線性方程、線性范圍和相關(guān)系數(shù)及檢出限

3 結(jié)語(yǔ)

本文建立了食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的固相萃取結(jié)合高效液相色譜檢測(cè)方法，并初步探索了三氯生和三氯卡班的遷移規(guī)律。食品包裝紙樣品經(jīng)甲醇提取，C18柱富集凈化后， 通過Accucore PFP（10 mm×4.6 μm，2.6 μm）分 離，以甲醇和水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，采用二極管陣列檢測(cè)器定量。三氯生和三氯卡班分別在0.2 ～100 mg/L和0.05 ～100 mg/L 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r2）均為0.999，方法定量限分別為0.04 mg/kg 和0.01 mg/kg。3 個(gè)水平的平均加標(biāo)回收率為80.2%～90.6%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.5%～4.5%（n=6）。本方法具有良好的靈敏度、回收率和重復(fù)性，適用于食品包裝紙中三氯生和三氯卡班的測(cè)定。