李浩然，張玉倩，康 宇，曹 培，張志清

（河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050000）

蘭索拉唑[1-2]是繼奧美拉唑之后新一代的質(zhì)子泵抑制劑，其生物利用度和抑制胃酸分泌作用相較于奧美拉唑有明顯提高，主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、吻合口潰瘍、卓-艾綜合征和反流性食管炎等疾病治療[3-6]。蘭索拉唑腸溶膠囊口服易吸收，患者順應(yīng)性好，廣泛用于治療胃潰瘍等相關(guān)疾病。目前，我國(guó)除了日本武田的原研藥外，還有許多蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥，且國(guó)產(chǎn)的仿制藥尚未進(jìn)行仿制藥的質(zhì)量與療效一致性評(píng)價(jià)。

溶出行為是口服固體制劑質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)之一，口服固體制劑的吸收取決于藥物在胃腸道中的釋放和溶解，藥物的溶出對(duì)其在體內(nèi)的吸收有重要影響，可通過(guò)體外溶出試驗(yàn)預(yù)測(cè)其體內(nèi)行為[7]。因此，本實(shí)驗(yàn)考察了7個(gè)蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥在4種不同介質(zhì)中的溶出行為，并繪制溶出曲線(xiàn)，以f2相似因子法評(píng)價(jià)溶出曲線(xiàn)的相似性，旨在對(duì)蘭索拉唑腸溶膠囊國(guó)產(chǎn)仿制藥的體外溶出進(jìn)行一致性評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waterse2695高效液相色譜儀（美國(guó)Waters）；2489 UV/Vis檢測(cè)器（美國(guó)Waters）；CPA225D型電子分析天平（德國(guó)Sartorius）；ZRS-4型智能溶出試驗(yàn)儀（天津大學(xué)無(wú)線(xiàn)電廠(chǎng)）；pH 213型臺(tái)式酸度計(jì)（羅馬尼亞HANNA）。

1.2 藥品與試劑

蘭索拉唑?qū)φ掌罚ㄖ袊?guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：100709-201705）；蘭索拉唑腸溶膠囊[原研藥：天津武田（A廠(chǎng)家），批號(hào)0243A；仿制藥： B廠(chǎng)家，批號(hào)190202；C廠(chǎng)家，批號(hào)18120203；D廠(chǎng)家，批號(hào)190105； E廠(chǎng)家，批號(hào)AHKG04；F廠(chǎng)家，批號(hào)1190702；G廠(chǎng)家，批號(hào)20190312； H廠(chǎng)家，批號(hào)190702]。甲醇（賽默飛世爾，分析純，批號(hào)：195211）；濃鹽酸（康德化工，批號(hào)：20181106）；磷酸二氫鉀（天津永大，批號(hào)：YD20190712）；氫氧化鈉（北京益利，批號(hào)：20180217）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（73:27）；流速：1 ml/min；柱溫：30 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：285 nm；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 按2.1項(xiàng)下色譜條件，分別取流動(dòng)相溶液、蘭索拉唑?qū)φ掌啡芤杭肮┰嚻啡芤?0 μl測(cè)定，記錄色譜圖。本實(shí)驗(yàn)條件下，色譜峰分離良好，輔料對(duì)蘭索拉唑的測(cè)定無(wú)干擾，該方法專(zhuān)屬性良好，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 HPLC圖譜

2.2.2 線(xiàn)性試驗(yàn) 取蘭索拉唑?qū)φ掌芳s10 mg，精密稱(chēng)定，置入100 ml量瓶，用含0.01 mol/ml氫氧化鈉的流動(dòng)相溶液稀釋至刻度，得104.2 μg/ml對(duì)照品溶液，逐級(jí)稀釋?zhuān)渲茲舛确謩e為1.042，2.084，4.168，8.336，16.672，33.334 μg/ml系列對(duì)照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，濃度X（μg/ml）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線(xiàn)性回歸，得回歸方程Y=51 370X-5640.3（r2=0.999），蘭索拉唑在1.042～33.334 μg/ml濃度范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.2.3 加樣回收率試驗(yàn) 取含量已知的蘭索拉唑腸溶膠囊10粒，去除膠囊外殼后精密稱(chēng)定內(nèi)容物，將內(nèi)容物研磨成細(xì)粉，分別取適量細(xì)粉9份（約含對(duì)照品10 mg）精密稱(chēng)定，置入50 ml量瓶，流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻?yàn)V過(guò)。分別精密量取每份濾液4 ml，置入50 ml量瓶，然后精密加入200.6 μg/ml對(duì)照品溶液2，3.2，4 ml，流動(dòng)相稀釋至刻度，每個(gè)濃度制備3份，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，以加入量和測(cè)得量計(jì)算回收率，結(jié)果為100.17 %，100.32 %，99.93 %，RSD為0.40 %，0.37 %，0.67 %，加樣回收率良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 配制濃度為8.336 μg/ml對(duì)照品溶液，同日及連續(xù)3天分別連續(xù)測(cè)定5份該對(duì)照品溶液，記錄峰面積，并計(jì)算日內(nèi)精密度RSD為0.24 %，日間精密度RSD為0.61%，表明該方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 蘭索拉唑是苯并咪唑類(lèi)化合物，顯堿性，在酸性條件下易分解[8-9]，因此在溶出試驗(yàn)中從不同介質(zhì)取樣后需加入一定量的氫氧化鈉增加其穩(wěn)定性。以pH 4.5，pH 6.0和pH 6.8的磷酸鹽緩沖液分別配制濃度為8.336 μg/ml的對(duì)照品溶液，精密量取2 ml并加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml（n=6），放置0，1，2，3，5，7，9 h后按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，計(jì)算得RSD為0.59 %，0.69 %，0.38 %，表明蘭索拉唑在加入氫氧化鈉溶液后的pH 4.5，pH 6.0和pH 6.8磷酸鹽緩沖液中放置9 h穩(wěn)定性良好。

2.3 溶出度考察

2.3.1 不同介質(zhì)中的穩(wěn)定性考察 分別以pH 4.5，pH 6.0，pH 6.8磷酸鹽緩沖液為溶媒制備一定濃度的對(duì)照品溶液，將制備好的對(duì)照品溶液放置0，15，30，45，60 min后，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，考察其在不同介質(zhì)中的穩(wěn)定性，結(jié)果表明，蘭索拉唑在3種介質(zhì)中的穩(wěn)定性符合測(cè)定要求，因此pH 4.5，pH 6.8和pH 8.0的磷酸鹽緩沖液可作為蘭索拉唑腸溶膠囊的溶出介質(zhì)，見(jiàn)表1。

2.3.2 溶出介質(zhì)的制備 按表2量取試劑置入1000 ml量瓶，蒸餾水稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3.3 pH 1.2鹽酸溶液中溶出度考察 取蘭索拉唑腸溶膠囊放入轉(zhuǎn)籃，按溶出度與釋放度測(cè)定法（通則0931第一法 方法2）測(cè)定[10]（n=12），以37 ℃1000 ml pH 1.2鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，120 min時(shí)，取出轉(zhuǎn)籃，按2.1項(xiàng)下方法測(cè)定籃內(nèi)蘭索拉唑的剩余量，間接計(jì)算蘭索拉唑腸溶片在pH 1.2鹽酸溶液中的溶出度，繪制溶出曲線(xiàn)，結(jié)果表明，蘭索拉唑腸溶膠囊在pH 1.2鹽酸溶液中無(wú)溶出行為，見(jiàn)圖2。

表1 蘭索拉唑在不同pH溶出介質(zhì)中的穩(wěn)定性

表2 不同pH溶出介質(zhì)的制備

2.3.4 磷酸鹽緩沖液中溶出度考察 取蘭索拉唑腸溶膠囊放入轉(zhuǎn)籃（n=12），以37 ℃ 1000 ml pH 1.2鹽酸溶液為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，120 min時(shí)，將鹽酸溶液棄去，加入預(yù)熱至37 ℃的磷酸鹽緩沖液1000 ml（pH 4.5或pH 5.5或pH 6.0或 pH 6.4或pH 6.8），轉(zhuǎn)速不變，分別于5，10，15，20，30，45 min取溶液3 ml濾過(guò)，同時(shí)補(bǔ)充相同pH、溫度和體積的磷酸鹽緩沖液，精密量取續(xù)濾液2 ml，立即加入0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 ml，搖勻，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，記錄峰面積，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算藥物濃度，計(jì)算藥物溶出度并繪制藥物溶出曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖2。由結(jié)果可見(jiàn)，蘭索拉唑腸溶膠囊原研藥與仿制藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中有較快的溶出行為，15 min的溶出量達(dá)85 %以上；而在pH 5.5，pH 6.0和pH 6.4磷酸鹽緩沖液中仿制藥的溶出行為偏慢，且與原研藥有不同程度差異，在pH 4.5磷酸鹽緩沖液中仿制藥無(wú)溶出行為，原研藥僅有少量的藥物溶出。

圖2 蘭索拉唑腸溶膠囊在不同介質(zhì)中的溶出曲線(xiàn)

2.3.5 溶出曲線(xiàn)相似性比較 采用f2相似因子法比較溶出曲線(xiàn)的相似性[11]，當(dāng)f2≥50時(shí)，認(rèn)為兩條溶出曲線(xiàn)具有相似性，結(jié)果見(jiàn)表3。另外，當(dāng)原研藥和仿制藥在15 min內(nèi)的藥物溶出量≥85 %時(shí)，可認(rèn)為兩者溶出行為相似，無(wú)需進(jìn)行f2比較。本實(shí)驗(yàn)中，蘭索拉唑腸溶膠囊原研藥和仿制藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中15 min時(shí)的藥物溶出量在85 %以上，因此認(rèn)為該仿制藥與原研藥在pH 6.8磷酸鹽緩沖液中溶出行為一致。由結(jié)果可見(jiàn)，蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥在pH 1.2鹽酸溶液和pH 4.5磷酸鹽緩沖液中均無(wú)藥物釋放，與原研藥的溶出行為一致。在pH 5.5，pH 6.0和pH 6.4磷酸鹽緩沖液中僅有F廠(chǎng)家仿制藥的溶出曲線(xiàn)與原研藥相似，其余仿制藥與原研藥的溶出曲線(xiàn)均有較大差異。因此，在7個(gè)仿制藥中僅有F廠(chǎng)家的溶出行為與原研藥一致。

3 討論

pH 6.0磷酸鹽緩沖液能較好地區(qū)分不同廠(chǎng)家蘭索拉唑腸溶膠囊的溶出行為，仿制藥在pH 6.0磷酸鹽緩沖液的溶出量比原研藥少，溶出速率慢，可能與該制劑的輔料和制備工藝有關(guān)。原研藥在pH 6.0、pH 6.4和pH 6.8介質(zhì)中均能較快釋藥，而仿制藥在兩種介質(zhì)中的釋藥行為有較大差異，表明該仿制藥腸溶衣的臨界溶點(diǎn)可能接近或高于pH 6.0[12]，因此在pH 6.0介質(zhì)中該腸溶衣溶解慢或不溶解導(dǎo)致釋藥量減少。

表3 溶出曲線(xiàn)相似性比較結(jié)果

機(jī)體正常腸道環(huán)境一般為pH 6.8，但在胃酸分泌過(guò)多等不同疾病狀態(tài)下可能使部分腸道環(huán)境的pH降低[13]。因此，本實(shí)驗(yàn)以pH 5.5，pH 6.0，pH 6.4磷酸鹽緩沖液模擬不同人群的腸道環(huán)境。在不同介質(zhì)中蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥的釋藥量和釋藥速率與原研藥有不同程度的差異，表明該藥在同樣條件腸道中的釋藥行為也可能不同，可能是導(dǎo)致該仿制藥治療效果與原研藥存在差異的原因之一。因此，建議蘭索拉唑腸溶膠囊仿制藥廠(chǎng)家重視體外溶出行為在一致性研究中的重要作用，深入研究制劑工藝輔料應(yīng)用，早日達(dá)到一致性評(píng)價(jià)的制劑標(biāo)準(zhǔn)。