敬聰 丁向前 王君 鄒楊鴻 王志剛 余化霖 耿鑫

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是顱內(nèi)腫瘤中最常見的惡性腫瘤。神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中，膠質(zhì)瘤約占80%，目前最常見的治療方法是手術(shù)切除、放療、化療[1]。高級別惡性膠質(zhì)瘤在成人原發(fā)性腦腫瘤中最常見，通過外科手術(shù)、放化療等積極治療，1年和5年生存率分別為30%和13%[1]。膠質(zhì)母細胞瘤的侵襲程度最高，確診后患者僅有15個月左右的的中位生存期，5年生存率為也僅為6.8%[2]。而引起這個結(jié)果的原因是膠質(zhì)瘤細胞具有高度侵襲性，使得外科手術(shù)難以完整切除膠質(zhì)瘤腫瘤組織；同時，由于膠質(zhì)瘤的生物學特性復(fù)雜，對常規(guī)放、化療不敏感，導致治療效果極差，常容易復(fù)發(fā)[1]。手術(shù)切除后，大部分患者在手術(shù)切緣2～3 cm內(nèi)復(fù)發(fā)，因此，需要探索一些新的治療方法。通過對膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)及實驗，可以從從分子、基因等水平等揭示膠質(zhì)瘤的生物學特性。神經(jīng)瘤細胞體外培養(yǎng)技術(shù)在腫瘤研究方面具有很多獨特的優(yōu)勢，在神經(jīng)科學研究中占據(jù)重要地位。但神經(jīng)細胞體外培養(yǎng)條件要求高、難度極大又制約了其發(fā)展。因為膠質(zhì)細胞瘤具有高度異質(zhì)性，在腫瘤內(nèi)部的不同細胞以及腫瘤微環(huán)境之間具有復(fù)雜的相互作用，因此，我們需要找到一個最佳的培養(yǎng)條件，保持分子基因型和表型以及原始腫瘤在體外和體內(nèi)的異質(zhì)性。下面本文回顧常見膠質(zhì)瘤細胞體外培養(yǎng)技術(shù)及膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)在常用研究中的應(yīng)用作一綜述。

1 細胞來源

細胞培養(yǎng)為研究過程中維護細胞提供了體外環(huán)境，許多培養(yǎng)技術(shù)可用于腫瘤和非腫瘤細胞的生長和維護。選擇合適的細胞來源和體外試驗的細胞培養(yǎng)程序與試驗本身同樣重要[3]。

1.1 經(jīng)典細胞系 膠質(zhì)瘤的細胞多來自人類和大鼠膠質(zhì)瘤的細胞株，經(jīng)典的細胞系如U87MG、U251、U6和T98G等，培養(yǎng)在含有血清的培養(yǎng)基中，隨著傳代次數(shù)的增加，其細胞在表型和基因型上與原發(fā)性腫瘤存在差異。盡管血清培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞可以隨著傳代次數(shù)的增加顯示出潛在的致癌能力，但它卻不能反映親本腫瘤的表型[4]。許多目前可用的膠質(zhì)瘤細胞株缺乏與腫瘤類型、分級、位置、患者年齡等相關(guān)的臨床信息，因此難以將研究結(jié)果與患者病情和臨床病程相聯(lián)系[3]。由于這些原因，傳統(tǒng)建立的細胞系不能提供可靠的模型系統(tǒng)來了解膠質(zhì)瘤的機制和治療的相互作用。

1.2 患者來源的細胞系 由于膠質(zhì)瘤細胞原代培養(yǎng)因成功率較低，因此過去大多數(shù)研究人員未采用原代培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)技術(shù)的進步，如今，研究人員更喜歡從原代細胞培養(yǎng)，而不是使用已建立的細胞株，因為它們具有更高的生物學和表型相關(guān)性[3]，更適合用于侵襲性、敏感性等基礎(chǔ)實驗，其結(jié)果更能接近人體的真實情況，這是未來研究的細胞選擇趨勢。原代細胞通常來自于手術(shù)切換的患者標本。組織首先洗去多余的碎屑和血液，被機械碾碎，然后用胰酶和脫氧核糖核酶消化，經(jīng)過幾次洗滌和離心步驟后，消化的組織被滴定并通過細胞過濾器，最后，細胞通過離心、重新懸浮和培養(yǎng)在神經(jīng)基質(zhì)介質(zhì)中。原代細胞可以在空白的平板中作為非粘附性神經(jīng)球生長，也可以在層粘連蛋白或聚賴氨酸包被的平板中作為粘附細胞生長[4]。然而，隨著傳代數(shù)量的增加(20～30傳代)，培養(yǎng)的患者來源的膠質(zhì)瘤腫瘤細胞表現(xiàn)出顯著的基因組和轉(zhuǎn)錄變化[5]。另外，可以將源自患者的神經(jīng)膠質(zhì)瘤作為異種移植物直接移植到小鼠體內(nèi)，而不是保持培養(yǎng)瓶中，然后作為系列異種移植物來保持。這些方法受到某些人的青睞，因為這些條件可再現(xiàn)地保持原始腫瘤的組織病理學，基因組和表型特征[6]。

2 膠質(zhì)瘤細胞體外培養(yǎng)技術(shù)

傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)技術(shù)屬于二維(two-dimensional，2D)培養(yǎng)技術(shù)，因為其成本低，可操作性強而普及。但隨著研究的深入，研究這發(fā)現(xiàn)大多數(shù)細胞在正常生理狀態(tài)下是三維(three-dimensional，3D)結(jié)構(gòu)，且3D結(jié)構(gòu)的微環(huán)境較2D差異較大，所以隨著材料、技術(shù)的進步，3D細胞培養(yǎng)技術(shù)正逐步普及。

2.1 2D培養(yǎng)技術(shù) 單細胞懸浮培養(yǎng)是2D培養(yǎng)技術(shù)的一種，它是將離體組織塊通過物理法(金屬網(wǎng)擠壓和尖吸管吹打)或化學法(胰蛋白酶)或兩者結(jié)合，以分離出單個細胞，然后接種在培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。還有一種是利用新采集的膠質(zhì)瘤組織，將其附著在培養(yǎng)瓶內(nèi)，大約1～2 d后，膠質(zhì)瘤細胞會游離出來，然后再利用游離的膠質(zhì)瘤細胞進行培養(yǎng)[7]。膠質(zhì)瘤細胞最初采用懸浮培養(yǎng)法，然而，膠質(zhì)瘤細胞的特征并不是懸浮生存，也不是它增殖的必要條件。大部分細胞是貼壁生長。貼壁單層細胞有很多實驗優(yōu)勢，特別是在培養(yǎng)同質(zhì)性、成像方法、克隆繁殖/挑選、篩選和定量方面，從而克服了懸浮培養(yǎng)的一些固有限制。傳代培養(yǎng)就更簡單，一般將需要的細胞種植在培養(yǎng)瓶，待其達到需要的密度，再是使用胰蛋白酶吹打膠質(zhì)瘤細胞，然后根據(jù)研究需要將膠質(zhì)瘤細胞接種到對應(yīng)的培養(yǎng)器械中。

在此基礎(chǔ)上，加支持物進行培養(yǎng)、單細胞分離培養(yǎng)法、球體細胞培養(yǎng)法、懸浮培養(yǎng)方法等培養(yǎng)方法在也膠質(zhì)瘤細胞單層細胞培養(yǎng)上得到運用，如：加入支持物培養(yǎng)就是預(yù)先在培養(yǎng)器械中添加支持物，這樣是為了更好的進行實驗研究及觀察。爬片，就是為了做細胞免疫組織化學分析而設(shè)計的，其方法是預(yù)先在培養(yǎng)板上放一個小載玻片，然后在其上培養(yǎng)腫瘤細胞，待條件成熟后再取出、固定并染色的一系列過程。單細胞分離培養(yǎng)也稱克隆培養(yǎng)，我國研究者通過虹吸法將SHG-44單克隆化，建立了具有3種不同分化水平的膠質(zhì)瘤細胞系[8]。球形培養(yǎng)，是將生長成片狀的細胞移動到不容易附著的基底部，并且使細胞片卷曲生長成球狀。馮利強等[9]還運用懸浮培養(yǎng)法培養(yǎng)C6膠質(zhì)瘤細胞系中腦腫瘤干細胞，并認為該方法與其他方法培養(yǎng)的細胞在形態(tài)上無差別。

2.2 3D培養(yǎng)技術(shù) 盡管單層細胞培養(yǎng)現(xiàn)在應(yīng)用廣泛，但培養(yǎng)的細胞遺傳不穩(wěn)定；它是2D結(jié)構(gòu)，而人體是3D結(jié)構(gòu)。在細胞的生長、發(fā)育、分化中，細胞的微環(huán)境起著至關(guān)重要的作用，針對這些問題，研究人員開始嘗試使用3D系統(tǒng)培養(yǎng)細胞，如腫瘤衍生器官、有機多細胞球體、多細胞腫瘤球體或腫瘤衍生球體，以更好地展示膠質(zhì)瘤異質(zhì)性和微環(huán)境。此外，在細胞形態(tài)上，因為3D培養(yǎng)更能重現(xiàn)人腦微環(huán)境，所以通過3D培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)的細胞在形態(tài)、功能、生物學特性上更接近于體內(nèi)存活狀態(tài)。Wei等[10]研究顯示，與單層細胞培養(yǎng)相比，用3D系統(tǒng)培養(yǎng)的腫瘤細胞中干細胞相關(guān)基因和蛋白表達水平、侵襲能力、惡性膠質(zhì)瘤和治療耐藥均有所增加。盧虎生等[11]利用2D及3D培養(yǎng)分別對U251膠質(zhì)瘤細胞系進行培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過3D培養(yǎng)的U251細胞系增殖速度更快，增殖指數(shù)、細胞周期、免疫組化等結(jié)果更接近于臨床標本。所以，在3D培養(yǎng)中培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞更能反映出細胞本身的行為及特性[12]。Gomez-Roman等[13]利用2D和3D系統(tǒng)中培養(yǎng)出相同膠質(zhì)瘤細胞系，對放射敏感性的結(jié)果卻相反，3D系統(tǒng)培養(yǎng)的細胞對放射線敏感，而2D系統(tǒng)培養(yǎng)的細胞對放射線無反應(yīng)。這些結(jié)果為傳統(tǒng)二維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)的結(jié)果經(jīng)常未能預(yù)測臨床療效提供了潛在的解釋，而且這種現(xiàn)象也會導致不當和過度使用動物試驗。

然而，3D培養(yǎng)也有不足之處，如它不能100%模擬人體內(nèi)微環(huán)境、細胞生長到已成程度時營養(yǎng)缺乏等，但是這些問題現(xiàn)在我們已經(jīng)在慢慢解決。如生物打印技術(shù)的進步，使得我們現(xiàn)在可以進行復(fù)雜的多細胞3D環(huán)境組裝。Duarte等[14]利用生物打印將內(nèi)皮細胞、基質(zhì)細胞和永生化的神經(jīng)母細胞瘤細胞排列成膠質(zhì)瘤樣水凝膠，其具有獨特的空間特征模仿了人類大腦的解剖結(jié)構(gòu)。在腦類器官內(nèi)共培養(yǎng)腫瘤細胞會導致腫瘤形成和侵襲，其模式與患者的手術(shù)標本相似。從準確的解剖學模型上得的藥物和侵襲研究，但仍缺少生物學相互作用。

2.3 其他培養(yǎng)方法 將兩種或兩種以上的細胞一起培養(yǎng)，稱為共培養(yǎng)方法，不過其本質(zhì)也是單層細胞培養(yǎng)技術(shù)。李振業(yè)等[15]利用共培養(yǎng)體系，培養(yǎng)惡性膠質(zhì)瘤細胞和血管內(nèi)皮細胞研究CD、VEGFR-1基因，結(jié)果顯示該基因?qū)毎鸙EGF的表達及細胞增殖有抑制作用。另有將球狀細胞培養(yǎng)和單層培養(yǎng)相結(jié)合，以提高在無血清條件下的人膠質(zhì)瘤細胞系的衍生效率。所以體外共培養(yǎng)模型為現(xiàn)在不能解決的問題提供了一個獨特的思路。除了上述培養(yǎng)方法以外，還有研究人員將兩種及兩種以上的方法聯(lián)合應(yīng)用，如同時采用單層培養(yǎng)及3D培養(yǎng)。還有學者利用將水凝膠使用在體外培養(yǎng)體系中作為涂層材料或3D生長系統(tǒng)來模擬腫瘤微環(huán)境，較普通培養(yǎng)瓶效果明確。還有目前一些新的培養(yǎng)技術(shù)如人源腫瘤異種移植模型、迷你大腦模型、腦片技術(shù)等等。這些方法其本質(zhì)仍是上述培養(yǎng)技術(shù)，僅是利用很多新技術(shù)來改變膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)環(huán)境，不過這些新穎的模型可以更好地概括腫瘤動力學和微環(huán)境的相互作用，從而能夠更準確地了解膠質(zhì)瘤的生物學特性。

3 膠質(zhì)瘤細胞在各類研究中的應(yīng)用

3.1 藥物研究 膠質(zhì)瘤細胞對化療敏感性差，主要是因為目前尚缺乏敏感有效的化療治療藥物，而且由于血腦屏障及耐藥性的存在，使得膠質(zhì)瘤的治療效果相對較差[1]。因此我們需要新的藥物來治療膠質(zhì)瘤，這使細胞培養(yǎng)顯得尤其重要。

胡燕玲等[16]研究顯示，地塞米松可在G1到S轉(zhuǎn)折點阻滯C6 細胞周期，從而抑制細胞增殖、誘導細胞凋亡。Das等[17]通過對U87-MG細胞系研究，先使用地塞米松，再使用莫奈唑胺，膠質(zhì)瘤細胞系不會凋亡，從而指導我們在臨床治療膠質(zhì)瘤患者中，合理使用地塞米松。趙艦等[18]研究發(fā)現(xiàn)，百消安可以膠質(zhì)瘤細胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3的表達，從而抑制U87細胞系的增殖，促進其凋亡形成。

中藥是我國的傳統(tǒng)文化，中藥治療膠質(zhì)瘤也是目前的熱門研究方向。陳雪等[19]研究表明，五味子甲素通過下調(diào)CyclinD1蛋白表達水平、上調(diào)促凋亡因子Bax和Bcl-2表達水平而抑制C6細胞的生長。Liu等[20]對雷公藤的研究中發(fā)現(xiàn)，雷公藤紅素在U251、U87-MG和C6細胞系以及動物模型中可誘導G2/M期阻滯和細胞凋亡，增加自噬體形成，進一步研究顯示雷公藤通過激活ROS/JNK信號通路，阻斷Akt/mTOR信號通路，引起G2/M期阻滯，觸發(fā)細胞凋亡和自噬。吳海霞[21]在膠質(zhì)瘤動物和細胞模型研究發(fā)現(xiàn)，川芎揮發(fā)油聯(lián)合莫奈唑胺與莫奈唑胺單獨給藥相比，聯(lián)合用藥組的腫瘤抑制效果更好，而且抑瘤效果與川芎揮發(fā)油的濃度呈正相關(guān)。趙亞鵬等[22]對膠質(zhì)瘤細胞系T98G和LN18予以不同濃度的重樓皂苷Ⅱ處理，發(fā)現(xiàn)其可降低膠質(zhì)瘤的增殖及侵襲性，進一步研究發(fā)現(xiàn)其還能增加替莫唑胺對膠質(zhì)瘤的抑制。

3.2 放射敏感性研究 不同膠質(zhì)瘤細胞系特點不一樣，研究顯示T98和MO54細胞系對輻射敏感性完全相反[23]。Ostruszka等[24]研究發(fā)現(xiàn)，U251細胞系比D54細胞系在受到放射線時更敏感，存在這種差異的原因是P53基因是突變型還是野生型。Chen等[25]在靶向輻射增敏的研究中也運用了突變型和野生型P53兩個膠質(zhì)瘤細胞系，證明P53基因是膠質(zhì)瘤細胞系放射線敏感與否的關(guān)鍵因素。劉宇馳等[26]對U373細胞進行研究顯示，下調(diào)磷酸甘油酸激酶1(PGK1)，可以影響CIN、切絲蛋白1表達，從而使U373細胞的對放療更敏感。王冉冉等[27]研究顯示，通過對膠質(zhì)瘤U251和RR-U251細胞系進行研究發(fā)現(xiàn)，升高 TPM1的表達，可以明細提高膠質(zhì)瘤細胞的放射敏感性，提示TPM1可能是膠質(zhì)瘤放射敏感相關(guān)的潛在靶點。李文清等[28]研究顯示，對膠質(zhì)瘤U251細胞系給予放射治療，發(fā)現(xiàn)CDK7抑制劑THZ1具有降低細胞修復(fù)的能力，誘導細胞產(chǎn)生凋亡，增加放射敏感性。

3.3 免疫治療研究 目前，膠質(zhì)瘤的免疫治療是一大熱門，因膠質(zhì)瘤的自身生物學特性，即使在外周血中檢測到循環(huán)腫瘤細胞，但其幾乎不會轉(zhuǎn)移到顱外。進一步的研究證實外周環(huán)境對膠質(zhì)瘤細胞具有免疫作用，所以現(xiàn)在亟需明確其免疫學機制。Friese等[29]使用人和鼠的膠質(zhì)瘤細胞系來研究NK，γδT和CD8+T細胞的腫瘤免疫刺激腫瘤細胞表達，激活免疫受體NKG2D。在膠質(zhì)瘤細胞中，PD-L1高表達[30]。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，PD1/PD-L1信號傳導可以影響早期T細胞活化，抑制膠質(zhì)瘤細胞毒性、增生和促炎細胞因子的產(chǎn)生。由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的免疫反應(yīng)低，膠質(zhì)瘤與其他腫瘤相比在以PD-1為靶點治療的效果較差。同時，由于膠質(zhì)瘤的多樣性，不同膠質(zhì)瘤存在異質(zhì)性，導致微環(huán)境也具有差異性，也使得利用PD1/PD-L1的治療方法出現(xiàn)更多挑戰(zhàn)。單克隆抗體是腫瘤免疫治療的主要方向，mAbs具有誘發(fā)直接細胞殺滅和調(diào)節(jié)細胞免疫反應(yīng)的潛力，表皮生長因子受體 (EGFR) 的突變代表了膠質(zhì)瘤關(guān)鍵遺傳特征，直接針對 EGFR 的 mAb 被用作膠質(zhì)瘤中眾所周知的治療方法。

腫瘤疫苗也是免疫研究的一部分，因其能夠激勵宿主免疫系統(tǒng)識別和殺死腫瘤細胞，如膠質(zhì)瘤疫苗可以使用樹突細胞(Dendritic cells，DCs)制備，主要是因為DCs作為傳遞細胞，激活細胞毒性T細胞的抗腫瘤作用。陳興勝等[31]通過研究顯示，通過上調(diào)腦膠質(zhì)瘤細胞DCs中凝血酶敏感蛋白1的表達，可以抑制DCs的成熟，使其分泌的細胞因子具有免疫抑制作用。曾山等[32]將C6細胞、9L細胞及其裂解物作為免疫原來制備疫苗，用它來降低載瘤大鼠膠質(zhì)瘤組織的侵襲性，延長大鼠的生存期。Tang等[33]對具有免疫活性小鼠上的GL261腫瘤采用疫苗 IL15Rα聯(lián)合T細胞治療、雷帕霉素和塞來昔布治療，發(fā)現(xiàn)很好的抗腫瘤效果。

溶瘤病毒(oncolytic virus,OV)治療是近年來新型的具有特異性腫瘤治療方法，其基于病毒在癌細胞中的選擇性復(fù)制和隨后的破壞作用，其最初被認為是與免疫治療分開的一種治療策略，然而，溶瘤病毒感染引起的抗腫瘤免疫反應(yīng)模糊了這一區(qū)別[34]。由于血腦屏障的存在，導致化療無法達到滿意的效果，而OV由于其具有較小結(jié)構(gòu)，對于神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的治療具有獨特的優(yōu)勢。歐陽一彬等[35]利用膠質(zhì)瘤GL261細胞系體外實驗證實，重組溶瘤腺病毒Ad3-aLAC可抑制膠質(zhì)瘤細胞增殖，同時在體內(nèi)實驗顯示其可增強抗腫瘤的免疫反應(yīng)，為膠質(zhì)瘤的OV治療提供新的思路。

3.4 建立動物模型 動物模型在研究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機制、特征等方面有重要意義，而動物模型的建立同樣需要應(yīng)用膠質(zhì)瘤細胞的培養(yǎng)。汪柳旭等[36]在Balb/c裸鼠右側(cè)背部下方接種U87膠質(zhì)瘤細胞，建立鼠膠質(zhì)瘤載瘤模型，用于膠質(zhì)瘤治療方面的研究。Kim等[37]研究PD-1、抗TIM-3與放射治療的聯(lián)合治療效果，為免疫治療與放射治療的聯(lián)合治療提供了新的策略。雖然動物模型可以提供與人體十分接近的膠質(zhì)瘤生存的微環(huán)境，但是腫瘤細胞難以直接觀察和追蹤，造模價格通常十分昂貴，且缺乏可重復(fù)性。

3.5 其他研究中的應(yīng)用 除了上述研究外，神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)還廣泛用于其他研究領(lǐng)域，例如探索膠質(zhì)瘤細胞凋亡與侵襲轉(zhuǎn)移機制研究。Zhang等[38]使用原代培養(yǎng)的神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞和原代培養(yǎng)的星形細胞研究惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞與星形膠質(zhì)細胞之間的直接間隙連接，發(fā)現(xiàn)與膠質(zhì)瘤細胞的直接細胞耦合會導致星細胞的表型轉(zhuǎn)化，從而增加膠質(zhì)瘤對周圍組織的易感性。胡斌[39]通過研究對人腦膠質(zhì)瘤細胞U251發(fā)現(xiàn)，抑制PI3K/Akt通路，能增加膠質(zhì)瘤細胞的凋亡。江曉珍等[40]對膠質(zhì)瘤細胞株U87MG、U251研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細胞移動因子通過PI3K/Akt途徑抑制膠質(zhì)瘤細胞的凋亡。劉紀營等[41]對U87膠質(zhì)瘤細胞系研究發(fā)現(xiàn)，利用RNA技術(shù)下調(diào)膠質(zhì)瘤細胞的KIF20A表達，可以抑制其增殖、遷移及侵襲能力，誘導細胞周期G0/G1期阻滯，促進其凋亡形成。李梅等[42]首次發(fā)現(xiàn)光動力學療法對C6膠質(zhì)瘤細胞具有殺傷作用。還有一些如長鏈非編碼RNA，微小RNA等對膠質(zhì)瘤的治療或侵襲性機制的研究。還有一些未列出的研究，其都顯示了細胞培養(yǎng)技術(shù)在研究中的重要性。

神經(jīng)膠質(zhì)瘤因其獨特的侵襲性而困擾研究人員，為了延長膠質(zhì)瘤患者生存率，明確驅(qū)動遷移和侵襲的關(guān)鍵機制十分重要。體外方法是預(yù)測膠質(zhì)瘤細胞如何侵襲的重要手段，與體內(nèi)模型相比，更容易操作和復(fù)現(xiàn)，且成本較低。目前膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)方法眾多。目前最熱門的培養(yǎng)方法是3D培養(yǎng)技術(shù)，因其可以近似的模擬腦內(nèi)微環(huán)境，更準確的反映膠質(zhì)瘤細胞的生物學特性，更有效的尋找藥物治療靶點及藥物開發(fā)。膠質(zhì)瘤干細胞如今也是一個新的研究熱點，該研究未來可能稱為治療膠質(zhì)瘤的新的方向。相信隨著生物醫(yī)學工程技術(shù)的進步，在膠質(zhì)瘤細胞培養(yǎng)技術(shù)可以得到升級，也會應(yīng)用到一些目前未知的新的領(lǐng)域。

而且，選擇適當?shù)募毎岛图毎囵B(yǎng)條件對于保持神經(jīng)膠質(zhì)瘤腫瘤的侵襲行為至關(guān)重要。例如，神經(jīng)膠質(zhì)瘤中干細胞和非干細胞群體的組成受微環(huán)境影響并影響遷移潛力，因此以維持這些細胞群體的培養(yǎng)方式至關(guān)重要[43]。此外，患者來源神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞可以更好的顯示膠質(zhì)瘤的生物學特性，在研究腫瘤的藥物敏感性和反應(yīng)性時可能更有益。

使用體外測定的目的是在不顯著損害體內(nèi)環(huán)境的情況下平衡成本和可重復(fù)性，以更準確和有效地解決特定的生物學問題。只有當體外的培養(yǎng)體系與人體環(huán)境更相似時，我們針對膠質(zhì)瘤的治療方法的研究才能更加深入，且更具有針對性，且更加有效。因此，在選擇培養(yǎng)方法時，必須考慮其能多大程度上重建體內(nèi)環(huán)境，而且必須權(quán)衡其可重復(fù)性、難易程度和成本。