楊靜文，劉澤暢，陳 培，杜偉棟，范效蘭，石 銘，劉玉梅*

（新疆大學(xué)化工學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830046）

啤酒花（Humulus lupulus.L）又名蛇麻花，是?？拼舐閬喛迫劜輰僦参?，其球果是重要的啤酒原料，可賦予啤酒抑菌、防腐和增強(qiáng)泡持性等功效，同時(shí)為啤酒提供令人愉悅的苦味和香氣特征[1]。此外，啤酒花還具有較強(qiáng)的生理活性，國(guó)內(nèi)外對(duì)于啤酒花藥用價(jià)值的研究歷史悠久[2]，臨床證實(shí)其具有良好的鎮(zhèn)靜和促進(jìn)睡眠的特性[3]；德國(guó)草藥委員會(huì)于1984年將啤酒花列為治療焦慮和睡眠障礙等的有效植物[4]。我國(guó)明代《本草綱目》中就記載了啤酒花具有良好的食療作用，認(rèn)為其具有防治癆病、化痰止咳等功效。

啤酒花的主要成分包括軟/硬樹脂、精油、蛋白質(zhì)、多酚、蠟質(zhì)、纖維素和氨基酸等；其中軟樹脂是啤酒花中最主要的苦味組分[5]，主要由α-酸和β-酸組成[6]。α-酸是啤酒花中最主要的成分，也是衡量啤酒花品種和品質(zhì)的重要依據(jù)。α-酸根據(jù)酰基側(cè)鏈的不同，主要存在3 種同系物，分別為合葎草酮、正葎草酮和加葎草酮。在麥汁煮沸過程中，α-酸會(huì)異構(gòu)化為水溶性更強(qiáng)的異α-酸，其對(duì)啤酒的苦味貢獻(xiàn)率約占80%左右。

與α-酸相同，β-酸同樣存在3 種主要同系物：合蛇麻酮、正蛇麻酮和加蛇麻酮，結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 β-酸3 種主要同系物的結(jié)構(gòu)Fig.1 Chemical structures of β-acid homologues

與α-酸相比，β-酸在分子結(jié)構(gòu)上增加了一個(gè)異戊烯基，水溶性較差；同時(shí)由于β-酸結(jié)構(gòu)中的芳香環(huán)上不存在叔醇基團(tuán)，不能發(fā)生類似α-酸的異構(gòu)化反應(yīng)，被認(rèn)為對(duì)啤酒的苦味沒有貢獻(xiàn)[7-8]，因此β-酸往往作為副產(chǎn)物從啤酒花中分離出來。但大量研究結(jié)果表明，β-酸具有抑菌、防腐、抗抑郁等生物活性，其中抑菌防腐性能主要是由于β-酸中存在的β-三酮基團(tuán)具有抑菌作用，可以影響菌類細(xì)胞壁的離子通透性[9]。Larson等[10]的研究結(jié)果表明，與α-酸及其衍生物相比，β-酸及其衍生物的抑菌活性更強(qiáng)；Simpson等[11]的研究進(jìn)一步表明β-酸對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制作用是α-酸的兩倍。已有研究結(jié)果表明，β-酸具有廣譜抑菌性能，其在抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、牛鏈球菌等革蘭氏陰/陽性菌方面均體現(xiàn)出良好的性能[12-13]。而抗氧化活性方面的研究也發(fā)現(xiàn)，β-酸對(duì)過氧化自由基和羥自由基均具有較強(qiáng)的清除能力[14-15]；Sbardella等[16]的研究還證實(shí)，β-酸對(duì)肉類具有較好的保鮮功效，可顯著降低肉制品的脂質(zhì)過氧化。本課題組前期對(duì)啤酒花中活性成分的抗氧化活性進(jìn)行研究也發(fā)現(xiàn)，不同品種啤酒花的β-酸提取物在抗氧化活性上存在差異性[17]，這可能正是不同品種啤酒花中β-酸3 種同系物的比例存在較大差異導(dǎo)致的。

盡管β-酸的3 種同系物結(jié)構(gòu)類似，但在活性上存在一定的差異[18]。例如，Schulz等[19]的研究結(jié)果表明，對(duì)標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量（60 kg）的人而言，合蛇麻酮、正蛇麻酮和加蛇麻酮作為膳食補(bǔ)充劑的推薦最大日服用劑量分別為9.3、7.3 mg和2.3 mg。相較于α-酸，人們對(duì)β-酸的研究較少[20]；同時(shí)由于大量獲取β-酸同系物單體的難度較大，因此無論是從啤酒釀造還是從生理活性利用方面，人們往往將其作為一個(gè)整體進(jìn)行評(píng)價(jià)，而對(duì)于β-酸同系物之間活性差異的相關(guān)研究鮮見報(bào)道。對(duì)于β-酸的制備，目前較為成熟的方法是利用α-酸與β-酸的酸性差異，通過對(duì)啤酒花浸膏進(jìn)行分離來實(shí)現(xiàn)，然而該方法只能獲得β-酸3 種同系物的混合體；而進(jìn)一步分離β-酸同系物，現(xiàn)行方法是利用制備型液相色譜來完成[21-22]，然而該方法儀器昂貴，且利用該方法無法獲取大量的β-酸同系物單體，因此在很大程度上限制了后續(xù)研究和實(shí)際應(yīng)用。

本課題組以β-酸為研究對(duì)象已進(jìn)行了一定的研究報(bào)道[17,23]。由于不同品種啤酒花所含β-酸同系物的組成差異較大，因此本研究在前期工作的基礎(chǔ)上，對(duì)β-酸同系物進(jìn)行了初步分離，得到不同比例β-酸同系物樣品，進(jìn)而采用不同的抗氧化評(píng)價(jià)方法和抑菌實(shí)驗(yàn)，對(duì)β-酸同系物的活性進(jìn)行比較研究，以期為啤酒花品種選育和β-酸的開發(fā)應(yīng)用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 菌株、材料與試劑

金黃色葡萄球菌（26001）和大腸桿菌（44825）由烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心提供。

啤酒花浸膏標(biāo)準(zhǔn)品（ICE-3） 美國(guó)釀造化學(xué)家協(xié)會(huì)；啤酒花浸膏 新疆三寶樂農(nóng)業(yè)科技有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH） 美國(guó)Sigma-Aldrich公司；蘆丁、β-胡蘿卜素中國(guó)藥品生物制品檢定所；黃嘌呤氧化酶 上海源葉生物科技有限公司；別嘌呤醇 北京恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司；抗壞血酸 天津市博迪化工有限公司；甲醇為國(guó)產(chǎn)色譜純，其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

LB固體培養(yǎng)基自行配制（10 g/L蛋白胨、10 g/L瓊脂粉、5 g/L酵母浸粉、10 g/L的NaCl），于120 ℃高壓滅菌20 min，供抑菌實(shí)驗(yàn)使用。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀、色譜柱為Hypersil ODS2（150 mm×4.6 mm，4.5 μm） 大連依利特分析儀器有限公司；UV-5300PC紫外-可見分光光度計(jì) 上海元析儀器有限公司；WGZ-XT濁度儀 杭州奇威儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 高效液相色譜分析條件

流動(dòng)相為V（甲醇）∶V（水）∶V（體積分?jǐn)?shù)85%磷酸）＝85∶15∶0.25；流速0.8 mL/min；柱溫室溫；紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)314 nm；進(jìn)樣量10 μL，采用啤酒花浸膏國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物，通過峰面積外標(biāo)法定量分析。

1.3.2β-酸樣品分離提取及初步純化

β-酸的分離提取方法參考本課題組前期研究[24]。稱取20 g啤酒花浸膏，加入10 mL無水乙醇，在50 ℃水浴中攪拌至溶液澄清透明；邊攪拌邊向其中滴加質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的KOH溶液，調(diào)節(jié)pH值至13～14；再加約200 mL蒸餾水，充分?jǐn)嚢韬笤俅我?0% KOH溶液調(diào)節(jié)體系的pH值至13～14。將溶液靜置30 min，真空抽濾除去油狀物，得到澄清液體。上述過濾液在N2保護(hù)下攪拌，緩慢通入CO2，當(dāng)pH值達(dá)到8.2～8.5時(shí)停止通氣，繼續(xù)攪拌約1 h，靜置30 min，真空抽濾得白色粉末狀固體即為β-酸粗提物，質(zhì)量分?jǐn)?shù)高于80%，于-18 ℃下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 不同比例β-酸同系物樣品的分離

稱取約5 g的β-酸粗提物，預(yù)實(shí)驗(yàn)在考察溶劑、結(jié)晶溫度、pH值對(duì)β-酸重結(jié)晶產(chǎn)物中3 種同系物比例影響的基礎(chǔ)上，對(duì)β-酸粗提物進(jìn)行了進(jìn)一步的分離。獲得不同比例β-酸同系物樣品條件簡(jiǎn)述如下：1）合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮的質(zhì)量比為1∶1。向β-酸粗提物樣品中逐滴滴加體積分?jǐn)?shù)90%甲醇溶液，體系保持在50 ℃至完全溶解，在室溫下（25 ℃）重結(jié)晶，重復(fù)上述過程3 次得產(chǎn)物1，記為S1∶1。2）合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮質(zhì)量比為10∶1。向產(chǎn)物1中逐滴滴加體積分?jǐn)?shù)90%甲醇溶液，體系保持在50 ℃至完全溶解，在4 ℃下重結(jié)晶，重復(fù)上述過程3 次得產(chǎn)物2，記為S10∶1。3）合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮質(zhì)量比為5∶1。由產(chǎn)物1與產(chǎn)物2按質(zhì)量比5∶22混合得產(chǎn)物3，記為S5∶1。4）合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮質(zhì)量比為1∶4。在室溫下逐滴向產(chǎn)物1中滴加體積分?jǐn)?shù)90%甲醇溶液，至樣品完全溶解，向該溶液中緩慢通入CO2（1 mL/min），至溶液pH值約為6～7左右，停止通氣，過濾得產(chǎn)物4，記為S1∶4。5）合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮質(zhì)量比為20∶1。逐滴向β-酸粗提物中滴加正己烷，體系保持在50 ℃至β-酸完全溶解，在4 ℃下重結(jié)晶，重復(fù)上述過程3 次得產(chǎn)物5，記為S20∶1。

1.3.4 抗氧化活性評(píng)價(jià)

1.3.4.1 抑制黃嘌呤氧化酶活性的測(cè)定

參考文獻(xiàn)[25]的方法。精確移取3.75 mL磷酸鹽緩沖溶液（50 mmol/L的KH2PO4/K2HPO4，pH 7.5），一式四份。一份加入2 mL蒸餾水記作0組；一份加入1 mL的18 mU/mL黃嘌呤氧化酶和1 mL蒸餾水，記作E組；一份加入1 mL的β-酸系列樣品溶液和1 mL蒸餾水，記作S組；最后一份加入1 mL的β-酸系列樣品溶液和1 mL的18 mU/mL黃嘌呤氧化酶，記作E＋S組。將4 組體系均置于37 ℃水浴中恒溫保持15 min，水浴結(jié)束加入3 mL黃嘌呤啟動(dòng)反應(yīng)，混勻后立即在290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，記作0時(shí)刻，4 組體系的吸光度分別記為A0、AE0、AS0、A（E＋S）0。然后將4 組體系放入25 ℃水浴，以100 r/min振蕩反應(yīng)30 min，反應(yīng)結(jié)束后加入1 mL 1 mol/L鹽酸終止反應(yīng)，再次測(cè)定吸光度，記作30時(shí)刻，4 組體系的吸光度分別記為A30、AE30、AS30、A（E+S）30。根據(jù)公式（1）計(jì)算不同質(zhì)量濃度的β-酸系列樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制率。

1.3.4.2 DPPH自由基清除能力測(cè)定

參考文獻(xiàn)[26]的方法，以蘆丁作為對(duì)照，分別考察不同質(zhì)量濃度β-酸系列樣品的DPPH自由基清除率，按公式（2）進(jìn)行計(jì)算。

式中：As為加入樣品時(shí)的吸光度；Ab為未加樣品時(shí)的吸光度。

1.3.4.3 ·OH清除能力測(cè)定

β-酸系列樣品的·OH清除能力采用鄰二氮菲/Fe2＋氧化法進(jìn)行評(píng)價(jià)[27]，以蘆丁作為對(duì)照，以1 mL 體積分?jǐn)?shù)0.01%的H2O2和1 mL蒸餾水代替2 mLβ-酸樣品測(cè)得未損傷管吸光度，以2 mL蒸餾水代替2 mLβ-酸樣品測(cè)得損傷管的吸光度。根據(jù)公式（3）計(jì)算不同質(zhì)量濃度β-酸系列樣品·OH清除率。

式中：A2是加入樣品時(shí)溶液的吸光度；A1是以蒸餾水代替β-酸樣品時(shí)溶液的吸光度；A0是以蒸餾水代替β-酸樣品和體積分?jǐn)?shù)0.01% H2O2時(shí)溶液的吸光度。

1.3.4.4 總抗氧化能力評(píng)價(jià)

β-酸系列樣品的總抗氧化能力采用β-胡蘿卜素-亞油酸乳化液法進(jìn)行評(píng)價(jià)[17]，以蘆丁作為對(duì)照，根據(jù)公式（4）計(jì)算不同樣品的抗氧化指數(shù)（antioxidant activity index，AAI），評(píng)價(jià)樣品的總抗氧化能力。

式中：ASt和ACt分別表示120 min時(shí)樣品和蒸餾水（空白）的吸光度；AS0和AC0分別表示起始時(shí)樣品與空白的吸光度。

1.3.5 抑菌活性評(píng)價(jià)

1.3.5.1 菌懸液的配制

金黃色葡萄球菌和大腸桿菌懸濁液的配制參考前期工作[28]，配制濃度為108～109CFU/mL的菌懸液，備用。

1.3.5.2 最小抑菌濃度的測(cè)定

采用濾紙片法[29]和二倍稀釋法[30]，確定β-酸系列樣品的最小抑菌濃度。利用二倍稀釋法分別配制質(zhì)量濃度為2.00、5.00、10.00、20.00、40.00、80.00 mg/L和160.00 mg/L不同比例β-酸同系物樣品的甲醇溶液。將5.00 μL的樣品溶液滴于直徑為6 mm的圓形濾紙片上，待溶劑揮發(fā)后間隔一定距離貼在LB培養(yǎng)基上。陽性對(duì)照為160.00 mg/L（與樣品最大質(zhì)量濃度相同）的阿莫西林水溶液，以及75%乙醇溶液；陰性對(duì)照為甲醇和無菌水。將上述LB培養(yǎng)基置于培養(yǎng)箱中，在37 ℃下培養(yǎng)24 h后，以十字交叉法測(cè)量各樣品對(duì)兩個(gè)菌種的抑菌圈直徑，抑菌圈直徑大于6.5 mm時(shí)認(rèn)為樣品對(duì)菌種有抑制作用。

1.4 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用Origin 8.5或Excel軟件處理，通過方差分析和鄧肯氏多重差異分析法分析顯著性，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示?？寡趸钚缘难芯恐?，比較相鄰樣品之間的半數(shù)清除率（half maximal inhibitory concentration，IC50），當(dāng)P＜0.01時(shí)，即存在極顯著性差異，記為“＜＜或＞＞”；0.05＜P＜0.01時(shí)，即存在顯著性差異，記為“＜或＞”；P＞0.05時(shí)，即不存在顯著性差異，記為“≈”。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同比例β-酸同系物樣品的分離

由于啤酒花中加蛇麻酮在β-酸中的相對(duì)含量較為恒定，同時(shí)正蛇麻酮與加蛇麻酮的分離難度較大，因此通常將正蛇麻酮和加蛇麻酮看作一個(gè)整體進(jìn)行研究[31-32]。圖2為啤酒花浸膏標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)用啤酒花浸膏、β-酸粗提物，以及樣品S1∶4、S1∶1、S5∶1、S10∶1和S20∶1的液相色譜圖；其中，啤酒花浸膏標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)用啤酒花浸膏以及β-酸粗提物各組分的相對(duì)含量見表1。研究結(jié)果表明，在β-酸同系物樣品分離過程中，以體積分?jǐn)?shù)90%甲醇溶液作為溶劑進(jìn)行提取分離時(shí)，當(dāng)結(jié)晶溫度由25 ℃降至4 ℃，β-酸粗提物重結(jié)晶后S1∶1比S10∶1中合蛇麻酮的相對(duì)含量明顯升高，證實(shí)合蛇麻酮的溶解度小于正蛇麻酮＋加蛇麻酮；當(dāng)以正己烷作為溶劑進(jìn)行提取分離時(shí)，β-酸粗提物重結(jié)晶后合蛇麻酮（S20∶1）的相對(duì)含量較體積分?jǐn)?shù)90%甲醇提取分離樣品（S10∶1）相對(duì)含量明顯升高，由于正己烷對(duì)含有β-酸的軟樹脂具有更好的溶解度，因此該結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)合蛇麻酮的溶解度小于正蛇麻酮＋加蛇麻酮；而當(dāng)在合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮質(zhì)量比為1∶1的體積分?jǐn)?shù)90%甲醇溶液中通入CO2至pH值約為6～7左右時(shí)，沉淀物中正蛇麻酮＋加蛇麻酮的相對(duì)含量明顯提高，結(jié)果表明該組分的酸性強(qiáng)于合蛇麻酮。

圖2 樣品的高效液相色譜圖Fig.2 High performance liquid chromatograms of β-acid samples

表1 酒花浸膏標(biāo)準(zhǔn)品、實(shí)驗(yàn)用啤酒花浸膏和β-酸粗提物中各組分的相對(duì)含量Table 1 β-Acid composition of hops extract standard, hops extract used for this experiment and crude β-acid extract%

2.2 抗氧化活性評(píng)價(jià)

2.2.1 不同比例β-酸同系物對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制作用

黃嘌呤氧化酶是人體內(nèi)核酸分解代謝中的重要組分，能催化（次）黃嘌呤產(chǎn)生尿酸[33]，同時(shí)代謝產(chǎn)物會(huì)引起氧化應(yīng)激[34]，兩者都是導(dǎo)致痛風(fēng)的重要因素[35]。目前臨床治療痛風(fēng)的藥物主要有別嘌呤醇[36]、秋水仙素[37]、半胱氨酸[38]等。但這些藥物具有較強(qiáng)的毒副作用，因此尋找高效低毒的新型抑制劑備受關(guān)注[39]。由圖3可知，β-酸對(duì)黃嘌呤氧化酶的活性具有一定的抑制作用，隨著質(zhì)量濃度的增加，所有樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性抑制率呈明顯上升趨勢(shì)，且β-酸同系物的比例顯著明顯影響樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制能力。由圖3可知，幾種β-酸同系物樣品抑制黃嘌呤氧化酶的IC50依次為S1∶4（0.50 mg/mL）＜S1∶1（0.53 mg/mL）＜S5∶1（0.65 mg/mL）≈S20∶1（0.63 mg/mL）＜S10∶1（0.94 mg/mL），即隨著正蛇麻酮＋加蛇麻酮比例的下降抑制能力總體逐漸減小，表明正蛇麻酮＋加蛇麻酮對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制能力高于合蛇麻酮。盡管S1∶4樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性抑制能力明顯高于其他樣品，但與陽性對(duì)照品別嘌呤醇相比活性明顯較差。Mir等[40]以十六烷基三甲基溴化銨為例，研究同系物對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制作用，結(jié)果表明，同系物的分子鏈長(zhǎng)短、分子質(zhì)量會(huì)顯著影響其與黃嘌呤氧化酶的結(jié)合，進(jìn)而影響其抑制活性；柳高[41]對(duì)B族維生素對(duì)小鼠尿酸水平影響的研究結(jié)果也證明B族維生素同系物之間在抑制黃嘌呤氧化酶上存在顯著性差異，上述研究均與本研究結(jié)果相似。

圖3 不同比例β-酸同系物樣品對(duì)黃嘌呤氧化酶活性的抑制率Fig.3 Inhibitory effect of β-acid homologue mixtures with different ratios on xanthine oxidase activity

2.2.2 不同比例β-酸同系物對(duì)DPPH自由基清除能力的影響

圖4 不同比例β-酸同系物樣品對(duì)DPPH自由基的清除率Fig.4 DPPH radical scavenging rates of β-acid samples with different ratios of homologues

由圖4可知，β-酸對(duì)DPPH自由基具有一定的清除能力，隨著質(zhì)量濃度的增加，所有樣品對(duì)DPPH自由基的清除率均呈上升趨勢(shì)，且β-酸同系物的比例明顯影響樣品對(duì)DPPH自由基的清除能力。β-酸同系物樣品清除DPPH自由基的IC50依次為S1∶4（0.033 mg/mL）＜S5∶1（0.042 mg/mL）＜S1∶1（0.054 mg/mL）≈S20∶1（0.057 mg/mL）＜S10∶1（0.077 mg/mL），清除能力均低于陽性對(duì)照品蘆?。?.015 mg/mL）。與抑制黃嘌呤氧化酶活性類似，正蛇麻酮＋加蛇麻酮比例較高的樣品S1∶4清除DPPH自由基的能力較強(qiáng)。Ma Yongkai等[42]在研究抗氧化肽同系物的抗氧化活性過程中發(fā)現(xiàn)，抗氧化肽清除DPPH自由基的能力不僅與氨基酸的組成和關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)有關(guān)，而且還與抗氧化肽的空間構(gòu)型以及同系物分子質(zhì)量有關(guān)，表明同系物之間在清除DPPH自由基能力上存在差異，這與本研究結(jié)果類似。

2.2.3 不同比例β-酸同系物對(duì)·OH清除能力的影響

圖5 不同比例β-酸同系物樣品對(duì)·OH的清除率Fig.5 OH radical scavenging rates of β-acid samples with different ratios of homologues

由圖5可知，β-酸也具有較好的·OH清除能力。隨著質(zhì)量濃度的增加，所有樣品對(duì)·OH的清除率均呈上升趨勢(shì)，且β-酸同系物的比例與·OH的清除能力也呈現(xiàn)一定相關(guān)性。5 種不同比例β-酸同系物樣品清除·OH的IC50依次為S1∶4（0.52 mg/mL）＜S5∶1（0.61 mg/mL）≈S10∶1（0.64 mg/mL）＜S1∶1（0.89 mg/mL）≈S20∶1（0.91 mg/mL），但清除能力均明顯小于陽性對(duì)照樣品蘆丁。與前述結(jié)果類似，正蛇麻酮＋加蛇麻酮比例較高的樣品S1∶4樣品清除活性也是最強(qiáng)的，表明正蛇麻酮＋加蛇麻酮對(duì)·OH的清除能力強(qiáng)于合蛇麻酮。Yeung等[43]在對(duì)甲酚類化合物抗氧化性能的研究過程中發(fā)現(xiàn)，甲酚類同系物之間在清除·OH和超氧化物等的能力上也存在明顯差別，與本研究結(jié)果類似。

2.2.4 不同比例β-酸同系物的總抗氧化活性

由圖6可知，β-酸在胡蘿卜素-亞油酸乳化體系中具有較好的總抗氧化能力，隨著質(zhì)量濃度的增加，所有樣品的AAI均呈上升趨勢(shì)，且β-酸同系物的比例對(duì)樣品的總抗氧化能力具有明顯影響。5 種樣品的總抗氧化活性達(dá)到50%時(shí)對(duì)應(yīng)的樣品質(zhì)量濃度依次為S1∶4（0.43 mg/mL）＜S20∶1（1.24 mg/mL）≈S5∶1（1.32 mg/mL）＜S1∶1（1.74 mg/mL）＜S10∶1（1.90 mg/mL），與陽性對(duì)照蘆?。?.623 mg/mL）相比，S1∶4樣品的總抗氧化能力更高，且S1∶4樣品抗氧化活性要明顯好于其他比例的樣品。該結(jié)果與前述各抗氧化評(píng)價(jià)體系中得出的正蛇麻酮＋加蛇麻酮的抗氧化能力強(qiáng)于合蛇麻酮的結(jié)果一致。

圖6 不同比例β-酸同系物樣品的總抗氧化活性Fig.6 Total antioxidant activity of β-acid samples with different ratios of homologues

2.3 不同比例β-酸同系物的抑菌活性

由表2可以看出，不同比例β-酸同系物樣品對(duì)所測(cè)試的2 種菌株均具有良好的抑菌活性，而空白溶液（甲醇、無菌水）對(duì)兩種菌株均無抑菌作用，陽性對(duì)照160.00 mg/L的阿莫西林溶液對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為（16.9±0.4）mm和（15.7±0.3）mm。

表2 不同比例β-酸同系物樣品的抑菌圈直徑Table 2 Diameter of bacteriostatic zone of β-acid samples with different ratios of homologuesmm

由表2可知，S1∶4對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為5.00 mg/L，其余樣品的最小抑菌濃度均為10.00 mg/L。但隨著樣品的質(zhì)量濃度增大，合蛇麻酮比例較高的樣品S10∶1和S20∶1的抑菌活性增加明顯，且在160.00 mg/L下，S10∶1的抑菌圈直徑與同質(zhì)量濃度的陽性對(duì)照阿莫西林對(duì)金黃色葡萄球菌的抑制能力無顯著差異（P＞0.05）。對(duì)于大腸桿菌而言，所有樣品的最小抑菌濃度均為10.00 mg/L；當(dāng)樣品質(zhì)量濃度為160.00 mg/L時(shí)，除S1∶4樣品外，其他幾種樣品對(duì)大腸桿菌的抑菌圈直徑均與同質(zhì)量濃度的陽性對(duì)照阿莫西林相當(dāng)，甚至更好，同樣說明合蛇麻酮比例的提高對(duì)抑制大腸桿菌生長(zhǎng)更為有利。Bocquet等[32]研究了合葎草酮與正葎草酮＋加葎草酮和合蛇麻酮與正蛇麻酮＋加蛇麻酮對(duì)小麥葉枯病菌（Zymoseptoria tritic）的抑制效果，結(jié)果表明合葎草酮和合蛇麻酮的IC50均小于對(duì)應(yīng)的正葎草酮＋加葎草酮/蛇麻酮組分，因此推測(cè)合葎草酮/蛇麻酮的抗真菌活性較強(qiáng)；但該實(shí)驗(yàn)中合蛇麻酮的半數(shù)抑菌濃度為660 mg/L，質(zhì)量濃度遠(yuǎn)高于本研究，證明β-酸系列組分對(duì)細(xì)菌的抑制活性遠(yuǎn)高于真菌。此外，也有研究發(fā)現(xiàn)，青霉素在質(zhì)量濃度為10 g/L時(shí)，對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌圈直徑分別為24.0 mm和34.7 mm[44]，但其質(zhì)量濃度約高于本實(shí)驗(yàn)100 倍。因此，作為一種有效的抑菌劑，β-酸具有很好的應(yīng)用前景。

3 結(jié) 論

本研究對(duì)啤酒花軟樹脂中不同比例β-酸同系物樣品的體外抗氧化活性和抑菌活性進(jìn)行了初步評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，β-酸具有良好的體外抗氧化活性，且其同系物比例的差異在抗氧化活性上存在較大差異；IC50結(jié)果表明，高比例正蛇麻酮＋加蛇麻酮樣品S1∶4在4 種體外抗氧化評(píng)價(jià)體系中均顯示出最高的活性，證實(shí)正蛇麻酮＋加蛇麻酮的抗氧化活性強(qiáng)于合蛇麻酮。同樣，不同比例β-酸同系物樣品的抑菌活性也存在差異。與抗氧化活性不同，在較高質(zhì)量濃度下（≥40.00 mg/L），高比例合蛇麻酮的β-酸樣品對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌活性均較強(qiáng)，與同質(zhì)量濃度下的陽性對(duì)照阿莫西林的抑菌效果相當(dāng)甚至更高。但高比例正蛇麻酮＋加蛇麻酮的β-酸樣品S1∶4對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度最低（5.00 mg/L）；盡管S1∶4對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度與其余樣品均為10.00 mg/L，但其抑菌圈直徑更大。本研究結(jié)果可為啤酒花的品種選育和β-酸的開發(fā)應(yīng)用提供理論參考。但為深入闡明β-酸同系物之間活性差異的本質(zhì)，仍需對(duì)上述同系物在分離純化、結(jié)構(gòu)表征以及構(gòu)效關(guān)系研究等方面開展更加深入細(xì)致的工作。