王紅梅 肖傳勇 張倩 曹盟盟 崔立嬌

(德州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測中心，山東 德州 253012)

農(nóng)藥殘留一直是影響農(nóng)產(chǎn)品安全的一個重要因素。隨著農(nóng)藥殘留檢測標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，對農(nóng)藥殘留檢測的準(zhǔn)確度要求也在不斷提高，對影響檢測結(jié)果的基質(zhì)效應(yīng)的研究越來越多[1-4]。基質(zhì)效應(yīng)是指在樣品前處理不能完全去除雜質(zhì)的干擾，這些與樣品一同提取出來的組分對目標(biāo)化合物檢測結(jié)果測準(zhǔn)確度產(chǎn)生影響[5,6]。氨基甲酸酯類農(nóng)藥是一種高效殺蟲劑，雖然已經(jīng)被禁止在蔬菜水果中使用，但從歷年的農(nóng)藥殘留檢測數(shù)據(jù)來看，這種農(nóng)藥的用量及范圍還在不斷擴(kuò)大[7]。

目前，檢測氨基甲酸酯類農(nóng)藥的方法較多采用的是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[8,9]，液相色譜法[10]。但由于液相色譜法檢測時，需要柱后衍生，操作所需試劑種類多，操作復(fù)雜，所以，這種方法逐漸被液相色譜-質(zhì)譜法代替。無論采用哪種方法，基質(zhì)效應(yīng)都是普遍存在的。由于這幾種農(nóng)藥是山東省蔬菜質(zhì)量安全監(jiān)督抽查中監(jiān)測項(xiàng)目，所以有必要研究其在蔬菜中的基質(zhì)效應(yīng)，以更準(zhǔn)確地定量。

本文選用西紅柿、黃瓜、韭菜、芹菜為代表基質(zhì)，以農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法NY/T761-2008進(jìn)行樣品前處理，研究LC-MS/MS法檢測蔬菜水果中7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，為農(nóng)藥殘留準(zhǔn)確定量提供依據(jù)，有很高的實(shí)用價值。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

LCMS-8050液相色譜-三重四級桿質(zhì)譜儀(日本Shimadzu公司)；1%天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)公司)；氮吹儀(organomation N-EVAPTM112)；高速組織勻漿機(jī)(IKART25 digital ULTRA TURRAXR德國)；0.22μm有機(jī)針式濾膜；燒杯；具塞量筒；氨基柱；甲醇、乙腈、甲酸、乙酸銨均為色譜純(美國Fisher公司)；水(杭州娃哈哈純凈水)；氯化鈉(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：涕滅威、涕滅威亞砜、涕滅威砜、克百威、3-羥基克百威、甲萘威、滅多威。標(biāo)準(zhǔn)樣品均購買于農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心(天津)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 色譜條件

色譜柱：Shim-pack GISS C18 2.1×50mm，1.9μm(日本島津公司)。流動相A為水(含0.05%甲酸V/V)，流動相B為乙腈。流速：0.3mL·min-1，柱溫：40℃，進(jìn)樣量：1.0μL，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.2.2 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子源(ESI)，掃描方式：正離子掃描。離子源溫度：300℃，霧化器流速：3.0L·min-1，干燥氣流速：10.0L·min-1。脫溶劑管溫度：200℃，加熱塊溫度：400℃。加熱氣流速：10.0L·min-1。離子源電壓4.0kV，碰撞氣體壓力為270kPa，采用分段多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式。駐留時間：30mse。7種農(nóng)藥的采集參數(shù)見表2。

表2 7種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

1.2.3 樣品前處理

樣品前處理參考農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)NY/T 761-2008[11]，稱取25.0g待測樣品放入150mL燒杯，量取50.0mL乙腈加入燒杯中，在均質(zhì)機(jī)中12000r·min-1均質(zhì)2min后過濾，將濾液收集在盛有5～7g氯化鈉(含水分較多的蔬菜，氯化鈉可加10g左右)的具塞量筒中，收集濾液50mL，劇烈振搖1min，開蓋排氣，室溫下靜置30min，用移液管量取10.00mL上層乙腈溶液放入50mL燒杯里，將燒杯放置在80℃水浴氮吹裝置，氮吹近干，加入2.0mL甲醇加二氯甲烷(1∶99)待凈化。將凈化液加入活化好的氨基柱，用離心管收集洗脫液，再用4mL甲醇加二氯甲烷(1∶99)分2次洗燒杯后過柱，在50℃水浴氮吹近干，用甲醇定容至5.0mL。0.22μm濾膜過濾后上機(jī)檢測。選擇不含有7種農(nóng)藥的樣品為空白樣品，作為基質(zhì)配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.4 試驗(yàn)設(shè)計

先將上述7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇稀釋成5μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后每種蔬菜空白樣品取6份，按照樣品前處理方法，每份空白樣品提取液為5mL，氮吹近干后用5μg·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋，配制成0.005μg·mL-1、0.01μg·mL-1、0.02μg·mL-1、0.05μg·mL-1、0.1μg·mL-1、0.5μg·mL-1系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液，稱為基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液。用甲醇水將5μg·mL-1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成同樣濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，為溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液?；|(zhì)效應(yīng)按照以下公式計算[1]：

當(dāng)ME>0時，為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，ME<0時，為基質(zhì)抑制效應(yīng)。-20%

2 結(jié)果與分析

2.1 7種農(nóng)藥的色譜圖

按照上述儀器條件，將黃瓜空白基質(zhì)7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥上機(jī)檢測，由圖1可以看出，該方法在5min內(nèi)能實(shí)現(xiàn)目標(biāo)化合物的分離。

圖1 黃瓜空白基質(zhì)中7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的色譜圖(0.05μg·mL-1)

2.2 黃瓜中氨基甲酸酯類的基質(zhì)效應(yīng)

從表3可以看出，乙腈溶劑和黃瓜基質(zhì)標(biāo)中，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.005～0.5μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2在0.9991～0.9999,根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)的計算公式，計算出每種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見圖2。

表3 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在溶劑與黃瓜基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中的校準(zhǔn)曲線

圖2 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在黃瓜中的基質(zhì)效應(yīng)

由圖2可以看出，在黃瓜基質(zhì)中，涕滅威亞砜、涕滅威砜、3-羥基克百威、滅多威表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，涕滅威、克百威、甲奈威表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)。基質(zhì)效應(yīng)均在-20%

2.3 韭菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)

從表4可以看出，乙腈溶劑和韭菜基質(zhì)標(biāo)中，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.005～0.5μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2在0.9997～0.9999，按照基質(zhì)效應(yīng)的計算公式，計算每種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見圖3。

表4 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在溶劑與韭菜基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中的校準(zhǔn)曲線

由圖3可以看出，在韭菜基質(zhì)中，涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，其它農(nóng)藥表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，無論是基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)還是基質(zhì)抑制效應(yīng)，因?yàn)?20%

圖3 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在韭菜中的基質(zhì)效應(yīng)

2.4 芹菜中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)

從表5可以看出，乙腈溶劑和芹菜基質(zhì)標(biāo)中，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.005～0.5μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)r2>0.999，根據(jù)基質(zhì)效應(yīng)的計算公式，分別計算出每種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見圖4。

表5 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在溶劑與芹菜基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中的校準(zhǔn)曲線

由圖4可以看出，在芹菜基質(zhì)中，只有涕滅威亞砜表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，其它農(nóng)藥表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，其中涕滅威基質(zhì)效應(yīng)-50%

圖4 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在芹菜中的基質(zhì)效應(yīng)

2.5 西紅柿中氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)

從表6可以看出，乙腈溶劑和西紅柿基質(zhì)標(biāo)中，7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在0.005～0.5μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好r2>0.999，按照基質(zhì)效應(yīng)的計算公式，計算每種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，結(jié)果見圖5。

表6 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在溶劑與西紅柿基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中的校準(zhǔn)曲線

由圖5可以看出，在西紅柿基質(zhì)中，所有農(nóng)藥均表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，其中涕滅威基質(zhì)效應(yīng)-50%

圖5 7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥在西紅柿中的基質(zhì)效應(yīng)

3 結(jié)論

通過對比不同蔬菜基質(zhì)樣品中7種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)，發(fā)現(xiàn)7種農(nóng)藥在蔬菜中均存在一定的基質(zhì)效應(yīng)，且大部分為基質(zhì)抑制效應(yīng)?；|(zhì)效應(yīng)與蔬菜品種有關(guān)，黃瓜基質(zhì)中涕滅威亞砜、涕滅威砜、3-羥基克百威、滅多威是基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；韭菜基質(zhì)中涕滅威亞砜、涕滅威砜、滅多威表現(xiàn)為基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；芹菜基質(zhì)中只有涕滅威亞砜是基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)；7種農(nóng)藥在西紅柿中均表現(xiàn)為基質(zhì)抑制效應(yīng)，其中，涕滅威為中等基質(zhì)效應(yīng)。對于存在基質(zhì)效應(yīng)的農(nóng)藥和樣品，采用基質(zhì)配標(biāo)準(zhǔn)曲線來減弱基質(zhì)效應(yīng)，從而保證檢測結(jié)果的可靠性。