7月1日,《Horticulture Research》在線發(fā)表了西北農(nóng)林科技大學(xué)張魯剛教授團(tuán)隊(duì)題為The novel geneBrMYB2, located on chromosome A07, with a short intron 1 controls the purple-head trait of Chinese cabbage (Brassica rapaL.) 的研究論文。
該論文以團(tuán)隊(duì)自主創(chuàng)制的紫心大白菜新種質(zhì)為材料,基于前期對(duì)其花青素的積累特性、連鎖分析等相關(guān)研究,采用精細(xì)定位、圖位克隆等方法首次將控制紫心大白菜花青素合成和積累的顯性關(guān)鍵基因BrPur定位在A07染色體47.91 KB區(qū)間,在定位區(qū)間確定一個(gè)編碼R2R3-MYB型的調(diào)節(jié)因子為候選基因,并命名為BrMYB2。進(jìn)一步克隆了gBrMYB2(1 665 bp)和cBrMYB2(744 bp)及其啟動(dòng)子,對(duì)BrMYB2基因的序列進(jìn)行遺傳變異分析發(fā)現(xiàn):紫心大白菜的cBrMYB2和gBrMYB2同紫色供體紫菜薹親本BrMYB2的CDS和gDNA序列完全一致,而結(jié)球性供體普通大白菜的cBrmyb2存在2個(gè)點(diǎn)突變,其gBrmyb2的序列長(zhǎng)達(dá)5 441 bp,在第一內(nèi)含子上存在一個(gè)長(zhǎng)達(dá)3 772 bp的插入;紫心大白菜的BrMYB2和普通大白菜Brmyb2的啟動(dòng)子存在多處變異。首先通過(guò)不同長(zhǎng)度啟動(dòng)子+GUS載體轉(zhuǎn)化煙草表明啟動(dòng)子序列的差異沒有影響其啟動(dòng)功能,進(jìn)一步通過(guò)CDS和gDNA轉(zhuǎn)化擬南芥證明紫心大白菜BrMYB2基因外顯子上的點(diǎn)突變并不能導(dǎo)致該基因功能的喪失,然而BrMYB2基因第一個(gè)短內(nèi)含子(short intron 1)促進(jìn)BrMYB2表達(dá),而普通大白菜Brmyb2基因第一個(gè)長(zhǎng)內(nèi)含子(long intron 1)抑制了Brmyb2的表達(dá)?;ㄇ嗨睾铣上嚓P(guān)基因表達(dá)分析表明紫心大白菜中BrMYB2的高表達(dá)激活了花青素的合成途徑,促進(jìn)了花青素合成相關(guān)基因的表達(dá),最終導(dǎo)致大白菜葉球中花青素的積累從而形成紫心葉球。
本研究首次確定了控制紫心大白菜的關(guān)鍵基因BrMYB2,證實(shí)了BrMYB2基因第一個(gè)短內(nèi)含子調(diào)控BrMYB2表達(dá)的作用,提出了紫心大白菜花青素積累的分子機(jī)制。該結(jié)果提出了BrMYB2表達(dá)調(diào)控新途徑,不僅豐富了植物花青素合成的代謝理論,也為十字花科紫色蔬菜的種質(zhì)創(chuàng)新和遺傳改良提供了重要的參考。