陸悅 唐成武

[摘要] 目的 探討肝癌組織中LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)術(shù)后長(zhǎng)期生存的影響。 方法 回顧性分析2013年4月～2016年2月間在本院接受手術(shù)治療的157例肝細(xì)胞肝癌患者的臨床資料。RT-PCR 法檢測(cè)肝癌標(biāo)本內(nèi)LncRNA TINCR表達(dá)水平，采用ROC曲線和Kaplan-Meier法分析LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)肝癌術(shù)后長(zhǎng)期生存的影響。結(jié)果 肝癌組織LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)術(shù)后長(zhǎng)期生存預(yù)測(cè)的曲線下面積（AUC）為 0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。根據(jù)ROC曲線分析結(jié)果，將肝癌組織LncRNA TINCR相對(duì)表達(dá)水平大于1.89的93例（59.24%）患者納入高表達(dá)組，而肝癌組織LncRNA TINCR相對(duì)表達(dá)水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達(dá)組。Kaplan-Meier法生存分析發(fā)現(xiàn)高表達(dá)組術(shù)后3年內(nèi)有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達(dá)組術(shù)后3年內(nèi)有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64），低表達(dá)組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達(dá)組（P<0.0001，兩組間死亡風(fēng)險(xiǎn)比為3.7534，95%可信區(qū)間為2.5158～5.6000）。 結(jié)論 肝癌組織LncRNA TINCR表達(dá)水平與肝癌術(shù)后長(zhǎng)期生存顯著相關(guān)，LncRNA TINCR表達(dá)水平升高則預(yù)示著預(yù)后不佳。

[關(guān)鍵詞] 肝細(xì)胞癌;表達(dá);肝切除;長(zhǎng)期生存;LncRNA TINCR

[中圖分類號(hào)] R735.7? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1673-9701（2020）29-0024-04

[Abstract] Objective To explore the effect of the LncRNA TINCR expression level in hepatocellular carcinoma tissues on the long-term survival. Methods The clinical data of 157 patients with hepatocellular carcinoma who received surgical treatment in our hospital from April 2013 to February 2016 were retrospectively analyzed. The expression levels of LncRNA TINCR in HCC specimens were detected by RT-PCR， and the effect of the expression levels of LncRNA TINCR on the long-term survival after HCC surgery was analyzed by the ROC curve and Kaplan-Meier method. Results The AUC， specificity， sensitivity and the optimum interpretation value of the LncRNA TINCR expression levels in hepatocellular carcinoma tissues for prediction of the long-term survival after surgery were 0.812， 73.77%， 79.17% and 1.89（P<0.0001）. According to the ROC curve analysis results， 93 patients（59.24%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues greater than 1.89 were included in the high-expression group， while 64 patients（40.76%） with the relative expression levels of LncRNA TINCR in HCC tissues less than or equal to 1.89 were included in the low-expression group. A total of 76 patients in the high-expression group died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 18.28%（17/93）， which was found by the Kaplan-Meier survival analysis. In the low-expression group， 20 patients died within 3 years after surgery， and the 3-year overall survival rate was 68.75%（44/64）. The 3-year overall survival rate in the low-expression group was significantly better than that in the high-expression group（P<0.0001， mortality risk ratio between the two groups were 3.7534， 95% confidence interval was 2.5158-5.6000）. Conclusion The expression level of LncRNA TINCR in HCC tissues is significantly correlated with long-term survival after HCC surgery， and the increased expression level of LncRNA TINCR indicates poor prognosis.

[Key words] Hepatocellular carcinoma（HCC）; Expression; Hepatectomy; Long-term survival; LncRNA TINCR

肝癌（Hepatocellular cancer，HCC）目前仍是嚴(yán)重危害國(guó)民健康的重大公共衛(wèi)生難題[1-3]，全世界超過(guò)一半的新發(fā)HCC病例和死亡病例發(fā)生在我國(guó)。雖然針對(duì)HCC的治療有了長(zhǎng)足的發(fā)展，但是根治手術(shù)仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國(guó)大部分HCC發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期，甚至已經(jīng)侵犯膽道及門(mén)脈系統(tǒng)，因此術(shù)后復(fù)發(fā)率高，總體預(yù)后很不理想[5-6]。目前亟需進(jìn)一步探究引起HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的易感因素和靶點(diǎn)，從根本上阻斷HCC術(shù)后復(fù)發(fā)的通路，達(dá)到改善預(yù)后的目的。終末分化誘導(dǎo)非編碼RNA（Terminal differentiation-induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細(xì)胞中分離得到的一個(gè)長(zhǎng)3.7 kb的LncRNA轉(zhuǎn)錄本[7]。研究發(fā)現(xiàn)LncRNA TINCR在肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、胃癌、鱗狀細(xì)胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等惡性腫瘤中表達(dá)異常，并與多種分子相互作用而影響基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后過(guò)程，可加速腫瘤的發(fā)展[8-11]。本研究旨在探討HCC組織中LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)肝癌術(shù)后長(zhǎng)期生存的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性研究2013年4月～2016年2月在本院行肝癌切除的157例HCC患者的臨床資料，納入標(biāo)準(zhǔn)[12]：未接受任何抗癌治療;非彌漫性HCC;術(shù)后隨訪6個(gè)月以上;無(wú)失訪情況;所有治療經(jīng)患者本人知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：術(shù)前已有肝外轉(zhuǎn)移;術(shù)后隨訪短于6個(gè)月。

1.2 肝癌組織LncRNA TINCR相對(duì)表達(dá)量檢測(cè)

采用Tissue RNA Kit提取肝癌組織RNA，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄后，用于RT-PCR檢測(cè)組織中TINCR相對(duì)表達(dá)量，試劑盒均購(gòu)自南京東極醫(yī)藥科技有限公司，操作過(guò)程嚴(yán)格參照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。TINCR上游引物為5'-CCATC CCTCTGTAACCACCT-3'，下游引物為5'-GTTGGGT-CTAGATTCCAGCA-3'，以Actin為內(nèi)參，Actin上游引物為5'-ATCATGTTTGCCTAGATCAACA-3'，下游引物為5'-CATCTCTTGCTAAGCGTCCA-3'，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。RT-PCR程序：95℃預(yù)變性10 min;95℃ 10 s，60℃ 35 s，72℃，30 s，40個(gè)循環(huán);最后72℃延伸10 min。

1.3 隨訪及觀察指標(biāo)

術(shù)后半年內(nèi)每個(gè)月進(jìn)行隨訪，之后每3個(gè)月1次。隨訪內(nèi)容包括體格檢查、血常規(guī)、生化及腫瘤標(biāo)記物監(jiān)測(cè)，如有可疑復(fù)發(fā)，需行超聲、增強(qiáng)CT、MRI，必要時(shí)行腸鏡及穿刺活檢確認(rèn)。一旦確認(rèn)腫瘤復(fù)發(fā)，記錄復(fù)發(fā)的時(shí)間及部位?？偵鏁r(shí)間定義為自手術(shù)開(kāi)始直至死亡或最后一次隨訪（復(fù)發(fā)前）。比較兩組3年總生存情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。LncRNA TINCR表達(dá)對(duì)術(shù)后生存的預(yù)測(cè)作用采用ROC曲線分析。Kaplan-Meier法繪制患者無(wú)瘤生存情況曲線，采用Log-rank法分析。所有統(tǒng)計(jì)均由MEDCALC 15.2軟件完成，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HCC組織LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)術(shù)后生存的預(yù)測(cè)價(jià)值

將HCC組織LncRNA TINCR表達(dá)水平與術(shù)后復(fù)發(fā)情況（無(wú)復(fù)發(fā)=0，復(fù)發(fā)=1）繪制ROC曲線（圖1），并計(jì)算得出曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。

2.2 HCC組織LncRNA TINCR表達(dá)對(duì)術(shù)后長(zhǎng)期生存的影響

將HCC組織LncRNA TINCR相對(duì)表達(dá)水平大于1.89（ROC曲線所得的最佳判讀值）的93例（59.24%）患者納入高表達(dá)組，而將LncRNA TINCR相對(duì)表達(dá)水平小于或等于1.89的64例（40.76%）患者納入低表達(dá)組。兩組患者的一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表1）。高表達(dá)組術(shù)后3年內(nèi)有76例患者死亡，3年總生存率為18.28%（17/93）;低表達(dá)組術(shù)后3年內(nèi)有20例患者死亡，3年總生存率為68.75%（44/64）。Log-rank法分析生存曲線發(fā)現(xiàn)低表達(dá)組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達(dá)組（P<0.0001，兩組間死亡風(fēng)險(xiǎn)比為3.7534，95%可信區(qū)間為2.5158～5.6000）。見(jiàn)封三圖1。

3 討論

HCC目前仍是嚴(yán)重危害國(guó)民健康的重大公共衛(wèi)生難題，全世界超過(guò)一半的新發(fā)HCC病例和死亡病例發(fā)生在我國(guó)[1]。雖然針對(duì)HCC的治療有了長(zhǎng)足的發(fā)展，但是根治手術(shù)仍是治療HCC最理想的治愈措施之一[4]。由于在我國(guó)大部分HCC發(fā)現(xiàn)時(shí)已是中晚期，甚至已經(jīng)侵犯膽道及門(mén)脈系統(tǒng)，因此術(shù)后復(fù)發(fā)率高，總體預(yù)后很不理想[5-6]。目前亟需進(jìn)一步探究引起HCC術(shù)后復(fù)發(fā)易感因素和靶點(diǎn)，以改善HCC患者預(yù)后[12]。

新一代的基因測(cè)序技術(shù)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)超過(guò)90%的人類基因組轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生一系列非蛋白編碼（非編碼）RNA（ncRNA）[13-14]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA（LncRNA）大于200核苷酸長(zhǎng)度，雖然不具有蛋白質(zhì)編碼功能，卻能顯著影響生物學(xué)過(guò)程[15]。與microRNA相比，LncRNA的功能及機(jī)制尚未完全被人類掌握。然而，近年來(lái)人們對(duì)LncRNA的研究越來(lái)越深入。目前已經(jīng)證實(shí)LncRNA能調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生理活動(dòng)，包括染色質(zhì)修飾、基因印記、選擇性剪接、基因組重排、細(xì)胞增殖、遷移、凋亡及核質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)等[16]。研究表明，LncRNA參與了廣泛的生理及病理生理過(guò)程，通過(guò)正反饋/負(fù)反饋通路在癌癥發(fā)生發(fā)展中起到促癌或抑癌基因的作用[17]。也有證據(jù)顯示，LncRNA與腫瘤細(xì)胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移和侵襲有關(guān)[18-19]。因此，LncRNA有望成為腫瘤診斷標(biāo)志物及潛在的治療的靶點(diǎn)。

終末分化誘導(dǎo)非編碼RNA（Terminal differentiation -induced lncRNA，TINCR）是從人類分化的體細(xì)胞中分離得到的一個(gè)長(zhǎng)3.7 kb的LncRNA轉(zhuǎn)錄本[20]。研究發(fā)現(xiàn)TINCR在肝細(xì)胞癌、結(jié)直腸癌、胃癌、鱗狀細(xì)胞癌、膀胱癌、乳腺癌和黑色素瘤等表達(dá)異常，TINCR與多種分子相互作用而影響基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后過(guò)程，可加速腫瘤發(fā)展[8-11，21]。

近年來(lái)，關(guān)于LncRNA TINCR 在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制研究日漸受到重視。有學(xué)者利用蛋白組學(xué)對(duì)攜有丙肝病毒的肝癌患者的肝癌組織進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在此類肝癌組織中LncRNA TINCR的表達(dá)較正常肝組織增高[22]。有學(xué)者將HCC組織中的LncRNA TINCR的表達(dá)水平與腫瘤大小、TNM分期及血管浸潤(rùn)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果提示兩者相關(guān)性緊密，而進(jìn)一步的生存分析發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)的患者術(shù)后無(wú)瘤生存率略低于表達(dá)患者，從而推測(cè)LncRNA TINCR表達(dá)升高能增加腫瘤侵襲性，并能促進(jìn)HCC術(shù)后進(jìn)展[10]。

本研究結(jié)果顯示，HCC組織LncRNA TINCR表達(dá)水平對(duì)術(shù)后生存預(yù)測(cè)的曲線下面積（AUC）為0.812，特異度為73.77%，靈敏度為79.17%，最佳判讀值為1.89（P<0.0001）。通過(guò)此結(jié)果，將患者分為L(zhǎng)ncRNA TINCR高表達(dá)組和LncRNA TINCR低表達(dá)組，Log-rank法分析生存曲線發(fā)現(xiàn)低表達(dá)組3年總生存率明顯優(yōu)于高表達(dá)組（P<0.0001）。

已有研究顯示，LncRNA TINCR能作為競(jìng)爭(zhēng)性地結(jié)合microRNA（Competing endogenous RNA，ceRNA）調(diào)控基因表達(dá)，其不但可活化某些蛋白編碼基因的表達(dá)，亦可以抑制蛋白編碼基因的表達(dá)[23-25]。目前已經(jīng)證實(shí)，LncRNA TINCR能通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合miR-375，從而下調(diào)miR-375表達(dá)，起到促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用，而大量研究表明miR-375在肝癌中發(fā)揮抑制腫瘤的功能[26-27]。因此，可以推測(cè)通過(guò)降低LncRNA TINCR水平能增加miR-375表達(dá)，從而抑制HCC進(jìn)展，能顯著改善HCC預(yù)后。

綜上所述，肝癌組織LncRNA TINCR表達(dá)水平與肝癌預(yù)后顯著相關(guān)，LncRNA TINCR表達(dá)水平升高則預(yù)示著預(yù)后不佳，因此LncRNA TINCR可能是改善肝癌術(shù)后長(zhǎng)期生存的有效治療靶點(diǎn)。

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（收稿日期：2019-09-17）