陳薈婷 賀兼斌

【關(guān)鍵詞】果王素;肺纖維化;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

肺纖維化是一種具有相似病理過(guò)程的一類彌漫性肺間質(zhì)疾病的總稱，其病理過(guò)程中相對(duì)復(fù)雜，早期病理特征為彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)破壞，增加呼吸衰竭、死亡率[1]。潑尼松是肺纖維化中常用的治療方法，雖然能獲得預(yù)期的效果，但是藥物副作用較大，停藥后復(fù)發(fā)率亦相對(duì)較高，導(dǎo)致臨床使用受到限制。果王素為獼猴桃果仁經(jīng)臨界CO2萃取法提取的果仁油，主要成分為α-亞麻酸，含有一定量的維生素E和微量元素硒等，能發(fā)揮抗氧化、抗癌、保護(hù)正常細(xì)胞活性作用[2]。但是，果王素藥物劑量及對(duì)肺纖維化小鼠肺間質(zhì)細(xì)胞堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的影響研究較少[3]。因此，本研究以8周齡SPF級(jí)小鼠作為對(duì)象，探討不同劑量果王素對(duì)肺纖維化小鼠肺間質(zhì)細(xì)胞FGF及VEGF的表達(dá)水平的影響，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 動(dòng)物資料

購(gòu)置SPF級(jí)小鼠128只作為對(duì)象，隨機(jī)取8只，設(shè)為A組;剩余小鼠建立肺纖維化動(dòng)物模型，建模成功后隨機(jī)分為B組（24只）、C組（24只）、D組（24只）、E組（24只）、F組（24只）。128只SPF級(jí)雄性小鼠，體質(zhì)量（210±15）g，清潔級(jí)。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK（湘）2019-0014，將購(gòu)置的小鼠均放置在醫(yī)院動(dòng)物房進(jìn)行7 d適應(yīng)性喂養(yǎng)。且對(duì)小鼠進(jìn)行喂養(yǎng)、12 h交替光照。

1.2 儀器與設(shè)備

紫外分光光度計(jì)，型號(hào)：UV1700，購(gòu)自于Pharmaspec，ShiMDAzu公司;石蠟包埋機(jī)購(gòu)自武漢俊杰電子有限公司;病理切片機(jī)購(gòu)自于上海徠卡儀器有限公司;顯微鏡購(gòu)自于日本NiKon公司;TGL-16臺(tái)式離心機(jī)購(gòu)自于上海醫(yī)用分析儀器廠;HE染色液購(gòu)自于上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司;潑尼松購(gòu)自于廣東邦民制藥廠有限公司（國(guó)藥準(zhǔn)字H44021838）;中華獼猴桃果仁非飽和脂肪酸，購(gòu)自于湘西老爹生物有限公司，為黃色油性液體，非飽和脂肪酸含量為600 g/L。

1.3 方法

（1）建模方法。128只小鼠隨機(jī)取8只為A組，剩余120只小鼠采用注入博來(lái)霉素A5建立肺纖維化小鼠動(dòng)物模型。建模小鼠均給予2%戊巴比妥鈉45 mg/kg腹腔注射麻醉，并在無(wú)菌操作下正中下切開(kāi)，充分暴露氣管，行氣管切管，并向氣管內(nèi)注入一次性博來(lái)霉素A5注射液，劑量5 mg/kg，直立小鼠并旋轉(zhuǎn)，使得藥液在肺內(nèi)均勻分布，從而完成肺纖維化動(dòng)物模型;A組則在氣管內(nèi)一次性注入相同體積0.9%氯化鈉;（2）藥物干預(yù)方法。各組小鼠于建模后第二天開(kāi)始給藥，A組、B組每天給予0.9%氯化鈉2 mL灌胃1次，C組給予5 mg/kg醋酸潑尼松片溶于生理鹽水中，2 mL灌胃;D組取果王素60 mg/ kg混合0.9%氯化鈉注射液2 mL灌胃1次;E組取果王素120 mg/ kg混合0.9%氯化鈉注射液2 mL灌胃1次;F組取果王素180 mg/kg混合0.9%氯化鈉注射液2 mL灌胃1次，每天1次，連續(xù)用藥28 d。

1.4 觀察指標(biāo)

（1）HE染色。6組均完成28 d干預(yù)，干預(yù)完畢后以斷頸方式處死，取肺部病灶組織。經(jīng)梯度酒精脫水后進(jìn)行石蠟包埋，制備4 μm切片，中性樹(shù)膠封片后，倒置顯微鏡下觀察甲狀腺的病理形態(tài)[4];（2）FGF、VEGF mRNA水平。各組小鼠于干預(yù)后7 d、14 d及28 d以斷頸方式處死，取勁動(dòng)脈血，并采用實(shí)時(shí)熒光PCR法測(cè)定各組小鼠FGF、VEGF mRNA水平，有關(guān)操作嚴(yán)格遵循試劑盒說(shuō)明書(shū)完成[5]。采用Western Blot檢測(cè)各組肺組織中FGF、VEGF 蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料行χ2檢驗(yàn)，采用[n（%）]表示，計(jì)量資料行t檢驗(yàn)，采用（x—±s）表示，P<0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HE染色結(jié)果比較

各組小鼠均完成相應(yīng)的處理，并完成HE染色，結(jié)果表明：對(duì)照組小鼠肺組織中未見(jiàn)肺泡炎、纖維化病變，肺泡結(jié)構(gòu)清晰;模型組可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞、肺泡間隔增寬，成纖維細(xì)胞大量增生并廣泛纖維化;不同劑量果王素小鼠肺纖維化程度明顯減輕，且高劑量與潑尼松小鼠改善最佳，見(jiàn)圖1。

2.2 FGF、VEGF mRNA水平及蛋白比較

各組小鼠均給予相應(yīng)的措施處理，并完成FGF、VEGF mRNA水平測(cè)定，結(jié)果表明：隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不同劑量果王素組與潑尼松組FGF、VEGF mRNA水平呈下降趨勢(shì)，不同時(shí)間點(diǎn)FGF、VEGF mRNA水平比較具有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.05）;F組和C組FGF、VEGF mRNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）;F組FGF、VEGF mRNA水平均低于D組和E組（P<0.05），見(jiàn)圖2。

Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明：不同劑量果王素組與潑尼松組FGF、VEGF蛋白呈低表達(dá);F組和C組FGF、VEGF蛋白無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）;F組FGF、VEGF蛋白均低于D組和E組（P<0.05），見(jiàn)圖3。

3 討論

獼猴桃是世界公認(rèn)的“水果之王”“世界珍果”，其營(yíng)養(yǎng)豐富、全面，主要體現(xiàn)為“兩高四多”，即：高鉀、高鈣、多亞麻酸、多維生素C、多粗纖維及多氨基酸。同時(shí)，獼猴桃種子中含有其核心營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)α-亞麻酸，能通過(guò)“稀釋血液”，調(diào)節(jié)血脂中過(guò)高的甘油三酯水平，保護(hù)心臟健康?，F(xiàn)代藥理結(jié)果表明[6]：果王素具有抗氧化、抗炎癥及抗腫瘤等多種生物學(xué)效應(yīng)，藥用價(jià)值較高。本研究中，B組可見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞、肺泡間隔增寬，成纖維細(xì)胞大量增生并廣泛纖維化;不同劑量果王素小鼠肺纖維化程度明顯減輕，且高劑量與潑尼松小鼠改善最佳，從本研究結(jié)果看出，果王素用于肺纖維化小鼠中，能減輕肺損傷，且作用效果多呈劑量依賴性，能獲得良好的預(yù)后。

FGF主要由內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞分泌產(chǎn)生，具有多種異構(gòu)體，在動(dòng)脈粥樣硬化病灶中發(fā)揮了重要作用。既往研究表明[7]：FGF能促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的游走、平滑肌細(xì)胞的增殖，避免平滑肌細(xì)胞游走。同時(shí)，F(xiàn)GF亦可促進(jìn)新生血管形成，修復(fù)損害的內(nèi)皮細(xì)胞，被認(rèn)為是病灶形成促進(jìn)因子。而VEGF又稱為血管通透因子，是一種高度特異性促進(jìn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，能促進(jìn)血管通透性增加、細(xì)胞外基質(zhì)變性、血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖及血管的形成作用。FGF、VEGF在人體中呈低表達(dá)或處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，但是在肺纖維化中能引起FGF、VEGF mRNA水平持續(xù)升高，其表達(dá)水平能反映肺纖維化的疾病嚴(yán)重程度，可指導(dǎo)臨床治療[8]。本研究中，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不同劑量果王素組與潑尼松組FGF、VEGF mRNA水平呈下降趨勢(shì)，不同時(shí)間點(diǎn)FGF、VEGF mRNA水平比較具有統(tǒng)計(jì)意義（P<0.05）;F組FGF、VEGF水平均低于D組和E組（P<0.05）;Western Blot檢測(cè)結(jié)果表明：不同劑量果王素組與潑尼松組FGF、VEGF蛋白呈低表達(dá);F組和C組FGF、VEGF蛋白無(wú)統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05）;F組FGF、VEGF蛋白均低于D組和E組（P<0.05），從本研究結(jié)果看出，果王素能降低肺纖維化小鼠FGF、VEGF mRNA水平，且高劑量果王素效果最佳，干預(yù)過(guò)程中加強(qiáng)FGF、VEGF mRNA水平測(cè)定，亦可評(píng)價(jià)小鼠預(yù)后。

綜上所述，果王素用于肺纖維化小鼠中能減輕肺損傷，且呈劑量依懶性，可能與抑制FGF、VEGF mRNA水平有關(guān)，能為肺纖維化治療提供新思路。