摘要：目的：探討運動對慢性復合性應激大鼠前額葉皮層bax、bal-2及caspase3蛋白表達的影響。方法：雄性35只SD大鼠，隨機分為三周對照組（C組）8只、模型組（M組）27只，C組常規(guī)飼養(yǎng)，M組進行三周慢性疲勞綜合征（CFS）建模。建模結束后，C組、M組隨機各選取6只進行取材;剩余模型組大鼠隨機分為模型對照組（MC組）、模型運動組（ME組）。采用力竭游泳、束縛、禁食禁水、睡眠剝奪四種應激因素建立CFS模型。采用無負重游泳進行有氧運動干預。采用Western Blotting 方法檢測大鼠前額葉皮層bax、bal-2及caspase3蛋白的表達。結果：與C組相比，M組大鼠前額葉皮層Bax、caspase3蛋白表達非常顯著性增加 （P<0.01），Bcl-2蛋白表達增加，但無顯著性差異;與MC組相比，ME組大鼠前額葉皮層Bcl-2、caspase3蛋白表達非常顯著性增加（P<0.01）;Bax蛋白表達下降，但無顯著性差異。 結論：慢性疲勞綜合征可引起大鼠前額葉皮層Bax、caspase3蛋白的表達，有氧運動可以促進抗凋亡蛋白Bcl-2的表達，抑制Bax蛋白的表達。

關鍵詞：慢性疲勞綜合征;有氧運動;凋亡

中圖分類號：R339.4 ????文獻標識碼：A

在21世紀，阿爾茲海默癥、帕金森氏癥等神經退行性疾病的發(fā)病率越來越高。醫(yī)學雜志《柳葉刀》，曾表示：到2030年，阿爾茲海默癥將會是醫(yī)療和社會體系的重要負擔。社會環(huán)境的迅速發(fā)展變化引起機體應激可能是導致神經退行性疾病的因素之一。凋亡相關蛋白是神經退行性病變中的重要通路。有氧運動可促進大腦皮層神經元再生，大部分研究證明運動預干預、造模期間的有氧運動干預、運動聯(lián)合藥物治療可以有效的阻止神經元的凋亡蛋白的表達，促進神經元的再生。本研究模擬現(xiàn)實生活中人們生活空間狹小、身體疲勞、睡眠不足、飲食不規(guī)律的生活現(xiàn)象，建立慢性疲勞綜合征（Chronic fatigue syndrome，CFS，）旨在研究有氧運動對發(fā)病后大鼠凋亡相關蛋白表達的影響。為有氧運動對神經退行性疾病的預防和早期治療效果，及大眾健身提供理論支持。

1材料與方法

1.1實驗動物及分組

8周齡SPF級健康雄性SD大鼠35只，購于廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心[動物生產許可證：SCXK（粵）2013-0034]，體重為180-220g。采用國家標準嚙齒類動物干燥飼料喂養(yǎng)。動物飼養(yǎng)環(huán)境：溫度25？℃，相對濕度50%-65%，12h光暗交替，大鼠游泳水溫為32？℃。大鼠適應性喂養(yǎng)一周后隨機分為空白對照組（C組，n=8）、模型組（M組，n=27）;體重分別為（220.81？.4）g和（219.89？.24）g，組間對比無顯著性差異（P>0.05）。C組常規(guī)飼養(yǎng)，不進行任何干預;M組大鼠適應性游泳3d（1次/d，10min/次）后進行3周CFS建模，建模期間，大鼠意外死亡3只。建模結束后C組、M組各隨機選取6只大鼠進行取材;剩余M組大鼠隨機分為模型對照組（MC組，n=9）、模型運動組（ME組，n=9）。

1.2干預方式及取材

1.2.1 ?CFS建模方案

CFS大鼠建模方法參照文獻[1]并根據(jù)預實驗結果，采用復合應激制備模型。本研究旨在模擬人們軀體疲勞、高壓、飲食不規(guī)律、睡眠不足的實際情況，采用力竭游泳、束縛、禁食禁水、睡眠剝奪四種應激方式建立應激性CFS大鼠模型。每周建模6天，以兩天為一個周期。

睡眠剝奪采用小平臺法;束縛應激采用自制束縛筒，大鼠可以自由呼吸，但是身體活動被限制，尾巴外露;力竭游泳采用負重體重5%進行力竭游泳，其判斷標準為大鼠鼻尖下沉10s ，無法自主游出水面;夜間禁食禁水。

1.2.2有氧運動方案

有氧運動方案選用無負重游泳（水溫32？℃），20min開始，前兩天每天遞增5min，以后每天遞增10min到60min，第二、三周，每天60min。

1.3實驗取材

實驗結束24h后，所有大鼠禁食12h，根據(jù)大鼠體重腹腔注射質量分數(shù)為10%的水合氯醛（0.35-0.4ml/kg）進行腹腔麻醉，然后斷頭取腦，將前額葉皮質取出用錫紙包埋立即放入液氮中，-80℃保存，待測指標，整個過程均在冰面上快速進行操作，兩次取材由同一人員操作。

1.4指標檢測與方法

采用Western Blotting 方法檢測各組大鼠海馬組織中bax、bal-2及caspase3蛋白的表達量。

1.5數(shù)據(jù)處理

運用SPSS21.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。計量資料統(tǒng)計結果以均數(shù)北曜疾睿▁眘）表示，采用單因素方差分析檢驗，P<0.05為具有統(tǒng)計學意義，P<0.01為具有極顯著性差異。

2研究結果

2.1 CFS建模大鼠前額葉皮層Bax、Bcl-2及caspase3蛋白的表達

由表1可知，與C組相比， M組大鼠前額葉皮層組織中促凋亡蛋白Bax、caspase3表達非常顯著性增加（P<0.01），抗凋亡蛋白Bcl-2表達增加，但無顯著性差異（P>0.05）。

2.2有氧運動對CFS建模大鼠前額葉皮層Bax、Bcl-2及caspase3蛋白表達的影響

由表2可知，與MC組相比，ME組大鼠前額葉皮層Bcl-2、caspase3蛋白表達非常顯著性增加（P<0.01）;Bax蛋白表達下降，但無顯著性差異（P>0.05）。說明運動可以有效促進抗凋亡蛋白Bcl-2的表達。

3分析與討論

由于目前CFS發(fā)病機制尚不清楚，大多數(shù)研究都是觀察CFS患者發(fā)病的癥狀、體征等一般狀況，詢問并分析患者主訴癥狀發(fā)生的各種原因模擬進行動物建模，建模方式各異，如有研究采用注射脂多糖、布魯氏桿菌、多聚肌胞苷酸等造成動物機體免疫紊亂進而誘發(fā)慢性疲勞綜合征，這種建模方法是模擬毒感染引發(fā)的CFS或者是臨床CFS患者表現(xiàn)出的免疫紊亂現(xiàn)象，主要進行對癥治療的研究，在國內比較少見。大部分研究都采用應激建模，研究者認為應激建模更符合臨床CFS患者發(fā)病原因;一般采用單因素建模、雙因素建模、多因素復合應激建模。本研究模擬現(xiàn)代生活中人們所面臨的多種應激：身體疲勞、飲食不規(guī)律、睡眠缺失、壓力大，采用力竭游泳、禁食禁水、睡眠剝奪、束縛四種應激方式進行生理-心理雙重應激建立CFS大鼠模型，研究有氧運動對CFS的作用效果。

在細胞凋亡過程中，Bcl-2家族和caspase家族發(fā)揮著重要的作用，Bcl-2是抗凋亡基因，Bax和Caspase3是促凋亡基因。本研究中，CFS大鼠前額葉皮層組織中促凋亡蛋白Bax、caspase3表達非常顯著性增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表達無顯著性差異，這與一般研究結果相同; CFS大鼠有氧運動后前額葉皮層Bcl-2、caspase3蛋白表達非常顯著性增加，Bax蛋白表達無顯著性變化，說明運動可以有效促進抗凋亡蛋白Bcl-2的表達;而caspase3及Bax蛋白表達情況可能與有氧運動時間有關，研究發(fā)現(xiàn)，運動形式、運動量和運動時間對 Bcl-2、Bax、Caspase3 的蛋白表達以及細胞凋亡會產生不同影響，短時間大強度或力竭運動會使促凋亡蛋白表達升高，抗凋亡蛋白表達降低; 而長期規(guī)律運動才能有效抑制細胞的凋亡，保護機體免受外界刺激誘發(fā)的細胞損傷。本文有氧運動干預時間為3周，抑制促凋亡基因的表達效果較弱，在后續(xù)研究中進一步深入研究和探討。

4結論

慢性疲勞綜合征可引起大鼠前額葉皮層促凋亡基因Bax、caspase3蛋白的表達，有氧運動可以促進抗凋亡基因Bcl-2蛋白的表達，抑制Bax蛋白的表達。

作者簡介：李艷榮（1993.01-），女，漢族，山西臨汾人，巢湖學院體育學院助教，碩士;研究方向：運動與健康。

參考文獻

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