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        兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制作用及機(jī)制初探

        2020-09-02 09:11:31董建將閆磊梁軍劉陽
        關(guān)鍵詞:細(xì)胞增殖

        董建將 閆磊 梁軍 劉陽

        【摘要】目的 對兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制作用以及作用機(jī)制進(jìn)行調(diào)查。方法 制作不同濃度的兒茶素培養(yǎng)基開展甲基噻唑?qū)嶒?yàn),并采用流式細(xì)胞術(shù)對兒茶素在細(xì)胞周期中的影響進(jìn)行調(diào)查。結(jié)果 腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在兒茶素的作用下會發(fā)生顯著的形態(tài)變化,且其變化與兒茶素濃度成正比。當(dāng)兒茶素濃度為62.5~125 mg/ml時(shí)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡情況非常明顯,而在低于10 μg/ml濃度中腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡情況并不明顯。兒茶素不同濃度下作用24 h的細(xì)胞凋亡率均高于作用12 h(P<0.05);相同作用時(shí)間下兒茶素濃度越高細(xì)胞凋亡率越高(P<0.05)。結(jié)論 兒茶素能夠在S期對細(xì)胞增值進(jìn)行抑制,進(jìn)而抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖。

        【關(guān)鍵詞】兒茶素;腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251;細(xì)胞增殖;細(xì)胞抑制

        【中圖分類號】R73 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.20..02

        神經(jīng)膠質(zhì)瘤是一種惡性腫瘤,其發(fā)病部位主要為中樞神經(jīng)系統(tǒng),本病通過手術(shù)治療后生長更快,患者死亡率更高。因此,臨床中多采用藥物化療、放療等方式進(jìn)行治療,通過藥物殺滅腫瘤細(xì)胞。但多數(shù)化療藥物存在較大的毒性,患者治療過程中副作用發(fā)生率非常高,給患者帶來的痛苦和負(fù)擔(dān)較大[1]。且部分腫瘤細(xì)胞對化療物質(zhì)以及放射線的敏感度較低,導(dǎo)致治療效果并不理想,因此,需要采取其他方式進(jìn)行治療[2]。兒茶素是茶葉中提取的多酚物質(zhì),近年來研究發(fā)現(xiàn),兒茶素能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞的增殖進(jìn)行抑制。為此,本次研究將針對兒茶素對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖的抑制機(jī)理進(jìn)行分析。

        1 資料與方法

        1.1 一般材料

        標(biāo)本:U251細(xì)胞株系采購于中山大學(xué)并于本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)冷凍保存;兒茶素(95.0%)選購于南京清澤科技有限公司。將兒茶素用完全培養(yǎng)基配置成8個(gè)不同的濃度,初始濃度為500 μg/ml,而后每個(gè)培養(yǎng)基以50.0%濃度遞減,最終培養(yǎng)基濃度為3.90625 μg/ml。

        儀器:顯微鏡(德國萊卡);壓力鍋;CO2培養(yǎng)箱;流式細(xì)胞儀;酶標(biāo)儀(Multiskan MK3)。

        試劑:胎牛血清;胰酶;甲基噻唑藍(lán);液體培養(yǎng)基;臺盼藍(lán);碘化丙錠;RnaseA;枸櫞酸鈉。

        1.2 一般方法

        細(xì)胞培養(yǎng):將U251細(xì)胞株培養(yǎng)于含有胎牛血清、青霉素、鏈霉素培養(yǎng)基中,隔天換液,培養(yǎng)條件為5%CO2、37攝氏度。

        試劑配制:兒茶素通過完全培養(yǎng)基配置成8個(gè)不同的濃度;臺盼藍(lán)用無菌水配置成濃度為0.4%的溶液。

        增殖抑制:收集對數(shù)期生長細(xì)胞將其接種在96孔板中,通過8個(gè)不同濃度兒茶素處理24 h,而后計(jì)算細(xì)胞成功率。

        1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

        采用SPSS 21.0軟件處理文中數(shù)據(jù),計(jì)量資料以(x±s)表示,t/F為檢驗(yàn)值,計(jì)數(shù)資料采用%表示,x2檢驗(yàn),P<0.05視為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

        2 結(jié) 果

        2.1 細(xì)胞形態(tài)變化

        腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在兒茶素的作用下會發(fā)生顯著的形態(tài)變化,且其變化與兒茶素濃度成正比。隨著兒茶素濃度不斷遞增,腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞體積不斷增加、細(xì)胞核輪廓逐漸模糊,細(xì)胞處于S期時(shí)開始出現(xiàn)增大表現(xiàn)。而對照組則無明顯變化,細(xì)胞生理形態(tài)基本完整。

        2.2 細(xì)胞凋亡率

        當(dāng)兒茶素濃度為62.5~125 mg/ml時(shí)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡情況非常明顯,而在低于10μg/ml濃度中腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡情況并不明顯。兒茶素不同濃度下作用24 h的細(xì)胞凋亡率均高于作用12 h(P<0.05);相同作用時(shí)間下兒茶素濃度越高細(xì)胞凋亡率越高(P<0.05),詳見表1。

        3 討 論

        惡性腫瘤患者死亡率非常高,臨床治療多以手術(shù)、放化療等方式為主,但由于常規(guī)放化療藥物毒性較大,其不僅會殺滅腫瘤細(xì)胞同時(shí)也會殺滅機(jī)體正常細(xì)胞,因此所產(chǎn)生的副作用非常大,患者通常存在明顯的毒副反應(yīng),嚴(yán)重影響患者治療效果[3]。加之部分細(xì)胞對放化療的敏感度非常低因此急需采取其他的方式開展治療,降低患者治療副作用,提升患者治療安全性。

        兒茶素是一種茶葉中的多酚物質(zhì),兒茶素能夠清除自由基,因此具有抗衰老的作用,其抗衰老作用甚至超過維生素E[4]。兒茶素具有類氟作用,能夠減少牙菌斑、延緩牙周病的發(fā)生;兒茶素還能夠改善腸道內(nèi)維生素的分布,抑制致病菌的同時(shí)不會損傷益生菌生態(tài)[5]。其同時(shí)具有除臭、抗菌、抑制血壓等作用。在近年來研究中發(fā)現(xiàn),兒茶素具有抑制癌細(xì)胞增殖的作用,早期已經(jīng)證實(shí)其能夠誘發(fā)白血病Molt4B細(xì)胞凋亡。

        在本次研究中可見,兒茶素能夠誘發(fā)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞凋亡,且隨著兒茶素濃度的升高,腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251凋亡率也持續(xù)提升。此外,兒茶素作用時(shí)間不斷延長腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251的凋亡率也呈現(xiàn)上升趨勢,證明了兒茶素確實(shí)能夠?qū)δX膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251細(xì)胞增殖進(jìn)行抑制。在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251在S期時(shí)開始增大,細(xì)胞比例不斷下降,證明細(xì)胞抑制從S期開始。

        總的來說,兒茶素能夠抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251增殖,可作為臨床治療新方向。

        參考文獻(xiàn)

        [1] 錢廣濤,晁二昆,孫 偉,等.苦蕎芽和苗中黃酮類化合物含量差異及關(guān)鍵基因表達(dá)分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志:2020,15(13):1-9.

        [2] 趙開勝,折 盼,白利芬.人白細(xì)胞抗原-G基因多態(tài)性與腦膠質(zhì)瘤易感性之間的關(guān)系[J].神經(jīng)損傷與功能重建,2020,15(03):173-176.

        [3] 陳勁松,林 富,朱雙根,等.谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶P-1基因遺傳變異對接受替莫唑胺聯(lián)合放療的腦膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響[J].腫瘤預(yù)防與治療,2019,32(10):859-865.

        [4] Kirana C,Ruszkiewicz A,Stubbs RS,et al.Soluble HLA-G is a differential prognostic marker in sequential colorectal cancer disease stages[J].Int J Cancer,2017(12):78.

        [5] 夏 濤,高麗萍,韋朝領(lǐng),等.茶樹兒茶素生物合成研究進(jìn)展[J].中國茶葉科技創(chuàng)新與產(chǎn)業(yè)發(fā)展學(xué)術(shù)研討會論文集,2019(09):529-534.

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