饒欽雄，張其才，劉 星，王獻(xiàn)禮，李華璽，宋衛(wèi)國(guó)，趙志輝

(上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，上海201403)

饒欽雄，張其才，劉星，等.SPE 柱法測(cè)定畜產(chǎn)品中29 種二英及其類似物[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2020，36(4)：103-107

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

Trace 1310 高分辨氣相色譜(美國(guó)Thermo 公司)；DFS 高分辨質(zhì)譜儀(美國(guó)Thermo 公司)；Dionex ASE300 加速溶劑萃取儀(美國(guó)戴安公司)；冷凍干燥儀(北京博醫(yī)康)；氮?dú)獯蹈蓛x(美國(guó)Organomation 公司)；R-215 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士Buchi 公司)。

1.2 HRGC-HRMS 儀器條件

1.2.1 PCDD∕Fs 的色譜參考條件

色譜柱：BPX-DXN 柱，60 m×0.25 mm(內(nèi)徑) ×0.10 μm；進(jìn)樣口溫度：270 ℃；進(jìn)樣方式：不分流模式；傳輸線溫度：280 ℃；升溫程序柱溫：初始溫度為140 ℃，保持1 min，以20 ℃∕min 的速度升到200 ℃，保持1 min，以5 ℃∕min 的速度升到220 ℃，保持16 min，以5 ℃∕min 的速度升到235 ℃，保持7 min，再以5 ℃∕min的速度升到310 ℃，并保持10 min；載氣：高純氦氣( ＞99.999%)；流速：1.0 mL∕min。

1.2.2 DL-PCBs 的色譜條件

色譜柱：BPX-DXN 柱，60 m×0.25 mm(內(nèi)徑) ×0.10 μm；進(jìn)樣口溫度：290 ℃；進(jìn)樣方式：無(wú)分流模式；傳輸線溫度：270 ℃；升溫程序：初始溫度為80 ℃，保持3 min，以15 ℃∕min 的速度升到150 ℃，保持2 min，以2.5 ℃∕min 的速度升到270 ℃，保持3 min，再在以15 ℃∕min 的速度升到330 ℃，并保持5 min；載氣：高純氦氣( ＞99.999%)；流速：1.0 mL∕min。

1.2.3 PCDD∕Fs 和DL-PCBs 的質(zhì)譜條件

電離模式：電子轟擊(EI+)；電子能量：45 V；分辨率：≥10 000；源溫：260 ℃；掃描模式：離子模式(SIM)；質(zhì)譜采集質(zhì)量碎片類型：參考GB 5009.205—2013 標(biāo)準(zhǔn)附表。

1.3 樣品前處理

1.3.1 樣品預(yù)處理

將豬和牛等畜產(chǎn)品均質(zhì)化，冷凍干燥，再將樣品粉碎后存儲(chǔ)于鋁箔袋中，備用。

1.3.2 樣品的提取

稱取試樣10.0 g，與10 g 無(wú)水硫酸鈉或硅藻土混合均勻，轉(zhuǎn)移至加速溶劑提取儀的不銹鋼萃取池中，加入10 μL PCDD∕Fs 和DL-PCBs 的13C 標(biāo)記定量?jī)?nèi)標(biāo)，利用加速溶劑萃取儀進(jìn)行提取。

提取條件如下，萃取溶劑：正己烷∶二氯甲烷=1∶1(v∕v)；壓力：10.3 MPa(1 500 psi)；溫度：120 ℃；加熱時(shí)間：6 min；靜態(tài)提取時(shí)間：8 min；吹掃時(shí)間2 min；循環(huán)3 次。 樣品收集至250 mL 加速溶劑萃取儀接收瓶中。

1.3.3 脂重的測(cè)量

將樣品提取液轉(zhuǎn)移到平底燒瓶中，并用10 mL 正己烷對(duì)接收瓶進(jìn)行洗滌，將洗滌液一并加入到平底燒瓶中，重復(fù)3 次；最后將提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至近干，用氮?dú)獯抵梁阒?，?jì)算前后平底燒瓶重量差，計(jì)為脂重。

1.3.4 凈化及濃縮

1.3.4.1 酸性硅膠凈化除脂

使用100 mL 正己烷復(fù)溶后，加入50 g 高配比酸性硅膠(硅膠∶濃硫酸=56∶44，質(zhì)量比)，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在55 ℃下旋轉(zhuǎn)濃縮20 min；靜置8—10 min，將提取液轉(zhuǎn)移到另一個(gè)平底燒瓶中；用50 mL 正己烷洗平底燒瓶中的硅膠，收集正己烷于第二個(gè)平底燒瓶中，重復(fù)3 次(如果酸性硅膠顏色較深，則應(yīng)該重復(fù)上述過(guò)程，直至酸性硅膠為淺黃色)。 最后，將收集液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至3—5 mL，供下一步凈化。

1.3.4.2 復(fù)合硅膠SPE 柱和活性炭SPE 柱凈化

用30 ml 正己烷負(fù)壓預(yù)淋洗復(fù)合硅膠SPE 柱，當(dāng)液面降至無(wú)水硫酸鈉層上方約2 mm 時(shí)，關(guān)閉負(fù)壓，棄去淋洗液；復(fù)合硅膠SPE 柱流出端串聯(lián)上活性炭SPE柱(圖1)，用10 ml 正己烷淋洗；當(dāng)液面降至無(wú)水硫酸鈉層上方約2 mm 時(shí)，關(guān)閉負(fù)壓，棄去淋洗液；柱下放置梨形瓶準(zhǔn)備上樣接收。 此過(guò)程應(yīng)檢查凈化柱，如果出現(xiàn)溝流、斷層現(xiàn)象應(yīng)更換新柱。

用70 mL 正己烷洗脫串聯(lián)色譜柱DL-PCBs，洗脫液全收集；取下活性炭SPE 柱，在流入端串聯(lián)上玻璃空SPE 柱，再用30 mL 甲苯洗脫串聯(lián)色譜柱PCDD∕Fs，洗脫液全收集；將收集的洗脫液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至3—5 mL，供下一步濃縮用。

1.3.4.3 微量濃縮及溶劑置換

將上述濃縮液轉(zhuǎn)移至球型濃縮器中，濃縮至0.2—0.3 mL，轉(zhuǎn)移至帶有襯管的棕色進(jìn)樣小瓶中，在氮?dú)饬飨麓抵良s剩20 μL，加入20 μL 壬烷溶液，分別加入10 μL PCDD∕Fs 和DL-PCBs 回收率內(nèi)標(biāo)溶液，上HRGC∕HRMS 分析檢測(cè)。

1.4 方法準(zhǔn)確度和精密度驗(yàn)證

于豬肉和牛肉樣品中，添加適量的PCDD∕Fs 和DL-PCBs 標(biāo)準(zhǔn)品，2378-TCDF 和2378-TCDD 添加水平為20 pg∕g，OCDF 和OCDD 添加水平為200 pg∕g，其他25 種二英類化合物添加水平為100 pg∕g，設(shè)置4個(gè)平行、1 個(gè)樣品空白和1 個(gè)系統(tǒng)空白樣品，按1.3 進(jìn)行樣品前處理，上HRGC-HRMS 儀器測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜柱的選擇

選用Thermo TR-DIOXIN-5MS(60 m×0.25 mm ×0.25 μm)(簡(jiǎn)稱TR 柱)和SGE BPX-DXN[60 m ×0.25 mm(thickness)](簡(jiǎn)稱BPX 柱)兩款毛細(xì)管柱進(jìn)行PCDD∕Fs 和DL-PCBs 的分析。 在色譜分離上，2，3，3′，4，4′，5-HxPCB 和2，3，3′，4，4′，5′-HxPCB 兩個(gè)化合物在TR 和BPX 這兩款色譜柱上的分離度分別為1.89 和2.69。 在建立標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)， TR 柱PCDD∕Fs 的RSD 在0.7%—18.7%，PCBs 的RSD 在1.3%—9.7%，BPX 柱PCDD∕Fs 的RSD 在2.8%—6.6%，PCBs 的RSD 在0.4%—9.4%。 綜上，BPX 色譜柱在分析PCDD∕Fs 和DL-PCBs 時(shí)分離度以及定量準(zhǔn)確性更高，更加適用于二英類化合物的測(cè)定。

2.2 SPE 凈化柱洗脫條件的摸索

通過(guò)加標(biāo)洗脫的方式確定SPE 凈化柱的洗脫條件。 加入10 μL PCDD∕Fs 混標(biāo)和10 μL DL-PCBs 混標(biāo)，同時(shí)加入定量?jī)?nèi)標(biāo)，過(guò)復(fù)合硅膠和活性炭SPE 柱，凈化分離。 采用正己烷100 mL 洗脫DL-PCBs，每20 mL 收集1 次；采用30 mL 甲苯洗脫P(yáng)CDD∕Fs，每10 mL 收集1 次。 結(jié)果表明，使用20—40 mL 正己烷，DL-PCBs 洗脫效率最高，使用60 mL 正己烷DL-PCBs 的洗脫率達(dá)到95.2%以上，為保證方法的穩(wěn)定性，確定DL-PCBs 的正己烷洗脫體積為70 mL；20 mL 甲苯對(duì)PCDD∕Fs 洗脫率已經(jīng)達(dá)到91.1%以上，為了充分洗脫出17 種PCDD∕Fs，最終確定PCDD∕Fs 的洗脫體積為30 mL。

2.3 方法準(zhǔn)確度和精密度

表1 豬肉中添加回收結(jié)果(n=4)Table 1 The results of fortified recovery in pork(n=4)

表2 牛肉中添加回收結(jié)果(n=4) Table 2 The results of fortified recovery in beef(n=4)

表3 同位素內(nèi)標(biāo)回收率(n=4)Table 3 The recovery of isotopic internal standard(n=4)

2.4 實(shí)際應(yīng)用

3 結(jié)論與討論

本文采用SPE 負(fù)壓的模式進(jìn)行樣品的凈化，相比于GB 5 009.205—2013[6]中的玻璃層析柱重力過(guò)柱的方法，效率較高，并可減少有機(jī)溶劑約40%；張莉娜等[8]采用濃硫酸除脂，多段混合硅膠柱和氧化鋁柱凈化植物油樣品，其流程較為復(fù)雜，且多次操作濃硫酸較為危險(xiǎn)；任曼等[9]經(jīng)酸性硅膠床、多段混合硅膠柱和凝膠滲透色譜柱(GPC)凈化后，再用硅藻土柱分離的方法，凈化步驟較多。 本研究建立的二英類化合物檢測(cè)技術(shù)，雖未在凈化原理上有較大突破，但在提高效率并減少有機(jī)溶劑使用量等方面具有良好的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，適用于我國(guó)畜產(chǎn)品中二英類化合物的檢測(cè)。