周 凡,彭 建,陳麗芝,線(xiàn) 婷,王芳芳,王 政,陳劉浦,貝亦江,阮贇杰,丁雪燕*
(1.浙江省水產(chǎn)技術(shù)推廣總站,浙江 杭州 310023;2.浙江省三門(mén)縣水產(chǎn)技術(shù)推廣站,浙江 三門(mén) 317100;3.浙江大學(xué)新農(nóng)村發(fā)展研究院,浙江 杭州 310058)
青蟹,隸屬于甲殼綱、十足目、梭子蟹科,青蟹屬;因其肉質(zhì)鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富,兼有滋補(bǔ)強(qiáng)身功效,素有“海上人參”之稱(chēng)[1-2]。據(jù)《2019年中國(guó)漁業(yè)統(tǒng)計(jì)年鑒》,全國(guó)青蟹養(yǎng)殖產(chǎn)量達(dá)15.77×104t,主要分布在廣東(6.06×104t)、福建(3.63×104t)、浙江(2.54×104t)、廣西(1.95×104t)、海南(1.38×104t)等沿海省份[3],是重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蟹類(lèi)。傳統(tǒng)青蟹養(yǎng)殖基本是投喂冰鮮餌料,這種粗放型“以魚(yú)養(yǎng)蟹”的模式對(duì)海洋漁業(yè)資源和環(huán)境影響較大,且冰鮮餌料常攜帶寄生蟲(chóng)和病菌,易導(dǎo)致水體污染和病害暴發(fā),造成養(yǎng)殖效益不穩(wěn)定。因此,在青蟹養(yǎng)殖中示范與推廣使用配合飼料,對(duì)于推動(dòng)青蟹養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)健康發(fā)展和轉(zhuǎn)型升級(jí)具有重要意義。
本試驗(yàn)選擇浙江沿海養(yǎng)殖的擬穴青蟹(Scyllaparamamosain)及池塘蟹-蝦-貝的混養(yǎng)模式[4],對(duì)比分析了配合飼料和冰鮮餌料對(duì)擬穴青蟹肌肉營(yíng)養(yǎng)組成、消化酶活性、水質(zhì)指標(biāo)、環(huán)境微生物菌以及養(yǎng)殖效益的影響,旨在為配合飼料在青蟹養(yǎng)殖業(yè)中的推廣應(yīng)用提供參考。
養(yǎng)殖試驗(yàn)在浙江省三門(mén)縣金嶼水產(chǎn)養(yǎng)殖專(zhuān)業(yè)合作社進(jìn)行。選取養(yǎng)殖池塘2口,其中一口池塘投喂冰鮮餌料(1.2 hm2),設(shè)為對(duì)照塘,另一口池塘投喂青蟹膨化配合飼料(0.8 hm2),設(shè)為試驗(yàn)塘。青蟹膨化配合飼料由寧波天邦股份有限公司生產(chǎn),基本營(yíng)養(yǎng)組成為粗蛋白42.3%、粗脂肪8.6%、粗灰分13.9%、水分10.2%;飼料粒徑2.2 mm,水中穩(wěn)定性2 h以上。
本試驗(yàn)所用的擬穴青蟹幼蟹規(guī)格整齊,附肢健全,初始體質(zhì)量30 g,放養(yǎng)量1 200只/667 m2;脊尾白蝦(ExopalaemoncarinicaudaHolehuis)蝦苗放養(yǎng)密度為0.2 kg/667 m2??O蟶(Sinonovaculaconstricta)和泥蚶(TegillarcagranosaLinnaeus)苗種投放量分別為10 kg/667 m2和38 kg/667 m2。
投喂管理:養(yǎng)殖期間,每日投喂兩次,冰鮮餌料塘日投飼率從15%~30%(甲殼寬<8 cm)減少到8%~12%(甲殼寬>8 cm);配合飼料塘日投飼率與冰鮮餌料塘比為1∶4左右。飼料散投在池塘四周的固定灘面,上午06:00~07:00,投喂量占30%,下午17:00~18:00,投喂量占70%;每次投喂量以2 h內(nèi)攝食完畢為宜,視青蟹的生長(zhǎng)、攝食和天氣等情況適當(dāng)調(diào)整。養(yǎng)殖飼喂周期5個(gè)月。
日常管理:池塘水位以保持在1 m左右,高溫期提高至1.2~1.5 m;3~4 d換水一次,日換水量20%~30%;養(yǎng)殖前、后期水溫在15℃以上時(shí)采用EM菌+芽孢桿菌+紅糖培水。池塘養(yǎng)殖每天早晚各巡池一次,檢查閘門(mén)、堤壩、防逃等設(shè)施和水色、水位,觀(guān)察青蟹的活動(dòng)和攝食情況,及時(shí)清除殘餌和死蟹。養(yǎng)殖期間未爆發(fā)疾病,也無(wú)缺氧、翻塘等現(xiàn)象發(fā)生。
1.3.1 生物樣品采集與分析
養(yǎng)殖5個(gè)月后,使用籠捕法從每個(gè)池塘隨機(jī)采樣10只青蟹,游標(biāo)卡尺逐一測(cè)量形體數(shù)據(jù),并用電子天平稱(chēng)重;打開(kāi)甲殼,分離雌蟹的肝胰腺與卵巢;同時(shí)取其頭胸甲覆蓋下方的軀干部肌肉,均分成3份,用于常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分檢測(cè)。在冰盤(pán)上分離胃和腸道組織,用冰凍雙蒸水沖洗組織內(nèi)壁,勻漿器中加入樣品和9倍去離子水,高速冷凍離心機(jī)(3 000 r·min-1)離心10 min,所得上清液置于-20℃冰箱中保存,用于消化酶活性檢測(cè)。
肌肉常規(guī)成分參照AOAC(2006)方法測(cè)定[5]:水分采用105℃烘干法、粗蛋白用凱氏定氮法(N×6.25)、粗脂肪用索氏乙醚浸提法、粗灰分用550℃馬福爐灼燒法。磷含量采用GB/T 6437—2002標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定。消化酶活性測(cè)定使用試劑盒(南京建成生物工程研究所)。酶液蛋白濃度采用考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行測(cè)定;胃蛋白酶活性定義為每mg組織蛋白在37℃每min分解蛋白生成1 μg氨基酸為1個(gè)酶活單位;胰蛋白酶活性定義為在pH 8.0和37℃條件下,每mg蛋白中含有的胰蛋白酶每min使吸光度變化0.003為1個(gè)酶活力單位;脂肪酶活力定義為在37℃時(shí)每g組織蛋白在反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min,每消耗1 μmol底物為1個(gè)酶活單位;淀粉酶活力定義為每mg組織蛋白在37℃與底物作用30 min,水解10 mg淀粉定義為1個(gè)酶活單位。
1.3.2 形態(tài)學(xué)指標(biāo)計(jì)算
擬穴青蟹的肝胰腺指數(shù)(HSI)和性腺指數(shù)(GSI)計(jì)算公式如下:
肝胰腺指數(shù)(HSI,%)=(肝胰腺濕重/蟹體濕重)×100;
性腺指數(shù)(GSI,%)=(性腺濕重/蟹體濕重)×100。
1.3.3 底泥和水樣采集與分析
在養(yǎng)殖高溫期,利用5點(diǎn)采樣法采集樣品,即選取兩個(gè)養(yǎng)殖塘對(duì)角線(xiàn)的交點(diǎn)以及對(duì)角線(xiàn)上與交點(diǎn)等距的4個(gè)點(diǎn)作為采樣點(diǎn)。每個(gè)點(diǎn)使用2.5 L有機(jī)玻璃采水器取距離水面40 cm處的水樣,均勻混合作為供試水樣;池塘沉積物也按照5點(diǎn)采樣方式采集,沉積物利用沉積物柱狀采集器收集10 cm左右處的塘底沉積物。樣品均于4℃保存,DNA提取在24 h內(nèi)完成。過(guò)濾后的水樣,參考海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范(GB 17378—2007),測(cè)定包括氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮、活性磷酸鹽和總有機(jī)碳等常規(guī)水質(zhì)指標(biāo)。
取采集的兩個(gè)池塘水樣各100 mL,經(jīng)0.22 μm無(wú)菌纖維素濾膜過(guò)濾后用無(wú)菌剪刀剪碎濾膜,用于DNA提??;取采集的兩個(gè)池塘的沉積物樣各500 mg,分別提取DNA。上述水體、沉積物的總DNA提取均使用Power Soil DNA試劑盒(Mo Bio Laboratories,Carlsbad,CA,USA),按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。將提取的細(xì)菌總DNA作為模板,設(shè)計(jì)含有bar-code的16S DNA的V3~V4可變區(qū)擴(kuò)增引物341F(5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′)和805R(5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′)引物擴(kuò)增細(xì)菌16S rRNA的V3~V4區(qū)。PCR擴(kuò)增的程序參考Deng等[6]的方法。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物使用瓊脂糖2%凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量后,用Gene JET凝膠提取試劑盒(Thermo Scientific,Waltham,MA,USA)進(jìn)行純化。使用Illumina Hi Seq平臺(tái)對(duì)定量的DNA進(jìn)行16S rDNA擴(kuò)增子測(cè)序(參考NCBI數(shù)據(jù)庫(kù),序列號(hào)PRJNA561204)。
通過(guò)UCHIME Algorithm與數(shù)據(jù)庫(kù)Gold database對(duì)測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行去雜質(zhì)控,得到有效數(shù)據(jù)。利用Uparse(V8.1.1861)對(duì)所有樣品的全部Effective Tags進(jìn)行聚類(lèi),默認(rèn)以97%的一致性(Identity)將序列聚類(lèi)成為OTUs。根據(jù)Silva數(shù)據(jù)庫(kù)將檢測(cè)到的OTU進(jìn)行分類(lèi)分析。以O(shè)TU的物種分類(lèi)譜系結(jié)果為依據(jù),在門(mén)和屬的分類(lèi)水平對(duì)各樣本進(jìn)行豐度分析。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示為平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD),經(jīng)SPSS 16.0軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)分析,并采用Tukey’s多重比較檢驗(yàn)均值的差異顯著性,顯著性水平P為0.05。
對(duì)養(yǎng)成的擬穴青蟹抽樣分析,發(fā)現(xiàn)兩種飼料組養(yǎng)成的青蟹在形體學(xué)指標(biāo)(全甲寬、甲長(zhǎng)、體高)以及平均體質(zhì)量均無(wú)顯著差異(P>0.05);肝胰腺指數(shù)和性腺指數(shù)以冰鮮餌料組略高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表1)。
表1 兩種飼料對(duì)青蟹生長(zhǎng)指標(biāo)的影響
兩種飼料養(yǎng)成的擬穴青蟹肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成見(jiàn)表2。冰鮮餌料組的青蟹肌肉中水分含量(78.14%)要高于配合飼料組(76.89%)(P>0.05);配合飼料組的青蟹肌肉粗蛋白含量(20.12%)則顯著高于冰鮮餌料組(18.73%)(P<0.05)。兩組青蟹的肌肉粗脂肪和粗灰分含量無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
表2 兩種飼料對(duì)青蟹肌肉常規(guī)營(yíng)養(yǎng)組成的影響
試驗(yàn)青蟹胃和腸道消化酶活性測(cè)定結(jié)果如表3所示。配合飼料組的青蟹胃蛋白酶活性顯著高于冰鮮餌料組(P<0.05),但胃淀粉酶活性顯著低于冰鮮餌料組(P<0.05)。胃脂肪酶活性2組間無(wú)顯著差異(P>0.05)。腸道消化酶活性,冰鮮餌料組的青蟹腸蛋白酶活性顯著高于配合飼料組(P<0.05),脂肪酶和淀粉酶活性則相對(duì)穩(wěn)定,不受飼料處理的影響(P>0.05)(表3)。
表3 兩種飼料對(duì)青蟹消化酶活性的影響
表4所示為兩個(gè)試驗(yàn)池塘水質(zhì)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果。氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮、磷酸鹽和總有機(jī)碳等5項(xiàng)水質(zhì)指標(biāo)均為冰鮮餌料組的池塘高于配合飼料組的池塘;但各組指標(biāo)之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
表4 兩個(gè)飼料組的池塘水質(zhì)指標(biāo)
圖1顯示了試驗(yàn)樣品中在門(mén)水平(a)和屬水平(b)下最豐富的10個(gè)菌群。在門(mén)水平上(圖1-a),水體和沉積物樣品中菌群以變形菌門(mén)(Proteobacteria)為主,底泥中平均占61.9%、水體中平均占40.1%;其次為水體中的藍(lán)藻門(mén)(Cyanobacteria)和擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes),以及沉積物中的擬桿菌門(mén)(Bacteroidetes)(圖1-a)。此外還有放線(xiàn)菌門(mén)(Actinobacteria)、厚壁菌門(mén)(Firmicutes)、綠菌門(mén)(Chlorobi)、綠彎菌門(mén)(Chloroflexi)、酸桿菌門(mén)(Acidobacteria)、芽單胞菌門(mén)(Gemmatimonadetes)、螺旋體菌門(mén)(Spirochaetae)為前10最豐富門(mén)。在屬的水平上(圖1-b),聚球藻屬(Synechococcus)、Sulfurovum屬、脫硫葉菌屬(Desulfobulbus)、Phaeodactylibacter屬、白念珠菌屬(Candidatusaquiluna)、Marinicella屬、Salinihabitans屬、假交替單胞菌屬(Pseudoalteromonas)屬、海命菌屬(Marivita)和奧文氏菌屬(Owenweeksia)為前10最豐富屬。
分析兩個(gè)池塘中采集的水樣和底泥樣品中菌群在屬水平上的平均相對(duì)豐度,發(fā)現(xiàn)水樣中有海命菌屬等7種微生物菌的平均相對(duì)豐度具有顯著差異,且均為對(duì)照塘的菌群平均相對(duì)豐度顯著高于試驗(yàn)塘(P<0.05)(表5)。底泥樣品中,測(cè)得有9種微生物在屬水平上的平均相對(duì)豐度具有顯著差異,其中,試驗(yàn)塘底泥除了雙歧桿菌屬的平均相對(duì)豐度高于對(duì)照塘以外(P<0.05),其他如地桿菌屬等8種微生物的平均相對(duì)豐度均顯著低于對(duì)照塘(P<0.05)。
表5 屬水平上水樣和底泥中具有顯著性差異的菌群的平均相對(duì)豐度
在所有養(yǎng)殖動(dòng)物起捕完畢后,對(duì)兩個(gè)池塘的生產(chǎn)效益的分析結(jié)果如表6所示。兩個(gè)飼料組的青蟹產(chǎn)量相當(dāng);但配合飼料組的脊尾白蝦產(chǎn)量和貝類(lèi)總產(chǎn)量分別比對(duì)照塘高出18.2%和4.0%。配合飼料組每667 m2水產(chǎn)品總產(chǎn)量為374 kg,比冰鮮餌料組總產(chǎn)量353 kg增加5.9%。養(yǎng)殖成本方面,配合飼料組的每667 m2飼料成本為1 615元,相比于冰鮮餌料組的2 250元,每667 m2飼料成本下降28.2%;配合飼料組總成本為10 720元/667 m2,比冰鮮餌料組總成本(11 655元/667 m2)減少8.0%。配合飼料組每667 m2利潤(rùn)6 210元,冰鮮餌料組4 355元,配合飼料組增收1 855元/667 m2(表6)。
表6 兩個(gè)飼料組的池塘養(yǎng)殖效益分析
續(xù)表6
近年來(lái)已有關(guān)于青蟹配合飼料營(yíng)養(yǎng)需求的研究[7-9],但對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用效果的報(bào)道還較少。2016年以來(lái),在浙江省漁業(yè)主管部門(mén)支持下,全省水產(chǎn)技術(shù)推廣系統(tǒng)圍繞青蟹、大口黑鱸(Micropterussalmoides)、大黃魚(yú)(Larimichthyscrocea)等海、淡水主導(dǎo)品種,開(kāi)展了配合飼料替代冰鮮餌料養(yǎng)殖的聯(lián)合推廣行動(dòng)。其中,青蟹配合飼料的示范推廣打破了青蟹傳統(tǒng)養(yǎng)殖配合飼料“零應(yīng)用”的局面,取得了明顯成效。本試驗(yàn)的結(jié)果表明,擬穴青蟹池塘混養(yǎng)模式下使用配合飼料養(yǎng)殖,抽樣青蟹的個(gè)體規(guī)格和性腺發(fā)育等與投喂冰鮮餌料無(wú)顯著差異,青蟹產(chǎn)量基本保持穩(wěn)定,混養(yǎng)的脊尾白蝦和貝類(lèi)產(chǎn)量有明顯增加,養(yǎng)殖綜合效益提升明顯。
研究表明,飼料類(lèi)型及其營(yíng)養(yǎng)水平會(huì)影響水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)組成。本試驗(yàn)觀(guān)察到青蟹攝食膨化飼料后,肌肉水分含量有所降低,蛋白質(zhì)含量顯著增加;對(duì)大口黑鱸(M.salmoides)[10]、烏鱧(Channaargus)[11]、大黃魚(yú)(L.crocea)[12]等魚(yú)類(lèi)以及中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)[13]的研究發(fā)現(xiàn),相比于投喂冰鮮餌料,投喂配合飼料養(yǎng)成的水產(chǎn)品肌肉品質(zhì)有所改善。
蝦蟹類(lèi)的消化酶活性取決于其自身的消化生理特性和所攝食的餌料,其中餌料營(yíng)養(yǎng)素的質(zhì)和量是影響其消化酶分泌與活性強(qiáng)弱的關(guān)鍵因素[14-15]。研究報(bào)道,青蟹主要由胃分泌消化蛋白質(zhì)、淀粉和纖維素的酶,腸道也能分泌一部分淀粉酶和少量其他酶類(lèi),但主要功能為吸收營(yíng)養(yǎng)[16]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,攝食配合飼料的擬穴青蟹胃蛋白酶活性顯著高于冰鮮餌料組,在三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)[17]、中華絨螯蟹[18]和日本對(duì)蝦(Penaeusjaponicus)[19]的研究中也有相似報(bào)道。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)攝食冰鮮餌料后青蟹腸道胰蛋白酶活性較高,脂肪酶在兩個(gè)組織中的活性差異大不,胃的淀粉酶活性則明顯高于腸道。消化酶活性變化的原因可能與兩種餌料的營(yíng)養(yǎng)組成以及配合飼料的加工工藝等因素有關(guān),擬穴青蟹的消化酶分泌做了適應(yīng)性調(diào)節(jié)。
養(yǎng)殖池塘水質(zhì)指標(biāo)對(duì)于水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)和健康狀況起到關(guān)鍵影響[20],海水養(yǎng)殖尾水的無(wú)機(jī)氮和活性磷酸鹽含量超標(biāo)又是造成近海海域污染的主要因素之一[21-22];加強(qiáng)養(yǎng)殖過(guò)程的投入品源頭和養(yǎng)殖過(guò)程管控對(duì)海水養(yǎng)殖可持續(xù)發(fā)展具有重要意義。本試驗(yàn)觀(guān)察到投喂配合飼料的試驗(yàn)塘的氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮、活性磷酸鹽和總有機(jī)碳等水質(zhì)指標(biāo)均低于投喂冰鮮餌料的對(duì)照塘,表明在基本相同的養(yǎng)殖管理下,投喂配合飼料對(duì)于改善養(yǎng)殖水質(zhì),從而減輕水體有害物質(zhì)對(duì)養(yǎng)殖生物的脅迫效應(yīng)具有積極作用。
微生物群落結(jié)構(gòu)是反映養(yǎng)殖系統(tǒng)狀態(tài)改變和水體健康程度的重要指標(biāo)[23];分析菌群中的優(yōu)勢(shì)菌群和相對(duì)豐度的變化,對(duì)維持和調(diào)控養(yǎng)殖生態(tài)系統(tǒng),促進(jìn)養(yǎng)殖生物的生長(zhǎng)和抗病力具有重要的意義[24]。本試驗(yàn)觀(guān)察到變形菌門(mén)和藍(lán)藻門(mén)是池塘水體中最豐富的兩個(gè)菌群門(mén)類(lèi)。變形菌門(mén)是海洋或陸地上的高鹽湖泊中最主要的細(xì)菌類(lèi)群之一[25],被認(rèn)為是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的共生菌[26]。藍(lán)藻細(xì)菌則是誘發(fā)養(yǎng)殖水體藍(lán)藻暴發(fā)的重要菌群,會(huì)引起水產(chǎn)動(dòng)物中毒與缺氧死亡[27]。本試驗(yàn)中,投喂冰鮮餌料的池塘水體中檢測(cè)到相對(duì)較高的無(wú)機(jī)養(yǎng)分水平可能更有利于藍(lán)藻生長(zhǎng)。同時(shí),水樣中在屬水平上相對(duì)豐度具有顯著性差異的7種菌群也均出現(xiàn)在投喂冰鮮餌料的池塘;其中,海命菌屬、熱帶單胞屬、海洋柄菌屬和海洋桿菌屬均屬于變形菌門(mén)。變形菌門(mén)是一種多功能菌群,具有脫氮除磷、降解有機(jī)質(zhì)和降低化學(xué)需氧量的功能,在污染嚴(yán)重的廢水中具有較高的豐度[28];另有研究發(fā)現(xiàn),水產(chǎn)動(dòng)物腸道菌群多樣性降低、變形菌門(mén)細(xì)菌增多會(huì)引發(fā)腸道炎癥反應(yīng)[29]。奧文氏菌屬和Rubidimonas屬于擬桿菌門(mén),擬桿菌門(mén)的細(xì)菌與DNA、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)等有機(jī)物質(zhì)的轉(zhuǎn)換密切相關(guān),對(duì)這些有機(jī)物質(zhì)的吸收和利用是水體環(huán)境中碳循環(huán)的重要組成部分[30];冰鮮餌料組的池塘水樣中擬桿菌表現(xiàn)出較高的相對(duì)豐度可能與該池塘需降解復(fù)雜有機(jī)物,特別是多糖和蛋白質(zhì)(如動(dòng)物性餌料和藻類(lèi)等)的活性有關(guān)。差異菌群可通過(guò)其代謝活動(dòng)影響營(yíng)養(yǎng)元素的物質(zhì)循環(huán),決定水質(zhì)的狀況,從而影響水生動(dòng)物的生存狀態(tài)和健康狀況。池塘的底質(zhì)可作為氨、硫化物和活性磷酸鹽的“培養(yǎng)基”,是池塘中涉及有機(jī)物和養(yǎng)分循環(huán)最活躍的微生物轉(zhuǎn)化場(chǎng)所[31],但本試驗(yàn)中冰鮮餌料組和配合飼料組的池塘底泥中占比在前10位的菌群在屬水平上的相對(duì)豐度上并無(wú)顯著差異。
綜上,投喂配合飼料對(duì)于提高擬穴青蟹池塘養(yǎng)殖效益、改良養(yǎng)殖環(huán)境方面具有積極作用,表明了在青蟹生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用配合飼料替代冰鮮餌料的可行性;試驗(yàn)結(jié)果為促進(jìn)青蟹健康養(yǎng)殖模式的轉(zhuǎn)型發(fā)展提供了理論依據(jù)。