張藝馨

【摘要】酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)是一種操作方式簡(jiǎn)單，檢測(cè)成本低，且分析內(nèi)容量大的檢測(cè)方式。該檢測(cè)方式適合對(duì)復(fù)雜基質(zhì)中的微量成分進(jìn)行檢測(cè)分析，由于操作簡(jiǎn)單，越來(lái)越多的人開(kāi)始應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)。本研究應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法，從食品中的農(nóng)藥殘留，獸藥殘留以及違禁添加物，病原微生物，轉(zhuǎn)基因食品安全性等方面進(jìn)行食品安全監(jiān)測(cè)，探討酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全檢測(cè)中的應(yīng)用并對(duì)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)可能存在的問(wèn)題進(jìn)行分析。

【關(guān)鍵詞】酶聯(lián)免疫吸附技術(shù);食品安全;檢測(cè)

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)是一種借助酶的催化作用，應(yīng)用抗原抗體反應(yīng)中的高度特異性對(duì)相關(guān)物品進(jìn)行檢驗(yàn)。在應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)的檢驗(yàn)過(guò)程中，抗體與抗原會(huì)吸附到被檢測(cè)物體表面，同時(shí)還能保持自身的免疫活性?？贵w與抗原與酶進(jìn)行結(jié)合后形成的結(jié)合物中兩方均能保持自身活性。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)最早開(kāi)始應(yīng)用始于上世紀(jì)90年代，隨著相關(guān)技術(shù)的不斷進(jìn)步，該檢測(cè)方式也逐漸成熟，并且生成了多種檢測(cè)方法，例如競(jìng)爭(zhēng)檢測(cè)法，捕獲檢測(cè)法等。該技術(shù)目前主要應(yīng)用在食品檢測(cè)方面。在對(duì)食品安全進(jìn)行檢測(cè)時(shí)應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，可以通過(guò)比較檢測(cè)過(guò)程中復(fù)合物的生成量以及等待檢測(cè)的抗原與抗體之間的價(jià)值進(jìn)行相關(guān)判斷。該檢測(cè)方式質(zhì)量較高，且時(shí)間短，靈敏度高，目前在食品安全檢測(cè)領(lǐng)域中應(yīng)用十分廣泛。

一、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)在食品安全性檢測(cè)的應(yīng)用

（一）農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的應(yīng)用

農(nóng)藥在使用后會(huì)在食品的原材料以及相關(guān)半成品中殘留部分農(nóng)藥原題以及降解物質(zhì)等，農(nóng)藥殘留是食品安全問(wèn)題的原因之一。在應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)對(duì)農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，首先要清除農(nóng)藥的組成結(jié)構(gòu)，農(nóng)藥從結(jié)構(gòu)中將是一種小分子物質(zhì)，自身沒(méi)有免疫性。根據(jù)農(nóng)藥的相關(guān)結(jié)構(gòu)制定抗原的合成路線(xiàn)，然后通過(guò)雜交瘤技術(shù)制造出能夠檢測(cè)農(nóng)藥小分子的mcab（單克隆抗體）。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)進(jìn)行農(nóng)藥檢測(cè)可以針對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥，有機(jī)氯農(nóng)藥等進(jìn)行有效地檢測(cè)。例如在對(duì)有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，可以選擇合成集中不同的半抗原，并通過(guò)免疫方法取得抗體，通過(guò)異原酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)到該食品中IC50的含量為25ng/mL，其中該食品中IC50的最低含量值達(dá)到2ng/mL，檢測(cè)中的特異性非常好，且對(duì)于類(lèi)似結(jié)構(gòu)的有機(jī)磷農(nóng)藥沒(méi)有出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

（二）違禁藥品檢測(cè)中的應(yīng)用

目前我國(guó)食品安全檢測(cè)中對(duì)違禁藥品的檢測(cè)要求非常該，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)檢測(cè)獸藥，抗生素藥物，激素類(lèi)藥物等違禁藥品，可以更加便捷靈敏的將食品中的違禁藥品含量檢測(cè)出來(lái)。而且該檢測(cè)技術(shù)可以將少量的藥物殘留分析成一種可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)用的常規(guī)分析技術(shù)，在檢測(cè)時(shí)可以同時(shí)對(duì)上百種品類(lèi)進(jìn)行檢測(cè)，并且可以對(duì)大批量的藥品進(jìn)行檢測(cè)。例如在檢測(cè)食品已烯雌酚（人工合成的雌激素藥物，具有較強(qiáng)的副作用，可能會(huì)引起人體內(nèi)基因突變形成腫瘤）含量中，使用相關(guān)試劑盒，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)親和素與生物素之間的高度特異性及穩(wěn)定性對(duì)酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)進(jìn)行研究，使用生物素對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記，對(duì)該類(lèi)違禁藥品的最低檢測(cè)值為0.123g/ml，檢測(cè)結(jié)果較精細(xì)。

（三）轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中的應(yīng)用

隨著轉(zhuǎn)基因食品在人民生活中的增多，轉(zhuǎn)基因食品安全問(wèn)題已經(jīng)成為食品安全質(zhì)量檢測(cè)中的關(guān)注重點(diǎn)。相關(guān)資料顯示，目前大部分國(guó)家對(duì)轉(zhuǎn)基因食品都會(huì)進(jìn)行比較嚴(yán)格的管理，在轉(zhuǎn)基因食品包裝袋上會(huì)有明顯的轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)志。在轉(zhuǎn)基因食品安全檢測(cè)中應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，主要是通過(guò)分析轉(zhuǎn)基因食品中某些特定的轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白，來(lái)檢測(cè)食品中是否含有轉(zhuǎn)基因成分。例如目前食品安全檢測(cè)中對(duì)玉米粉的檢測(cè)會(huì)應(yīng)用Bt9玉米酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)試劑盒來(lái)檢測(cè)玉米中的轉(zhuǎn)基因表達(dá)蛋白的含量。該試劑可以準(zhǔn)確的對(duì)玉米中的轉(zhuǎn)基因蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)。在檢測(cè)過(guò)程中，Bt9玉米酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)試劑盒會(huì)將2中抗體與Cry IA（b）分子進(jìn)行結(jié)合，形成夾心，對(duì)玉米中的蛋白進(jìn)行分離檢測(cè)。

（四）食品病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用

病原微生物室食品安全中造成食品生物污染的主要原因。常規(guī)的檢驗(yàn)方式通過(guò)對(duì)病原微生物進(jìn)行分離培養(yǎng)或者生活試驗(yàn)進(jìn)行檢測(cè)，但是會(huì)耗費(fèi)大量的人力物力，且時(shí)間較長(zhǎng)，而且類(lèi)似于大腸桿菌等細(xì)菌在機(jī)體營(yíng)養(yǎng)匱乏的環(huán)境下會(huì)進(jìn)入休眠狀態(tài)，而進(jìn)入適宜的環(huán)境后會(huì)馬上復(fù)蘇，就導(dǎo)致常規(guī)檢測(cè)中相關(guān)性質(zhì)的細(xì)菌會(huì)產(chǎn)生漏檢。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)可以避免該現(xiàn)象的發(fā)生。酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)可以對(duì)大腸桿菌，沙門(mén)氏菌，軍團(tuán)菌等食品中的常見(jiàn)細(xì)菌進(jìn)行檢測(cè)，例如在沙門(mén)氏菌的檢測(cè)過(guò)程中，可以通過(guò)對(duì)沙氏門(mén)菌進(jìn)行單克隆抗體，然后將樣本加入到微孔板中，待沙氏門(mén)菌與微孔板內(nèi)的特異性抗體結(jié)合后，形成復(fù)合物，將復(fù)合物加入抗體形成抗體復(fù)合物，然后加入底物，測(cè)定該混合物的光密度，如果檢測(cè)結(jié)果顯示光密度數(shù)值超出臨界值，則表示該檢測(cè)結(jié)果為沙氏門(mén)菌陽(yáng)性。

第五，食品中其他成分檢測(cè)中的應(yīng)用。在食品安全檢測(cè)中，過(guò)敏性殘留物的檢測(cè)也至關(guān)重要。食品中常見(jiàn)的過(guò)敏性食品有雞蛋，牛奶，花生等，此類(lèi)食品的主要過(guò)敏性物質(zhì)為蛋白質(zhì)。在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，可以通過(guò)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行單克隆抗體檢測(cè)，且檢測(cè)結(jié)果較準(zhǔn)確，操作簡(jiǎn)潔。

二、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)中存在的問(wèn)題以及解決方法

（一）酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)中存在的問(wèn)題

酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便，檢測(cè)成本低，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確，且可以大批量檢測(cè)等優(yōu)勢(shì)，在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用廣泛，但是該技術(shù)方式存在較多的問(wèn)題。（1）檢測(cè)過(guò)程中，抗體的制作及備份比較困難，且對(duì)相關(guān)檢查試劑的要求較高，不能應(yīng)用同一種試劑檢測(cè)多種食品。（2）檢測(cè)食品結(jié)構(gòu)類(lèi)似時(shí)容易在檢測(cè)過(guò)程中發(fā)生交叉反應(yīng)，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果失效。

（二）酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)中相關(guān)問(wèn)題的解決方式

①可在檢測(cè)過(guò)程中改善抗體制作及備份的方式，根據(jù)待檢測(cè)食品的特性，應(yīng)用相關(guān)知識(shí)建立不同結(jié)構(gòu)的評(píng)價(jià)模式，提高克隆抗體的親和性。②在對(duì)多個(gè)結(jié)構(gòu)類(lèi)似食品進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，將合成的抗原針對(duì)同種抗體進(jìn)行檢測(cè)，可以避免工作的重復(fù)性，減少檢測(cè)過(guò)程中的交叉反應(yīng)。

綜上所述，在食品安全檢測(cè)中應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)，可明顯提高檢測(cè)效率，檢測(cè)步驟更加簡(jiǎn)單明了，且檢測(cè)成本較低，檢測(cè)過(guò)程中不會(huì)造成污染，可在食品安全檢測(cè)中推廣應(yīng)用。