趙勝杰，陶龍斐，盛 敏，閆若潛

（1.河南省動物疫病預(yù)防控制中心，河南鄭州 450000；2.新希望六和股份有限公司，北京 100102）

偽狂犬?。╬seudorabies，PR）是由偽狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病[1-2]。PRV 主要通過口鼻、精液、胎盤等方式傳播，可引起仔豬神經(jīng)系統(tǒng)紊亂和高死亡率，育肥豬呼吸障礙和生長緩慢，以及母豬繁殖障礙等[3-5]。采用gE基因缺失疫苗免疫，結(jié)合gE 抗體檢測是目前防控和凈化PR 的重要手段。但免疫并不能清除病毒，豬群一旦感染PRV 便可終生帶毒并不斷排毒[5]。由于PRV 易變異，防控難度大，因此目前豬場野毒感染普遍存在[6]，使PR 防控和凈化面臨較大挑戰(zhàn)。為掌握河南省PRV 流行狀況和規(guī)律，2017—2019年對河南省監(jiān)測網(wǎng)點中的種豬場、商品代豬場、散養(yǎng)戶、屠宰場和無害化處理廠采集樣品進行了PRV 監(jiān)測，以期為河南省PR防控和凈化提供數(shù)據(jù)參考。

1 材料

1.1 樣品

2017—2019年，按照各年度河南省動物疫病監(jiān)測與流行病學(xué)調(diào)查計劃，采用估計流行率抽樣策略，對種豬場、商品代豬場、散養(yǎng)戶和屠宰場，共1 454 場次的44 059 份豬血清樣品進行了PRV gE抗體檢測，各場點樣品數(shù)依次為15 867、25 283、605 和2 304 份；對種豬場、商品代豬場、屠宰場和無害化處理廠，共807 場次的12 824 份豬組織樣品進行了PRV 病原檢測，各場點樣品數(shù)依次為700、2 025、4 645 和5 454 份。不同場點的病原檢測樣品種類不同，其中養(yǎng)殖場為活豬扁桃體樣品，屠宰場為豬胴體扁桃體和淋巴結(jié)混合樣品，無害化處理廠為病死豬脾臟、肺臟、扁桃體和淋巴結(jié)混合樣品。

1.2 主要儀器

酶標儀（型號Multiskan FC），購自Thermo Scientific 公司；全自動酶標洗板機（型號405LSRS），購自Bio Tek 公司；二級生物安全柜（型號AC2-6S1），購自新加坡ESCO 科技有限公司；組織研磨儀（型號MM400），購自德國Retsch 公司；全自動核酸提取儀（型號NP968），購自西安天隆科技有限公司；熒光PCR 儀（型號7500），購自美國ABI 公司。

1.3 主要試劑

PRV gE 抗體檢測試劑盒，購自IDEXX；核酸提取試劑盒，購自蘇州天隆生物科技有限公司；PRV gE、gD 雙重實時熒光PCR 檢測試劑盒，購自洛陽萊普生信息科技有限公司。

2 方法

2.1 抗體檢測

采用gE-ELISA 方法，計算S/N值，按照試劑盒說明書進行檢測和結(jié)果判定。判定標準為：S/N＜0.60 為陽性，S/N＞0.70 為陰性，介于兩者之間為可疑。

2.2 病原檢測

組織樣品經(jīng)研磨處理后，提取核酸進行PCR檢測。核酸提取、PCR 檢測和結(jié)果判定，均按照試劑盒說明書進行。樣本檢測FAM 通道和HEX/VIC通道Ct值均≤40，且擴增曲線均呈典型的S型，判定為PRV 核酸陽性。

2.3 數(shù)據(jù)分析

將檢測數(shù)據(jù)錄入Excel，按不同季節(jié)、區(qū)域和場點類別進行統(tǒng)計分析描述；應(yīng)用SPSS 軟件，對統(tǒng)計結(jié)果進行差異性和相關(guān)性分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 總體情況

2017—2019年，檢出PRV gE抗體陽性場群778個，平均場群抗體陽性率為53.51%（778/1 454），檢出抗體陽性樣品12 286 份，平均個體抗體陽性率為27.89%（12 286/44 059）；檢出PRV 病原陽性場群94個，平均場群病原陽性率為11.65%（94/807），檢出病原陽性樣品317 份，平均個體病原陽性率為2.47%（317/12 824）。

3.2 時間分布

年度統(tǒng)計結(jié)果（表1～2）顯示：2018年P(guān)RV gE 抗體和病原個體陽性率均最高，2017 和2019年的PRV gE 抗體個體陽性率無顯著差異（P＞0.05）；2019年P(guān)RV 病原個體陽性率最低，各年度病原個體陽性率之間均存在差異（P＜0.05）；不同年度的gE 抗體個體陽性率和病原個體陽性率呈正相關(guān)（Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.819）。不同年度的PRV gE 抗體場群陽性率無顯著差異（P＞0.05），但病原場群陽性率存在差異（P＜0.05），其中2018年最高，2019年最低。監(jiān)測場群整體呈現(xiàn)，與2017年相比，2018年P(guān)RV 感染加重，2019年有所控制的趨勢。

表1 2017—2019年河南省PRV gE 抗體檢測情況

表2 2017—2019年河南省PRV 病原檢測情況

季度統(tǒng)計結(jié)果（表3～4）顯示：夏季PRV gE抗體個體陽性率和場群陽性率均最高，春季PRV病原個體陽性率和場群陽性率均最高，而秋季的病原陽性率顯著低于其他季節(jié)（P＜0.05）。不同季節(jié)的gE 抗體和病原個體陽性率之間無顯著相關(guān)性（Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.259）。整體來看，PRV 感染具有一定的季節(jié)性特征，冬春季節(jié)和夏季感染較重（P＜0.05）。

表3 河南省PRV gE 抗體不同季節(jié)檢測情況

表4 河南省PRV 病原不同季節(jié)檢測情況

3.3 空間分布

不同區(qū)域（豫東、豫西、豫南、豫北和豫中）統(tǒng)計結(jié)果（表5～6）顯示：豫東地區(qū)個體陽性率和場群陽性率均顯著低于其他地區(qū)（P＜0.05）。不同區(qū)域gE 抗體和病原個體陽性率呈顯著正相關(guān)性（Pearson 相關(guān)系數(shù)為0.712）。整體來看，河南省PRV 感染呈現(xiàn)一定的區(qū)域分布特點，豫西、豫北和豫中地區(qū)感染率明顯高于豫東和豫南地區(qū)（P＜0.05）。

表5 河南省不同區(qū)域PRV gE 抗體檢測情況

表6 河南省不同區(qū)域PRV 病原檢測情況

3.4 群間分布

不同類別場點統(tǒng)計結(jié)果（表7～8）顯示：屠宰場抗體個體和場群陽性率均最高，商品代豬場次之，種豬場和散養(yǎng)戶較低；無害化處理廠病原個體和場群陽性率均最高，而種豬場未檢出病原學(xué)陽性樣品。整體來看，屠宰場和商品代豬場PRV 感染率明顯高于種豬場和散養(yǎng)戶（P＜0.05）。

表7 河南省不同類別場點PRV gE 抗體檢測情況

表8 河南省不同類別場點PRV 病原檢測情況

4 討論

年度統(tǒng)計結(jié)果表明，2019年河南省PRV 病原陽性率與前兩年相比有所下降，但gE 抗體陽性率仍處于較高水平，說明河南省PR 防控工作有待進一步加強。季度統(tǒng)計結(jié)果表明，河南省豬群PRV流行具有一定的季節(jié)分布特征，冬春季和夏季流行加重，這符合其冬春季節(jié)和產(chǎn)仔旺季多發(fā)的特征，需重視該季節(jié)的防控。區(qū)域統(tǒng)計結(jié)果表明，河南省PRV 流行具有一定的空間分布特征，豫東和豫南區(qū)域PRV 控制效果較好，而其他地區(qū)流行較為嚴重，這可能與不同區(qū)域生豬養(yǎng)殖規(guī)?；健曫B(yǎng)管理模式、防疫水平、環(huán)境中病原污染情況和活豬調(diào)運有關(guān)[1，7]。因此，河南省豬群PR 防控和凈化可實行區(qū)域化管理，不同區(qū)域依據(jù)轄區(qū)內(nèi)疫病流行情況制訂相應(yīng)的防控和凈化措施，同時加強生豬調(diào)運管理，避免從高流行區(qū)域和場群引進生豬。

不同類別場點統(tǒng)計結(jié)果表明，屠宰場和商品代豬場的PRV 感染抗體陽性率顯著高于種豬場和散養(yǎng)戶。屠宰場gE 抗體陽性率高，可能與待宰豬轉(zhuǎn)群、運輸?shù)葢?yīng)激因素有關(guān)[4，8]。商品代豬場陽性率顯著高于種豬場和散養(yǎng)戶，可能與商品代豬場豬群流動性大以及與外界交流相對頻繁有關(guān)[9]。無害化處理廠的病原檢出率顯著高于其他場點，這符合其病死豬聚集地的特征；種豬場未檢出病原陽性樣品，與其生產(chǎn)管理和生物安全防護水平高有關(guān)；散養(yǎng)戶病原檢出率低，可能與其豬群流動性小以及與外界交流少有關(guān)。因此，豬場應(yīng)堅持自繁自養(yǎng)和全進全出的飼養(yǎng)模式，實行封閉飼養(yǎng)，減少和避免各種應(yīng)激因素；結(jié)合生產(chǎn)實際和監(jiān)測結(jié)果選擇合理的免疫程序；提高生物安全水平和規(guī)范消毒措施，從消滅病原、切斷傳播途徑和保護易感動物等各方面降低疫病發(fā)生風險。

5 結(jié)論

監(jiān)測表明：河南省豬群PRV 感染范圍較廣，感染程度較嚴重，防控工作有待進一步加強。河南省PRV 感染呈現(xiàn)一定的流行特征，春夏季節(jié)高發(fā)，商品代場飼養(yǎng)豬群和屠宰豬群感染率較高，豫東和豫南地區(qū)PR 控制效果較好，而其他地區(qū)流行較嚴重。因此，建議河南省分區(qū)域、按場點，分類指導(dǎo)、梯度推進PR 防控與凈化工作。