（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 261061）

免疫是防控動物疫病的重要措施，若免疫措施不到位或方法不準(zhǔn)確，會導(dǎo)致免疫效果不佳或失敗，從而引發(fā)動物疫病，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失[1]。鴨病毒性肝炎（duck virus hepatitis，DVH）是引起雛鴨高致死性的傳染病，一直嚴(yán)重影響鴨養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展。對于DVH，目前尚無有效的治療藥物，免疫接種是最有效的預(yù)防措施之一。目前DVH 免疫有多種途徑，而不同接種途徑對DVH 抗體的影響研究報(bào)道較少。本研究對DVH 弱毒活疫苗3種接種途徑（肌注、飲水、滴口）進(jìn)行試驗(yàn)，對比不同接種途徑對楓葉雛鴨DVH 抗體的影響及保護(hù)率，以期為鴨場免疫途徑的選擇提供參考。

1 材料

1.1 試驗(yàn)動物

非免疫種鴨所產(chǎn)的1 日齡體質(zhì)量均等的健康楓葉雛鴨360 只（試驗(yàn)A 組），規(guī)范免疫種鴨所產(chǎn)的1 日齡體質(zhì)量均等的健康楓葉雛鴨360 只（試驗(yàn)B 組）：均購自山東永惠楓葉種鴨有限公司，按照常規(guī)飼養(yǎng)至5 日齡進(jìn)行試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)試劑

DVH 弱毒活疫苗（CH60 株），由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)；DVH 抗體（DVh-Ab）ELISA檢測試劑盒，由上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)；鴨肝炎病毒AV211 株，購自中國獸藥監(jiān)察所。

2 方法

2.1 試驗(yàn)分組及免疫方案

2.1.1 試驗(yàn)分組 將試驗(yàn)A 組的360 只雛鴨隨機(jī)分為4 組，分別為飲水A 組、滴口A 組、肌注A 組、對照A 組（不免疫），每組90 只；將試驗(yàn)B 組的360 只雛鴨也隨機(jī)分為4 組，分別為飲水B 組、滴口B 組、肌注B 組、母源抗體監(jiān)測組，每組90 只。母源抗體監(jiān)測組，分別在雛鴨1、3、5 日齡時測定母源抗體效價，其他試驗(yàn)組均在5 日齡時進(jìn)行試驗(yàn)。

2.1.2 免疫方案 飲水組：免疫前2 h，給雛鴨停水，使其處于饑渴狀態(tài)，然后按照使用說明書，將DVH 弱毒苗用干凈的井水稀釋，同時混合均勻。每只雛鴨飲用1 mL 的疫苗量，直至飲完。飲用后為避免疫苗在體內(nèi)被稀釋，繼續(xù)停水1～2 h。滴口組：按照說明書，將DVH 弱毒苗稀釋混勻，進(jìn)行滴口免疫，保證每只雛鴨疫苗量為1 mL。肌注組：按照說明書，在雛鴨腿部肌肉注射DVH 弱毒苗1 mL/只。

2.2 抗體水平檢測和攻毒保護(hù)試驗(yàn)

2.2.1 試驗(yàn)A 組 雛鴨免疫后常規(guī)飼喂。各組在免疫后5、10、15 d，分別隨機(jī)各取30 只雛鴨進(jìn)行心臟采血，用ELISA 方法檢測免疫后的抗體效價，計(jì)算平均值，同時注射DVH 病毒0.1 mL/只進(jìn)行攻毒試驗(yàn)。觀察至免疫后20 d，記錄每組雛鴨發(fā)病死亡情況。出現(xiàn)精神沉郁，呈昏睡狀，或者出現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)癥狀，判定感染發(fā)??；出現(xiàn)上述癥狀后死亡，判定為感染死亡[2]。

2.2.2 試驗(yàn)B 組 除母源抗體監(jiān)測組外，其他各組試驗(yàn)方法同A 組對應(yīng)一致。母源抗體監(jiān)測組在1、3、5 日齡時，各抽取30 只雛鴨檢測抗體。

3 結(jié)果與分析

3.1 試驗(yàn)A 組

結(jié)果（表1）顯示：不同免疫途徑對雛鴨抗體效價有影響，對應(yīng)的攻毒保護(hù)率也有所不同，平均抗體效價和攻毒保護(hù)率從高到低依次為肌注組、滴口組、飲水組，免疫15 d 后的攻毒保護(hù)率均到達(dá)93%以上，達(dá)到了理想的保護(hù)效果。而對照組沒有檢測到抗體，效價為0，表明試驗(yàn)結(jié)果成立。

表1 A 組雛鴨抗體水平測定和攻毒試驗(yàn)結(jié)果

3.2 試驗(yàn)B 組

母源抗體監(jiān)測組結(jié)果（表2）顯示，免疫種鴨所產(chǎn)的5 日齡以內(nèi)雛鴨母源抗體水平較高，且隨日齡增長，母源抗體呈下降趨勢，與抗體消長規(guī)律相符合。其他試驗(yàn)組結(jié)果（表3）顯示：經(jīng)不同途徑免疫后，存在母源抗體的雛鴨抗體效價和對應(yīng)的攻毒保護(hù)率都慢慢升高，平均抗體效價和攻毒保護(hù)率從高到低依次為肌注組、滴口組、飲水組，但對應(yīng)的抗體效價和攻毒保護(hù)率均低于試驗(yàn)A 組，表明母源抗體對疫苗免疫抗體產(chǎn)生了一定的干擾。

4 討論

通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)對比發(fā)現(xiàn)，雖然母源抗體對疫苗免疫后抗體的產(chǎn)生有一定的干擾，但疫苗免疫后的抗體水平仍直線升高，說明該疫苗的保護(hù)效果較好，與叢秋實(shí)等[3]的研究結(jié)果一致。無論有無母源抗體干擾，用DVH 弱毒活疫苗（CH60 株）免疫的最佳接種途徑為肌內(nèi)注射，其次是滴口，飲水免疫效果較差，但免疫15 d 后都能達(dá)到良好的攻毒保護(hù)效果。

表2 母源抗體監(jiān)測組雛鴨抗體監(jiān)測結(jié)果

表3 B 組雛鴨抗體水平測定和攻毒試驗(yàn)結(jié)果

DVH 是一種傳播迅速，可造成雛鴨高發(fā)病率和死亡率的病毒病，在自然感染情況下，只有雛鴨會發(fā)病，主要是20 日齡以內(nèi)，尤其3～10 日齡的雛鴨[4]。目前，常通過以下兩種方法[5]預(yù)防DVH：一是免疫種鴨，使雛鴨獲得母源抗體而受保護(hù)；二是直接免疫雛鴨，使雛鴨主動產(chǎn)生抗體。本試驗(yàn)主要對免疫雛鴨的方法進(jìn)行探討，對于哪種方法保護(hù)效果最好，有待下一步研究。由于20 日齡之后，雛鴨對DVH 病毒的易感性會隨之降低[6]，所以本試驗(yàn)只做了免疫后20 d 內(nèi)的研究。

臨床上一般采用注射免疫，有些疫苗可通過滴口和飲水方式免疫。程安春等[7]對飲水、皮下注射、滴鼻和噴霧等多種免疫途徑進(jìn)行了研究。而對肌內(nèi)注射、飲水、滴口3種免疫途徑效果是否有差異少有報(bào)道。本試驗(yàn)對比3種接種途徑對楓葉雛鴨DVH 抗體的影響及保護(hù)率差異，為鴨場免疫途徑選擇提供了依據(jù)。Hanson[8]用致弱的DVH 疫苗肌內(nèi)注射接種，發(fā)現(xiàn)免疫效果較好。Hwang[9]用DVH 弱毒肌內(nèi)注射雛麻鴨，3 d 后即產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，而口服免疫6 d 后才可產(chǎn)生免疫保護(hù)，與本試驗(yàn)結(jié)果基本一致。

有研究[10]表明，種鴨嚴(yán)格按免疫程序免疫后所產(chǎn)的健康雛鴨，其母源抗體能保護(hù)雛鴨預(yù)防DVH 病毒的早期感染。體內(nèi)存在母源抗體的雛鴨，經(jīng)DVH 弱毒疫苗免疫后，免疫效果確實(shí)受影響，且母源抗體量越高，產(chǎn)生的疫苗免疫抗體水平就越低，但隨著母源抗體的減少，免疫抗體水平逐漸增強(qiáng)，這與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

因此鴨場在制定種鴨或雛鴨免疫程序前，必須根據(jù)本場使用疫苗的種類和養(yǎng)殖場實(shí)際情況，選擇最有效、最合適的免疫途徑，同時還應(yīng)注意疫苗免疫后產(chǎn)生有效抗體時間，以及雛鴨體內(nèi)的母源抗體情況[11]，避免與疫苗相互干擾。另外，如果雛鴨孵出后感染了DVH 病毒，那么即使采取了免疫措施，免疫效果也會受到影響，因此除了加強(qiáng)免疫接種外，還應(yīng)嚴(yán)格控制鴨苗的引進(jìn)[12]，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，完善衛(wèi)生消毒制度[13]。

5 結(jié)論

研究表明：不同接種途徑對楓葉鴨DVH 抗體產(chǎn)生確實(shí)有影響，肌內(nèi)注射免疫效果最佳，其次是滴口，飲水效果相對偏低，但免疫15 d 后都能產(chǎn)生良好的保護(hù)效果，因此各場需根據(jù)使用的疫苗種類和實(shí)際情況，選擇最合適、最有效的免疫途徑；母源抗體可干擾疫苗的免疫效果，因此疫苗免疫時需做好母源抗體監(jiān)測，以選擇最佳免疫時間。