周杰，楊小理，李嬌麗，文婭，張迅

（1.遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 檢驗(yàn)科，貴州 遵義 563000；2.遵義醫(yī)科大學(xué) 醫(yī)學(xué)與科技學(xué)院，貴州 遵義 563000）

0 引言

白血病是造血組織惡性增生或淋巴結(jié)組織單克隆性增生并累及血液和（或）骨髓為主的高度異質(zhì)性腫瘤，主要表現(xiàn)為貧血、出血、發(fā)熱及髓外浸潤。白血病由于發(fā)現(xiàn)晚，進(jìn)展快，近年在腫瘤排行中呈現(xiàn)逐漸上升。其中急性早幼粒細(xì)胞白血病，進(jìn)展快，出血傾向較明顯，目前臨床治療主要是全反式維甲酸誘導(dǎo)成熟分化，三氧化二砷殺滅，臨床治愈率較高[1-2]。針對(duì)急性早幼粒細(xì)胞白血病最有效方式就是盡早發(fā)現(xiàn)，盡早治療，才能夠提升患者生存率。隨著全自動(dòng)五分類血液分析儀的普及檢測血常規(guī)項(xiàng)目的白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖廣泛運(yùn)用，使白血病篩查廣泛開展，通過，對(duì)于急性早幼粒細(xì)胞白血病診療具有重要的臨床意義。本研究通過分析骨髓形態(tài)學(xué)及免疫分型確診的急性早幼粒細(xì)胞白血病患者血常規(guī)提供的白細(xì)胞散點(diǎn)信息圖，尋找這些散點(diǎn)圖的特點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 一般資料。收集我院2017 年10 月至2019 年8 月以來47 例通過骨髓形態(tài)學(xué)及免疫分型確診的急性早幼粒細(xì)胞白血病患者，其中男27 人，女20 人；年齡6-75 歲，平均（38.48±18.9）歲，符合急性早幼粒細(xì)胞白血病的發(fā)病特點(diǎn)。依據(jù)白細(xì)胞計(jì)數(shù)進(jìn)行分類分析，將白細(xì)胞計(jì)數(shù)小于4.0×109/L 分為共計(jì)25 人，將白細(xì)胞計(jì)數(shù)介于4-10×109/L 分共計(jì)7 人，將白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10.0×109/L 分15 人。

1.2 儀器與試劑。SysmexXN9000 系列全自動(dòng)血液分析儀和原廠配裝配套（簡稱XN9000）由希森美康公司提供；奧林巴斯CX41 顯微鏡；瑞氏-姬姆薩染色液依據(jù)《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4 版）的要求進(jìn)行配制；EDTA-K2 真空抗凝管。

1.3 血常規(guī)檢測。采集上述確證患者未經(jīng)過化療后的肘靜脈血2 mL，應(yīng)用sysmex 的XN9000 血細(xì)胞分析儀進(jìn)行血液分析，半小時(shí)內(nèi)完成檢測。利用射頻、電阻抗和細(xì)胞化學(xué)染色法原理進(jìn)行白細(xì)胞計(jì)數(shù)及分類，通過Lysercell WDF 中的表面活性劑溶解血小板和紅細(xì)胞，再次通過Lysercell WDF 的熒光染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，對(duì)核酸級(jí)細(xì)胞器染色。通過白細(xì)胞的熒光強(qiáng)度差異及軟件算法形成白細(xì)胞散點(diǎn)圖。對(duì)外周血涂片染色鏡檢，以找到異常早幼粒細(xì)胞后進(jìn)行白細(xì)胞WDF 通道散點(diǎn)圖進(jìn)行分析。

2 散點(diǎn)圖分析

2.1 XN9000 正常白細(xì)胞WDF 通道血細(xì)胞散點(diǎn)圖特征如圖1。橫坐標(biāo)是側(cè)向散射光SCC 反映細(xì)胞內(nèi)顆粒物質(zhì)的大小和多少，縱坐標(biāo)是側(cè)向熒光SFL，反映細(xì)胞內(nèi)核酸含量的多少。依據(jù)細(xì)胞核的大小及細(xì)胞內(nèi)顆粒程度展示的為正常外周血五分類白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖如圖1。注：圖1 中紫色區(qū)域代表淋巴細(xì)胞，依次出現(xiàn)的綠色代表單核細(xì)胞群，淡藍(lán)色代表中性粒細(xì)胞，紅色代表嗜酸性粒細(xì)胞。

圖1 XN9000 正常白細(xì)胞WDF 通道白細(xì)胞散點(diǎn)圖

2.2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10.0×109/L 白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖。本群的白細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯增加，白細(xì)胞計(jì)數(shù)介于（53.57±45.20）109/L，儀器分類出現(xiàn)大量單核細(xì)胞，粒細(xì)胞區(qū)域和單核細(xì)胞區(qū)域出現(xiàn)大量異常分布均勻的灰色散點(diǎn)，呈橢圓形（如圖2中的圈中部分所指），粒細(xì)胞區(qū)域明顯上移，至中部最為密集，淋巴細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞所在區(qū)域未出現(xiàn)明顯異常。

圖2 白細(xì)胞計(jì)數(shù)大于10.0×109/L 白細(xì)胞散點(diǎn)圖

2.3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)介于4-10×109/L白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖如圖3，本群白細(xì)胞平均為（6.41±1.67）109/L。在幼稚粒細(xì)胞區(qū)域大量出現(xiàn)灰色散點(diǎn)，大量聚集于成熟中性粒細(xì)胞上方，幼稚粒細(xì)胞區(qū)域散點(diǎn)大量聚集，呈灰色散點(diǎn)，部分與單核細(xì)胞區(qū)域有融合（如圖3 中的圈中部分所指）。淋巴細(xì)胞區(qū)域分界明顯。

圖3 白細(xì)胞計(jì)數(shù)介于4-10×109/L 白細(xì)胞散點(diǎn)圖

2.4 白細(xì)胞計(jì)數(shù)小于4.0×109/L 白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖如圖4。本群白細(xì)胞平均計(jì)數(shù)（1.59±1.05）109/L。該群的特點(diǎn)是白細(xì)胞計(jì)數(shù)較少，粒細(xì)胞區(qū)域明顯上移，幼稚粒細(xì)胞區(qū)域出現(xiàn)大量雜亂的散點(diǎn)，部分可見與單核細(xì)胞區(qū)域模糊融合（如圖4 中的圈中部分所指）。成熟粒細(xì)胞區(qū)域可見散在的散點(diǎn)。淋巴細(xì)胞區(qū)域分界明顯。

圖4 白細(xì)胞計(jì)數(shù)小于4.0×109/L 白細(xì)胞散點(diǎn)圖

3 討論

五分類血液分析儀采用WDF 通道對(duì)白細(xì)胞進(jìn)行分類，主要是通過大分子有機(jī)酸的特殊溶血?jiǎng)┖途鄞渭谆鶡晒馊玖细鶕?jù)細(xì)胞內(nèi)容物復(fù)雜程度、酸堿特性和核酸熒光強(qiáng)度的差異性分類。通過流式細(xì)胞術(shù)及半導(dǎo)體激光照射將反映細(xì)胞內(nèi)顆粒物質(zhì)的大小和多少的側(cè)向散射光SCC 投射于橫坐標(biāo)，將反映細(xì)胞內(nèi)核酸含量的側(cè)向熒光SFL 投射于縱坐標(biāo)，從而將不同種類的白細(xì)胞細(xì)胞生物特性轉(zhuǎn)化為光學(xué)信號(hào)和電信號(hào)。儀器的數(shù)據(jù)處理軟件將散射光信號(hào)和熒光信號(hào)綜合處理可區(qū)分出淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞嗜堿性粒細(xì)胞，對(duì)幼稚細(xì)胞，幼稚粒細(xì)胞及異常淋巴細(xì)胞等具有很好的提示作用[3-4]。分析外周血白細(xì)胞WDF 通道的散點(diǎn)圖，結(jié)合外周血涂片染色鏡檢對(duì)初篩診急性早幼粒細(xì)胞白血病的具有重要意義[4]。

通過分析本次收集的初診為急性早幼粒細(xì)胞白血病外周血的WDF 散點(diǎn)圖，發(fā)現(xiàn)在粒細(xì)胞散點(diǎn)圖明顯有大量散在的散點(diǎn)出現(xiàn)，具體體現(xiàn)在幼稚粒細(xì)胞區(qū)域大量出現(xiàn)灰色散點(diǎn)，大量聚集于成熟中性粒細(xì)胞上方，幼稚粒細(xì)胞區(qū)域散點(diǎn)大量聚集，呈灰色散點(diǎn)，部分與單核細(xì)胞區(qū)域有融合。

綜上所述，全自動(dòng)血液分析儀中白細(xì)胞WDF 通道散點(diǎn)圖對(duì)白血病的初篩具有一定的價(jià)值。通過觀察儀器對(duì)白細(xì)胞WDF 散點(diǎn)圖的差異性結(jié)合涂片鏡檢對(duì)檢出白血病初診患者并輔助判斷白血病類型的重要意義[5-9]。檢驗(yàn)人員通過對(duì)散點(diǎn)圖分布特征配合必要的手工鏡檢，避免急性早幼粒細(xì)胞白血病患者病理標(biāo)本的漏檢，為臨床診療工作提供準(zhǔn)確可靠的檢測依據(jù)。通過散點(diǎn)圖的初篩過程后進(jìn)行鏡檢復(fù)查，對(duì)于確診急性早幼粒細(xì)胞白血病具有重要意義。