楊榮紅

(重慶市雙橋經(jīng)開區(qū)人民醫(yī)院，重慶 400900)

樁核冠修復(fù)術(shù)是修復(fù)大面積牙體缺損的一種常用的修復(fù)方法。牙根面齲是該修復(fù)術(shù)后的主要并發(fā)癥之一，發(fā)生率為3%～16%[1]。研究報(bào)道，引起公認(rèn)齲病的細(xì)菌種類很多，變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌3種細(xì)菌為老年人牙根面主要的致齲菌[2]。本研究觀察了老年患者下頜第二磨牙樁核冠修復(fù)術(shù)前后的變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的形態(tài)變化和數(shù)量變化，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2018年3月至2018年12月收治的上頜第二磨牙無咬合功能的患者40例，患者均了解并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥65歲；(2)全口牙齒數(shù)量≥23顆，且無明顯炎癥；(3)除下頜第二磨牙其他牙齒功能均無異常；(4)根管治療可保存牙齒；(5)患者依從性良好，能夠堅(jiān)持維護(hù)口腔衛(wèi)生；(6)受試前兩周以及之后未用抗菌類藥物，采樣前1 h內(nèi)未進(jìn)食的患者可作為受試者。患者男22例， 女18例，年齡65～78歲，平均(73.2±4.1)歲。將需要樁核冠修復(fù)的40名患者的第二磨牙一側(cè)作為受試組A組，其對側(cè)健康第二磨牙作為對照組B組。

1.2材料 黏性放線菌5519(1+2-)和內(nèi)氏放線菌ATCC19246。Tap DNA聚合酶、25mmol/L MgCl2溶液，特異性引物，10%十二烷基硫酸鈉溶液、1 mol/L Tris溶液、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(pH 8.0)溶液、STE緩沖液(pH 8.0)、聚合酶鏈反應(yīng)緩沖液、3 mol/L NaAc(pH 5.2)，電泳級瓊脂糖[3]。

1.3方法 患者進(jìn)行牙周基礎(chǔ)治療，鈦樁+3M樹脂修復(fù)之前要進(jìn)行牙根管治療，使其咬合功能恢復(fù)。清水漱口，收集所有受試者下頜第二磨牙齦溝內(nèi)的菌斑。分別在預(yù)備后3、7 d、樁核冠修復(fù)后1個(gè)月進(jìn)行取樣，并在1 h內(nèi)將樣本送至實(shí)驗(yàn)室。使用漩渦振蕩器1 min，使標(biāo)本采集管于其中并分散，用PBS緩沖液講樣本菌斑稀釋至10-2、10-3。在放線菌選擇性培養(yǎng)基和輕唾-桿菌肽瓊脂上接種10-2、10-3稀釋液50 μL，對其進(jìn)行編號、均勻的劃線。37 ℃ 厭氧環(huán)境下培養(yǎng)2 d。對變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌進(jìn)行生化鑒定，對菌落進(jìn)行革蘭染色鑒定以及形態(tài)學(xué)檢查[4]。選用菌落形成單位(CFU/mL)的形式，對變異的鏈球菌、黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌進(jìn)行分離鑒定，菌落數(shù)30～300個(gè)平板為準(zhǔn)，進(jìn)行數(shù)量分析。黏性放線菌上游引物序列是5’-CCTTCTTCTGGATAACCGCA-3’，下游引物序列是5’-CTACCCGTCACCGCCTT-3’，擴(kuò)增長度為157 bp；內(nèi)氏放線菌上游引物序列是5’-CCTTCTTCTGGATAACCGCA-3’，下游引物序列是5’-CTACCCGTCACCGCCTT-3’，擴(kuò)增長度為172 bp；PCR技術(shù)可鑒定黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌[5]。

2 結(jié) 果

2.1形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果 黏性放線菌：CFAT平板上呈現(xiàn)直徑為0.5 mm的黏性菌落，表面光滑，邊緣整齊，乳白色，質(zhì)硬；革蘭染色陽性，光鏡下為桿狀菌，形態(tài)不規(guī)則，常見短分支體。內(nèi)氏放線菌：CFAT平板上呈現(xiàn)為淡黃色或白色菌落，邊緣整齊，表面光滑，中心不平略隆起；光鏡下為分支桿菌，形態(tài)不規(guī)則。變異鏈球菌：變異鏈球菌在MSBA平板上呈現(xiàn)輕微透明菌落，中心不平略隆起，表面光滑；革蘭染色陽性，光鏡下為球菌，鏈狀排列。

2.2黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌檢出率和菌落計(jì)數(shù) 兩組黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌檢出率在不同時(shí)間點(diǎn)均無顯著差異(P>0.05)；與預(yù)備前相比，A組預(yù)備后3 d黏性放線菌、變異鏈球菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)。與預(yù)備后3 d相比，A組預(yù)備后7 d內(nèi)氏放線菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)；與預(yù)備后7 d相比，A組修復(fù)后1個(gè)月黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌、變異鏈球菌菌落數(shù)顯著降低(P<0.05)。與預(yù)備前3 d相比，B組預(yù)備后7 d黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌菌落數(shù)顯著增加(P<0.05)。見表1。

表1 黏性放線菌在不同時(shí)期的檢出率和菌落計(jì)數(shù) (n=40)

注：與組內(nèi)前一個(gè)時(shí)間點(diǎn)相比，*P<0.05。

3 討 論

老年人口腔內(nèi)常駐致齲菌主要包括變異鏈球菌、乳桿菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌，而隨著年齡的增長，老年人根面齲的發(fā)生率也逐漸升高。研究發(fā)現(xiàn)，根齲的發(fā)生主要與菌斑微生物產(chǎn)生的短鏈羧酸相關(guān)，上述物質(zhì)可導(dǎo)致牙齒根面礦物質(zhì)溶解，而根面牙骨質(zhì)和牙本質(zhì)的特殊結(jié)構(gòu)則進(jìn)一步加快這一過程[6]。謝思靜[7]等發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者牙菌斑中變異鏈球菌以及放線菌的比例與正常對照組相比明顯升高。本研究中，無論是受試組還是對照組，預(yù)備前、預(yù)備后3 d、預(yù)備后7 d及樁核冠修復(fù)后1個(gè)月牙齦溝菌斑中變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的檢出率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，表明上述菌群為口腔內(nèi)的常駐菌群，與謝思靜報(bào)道一致。樁核冠修復(fù)失敗的重要原因之一即為修復(fù)后繼發(fā)齲病。劉新慶[8]觀察了樁核冠修復(fù)的常見并發(fā)癥，其中固定修復(fù)后繼發(fā)齲病的患病率可達(dá)2%～18%。樁核冠修復(fù)繼發(fā)齲病的主要危險(xiǎn)因素包括不易清潔、邊緣形態(tài)特殊、食物殘?jiān)鼫舻纫蛩?，而修?fù)材料、冠邊緣適應(yīng)性、咬合功能也為菌斑影響因素[9]。

本研究發(fā)現(xiàn)，受試組變異鏈球菌菌落數(shù)在預(yù)備后3 d顯著在增加。可能是基牙預(yù)備導(dǎo)致牙跟面菌斑重新形成，基牙預(yù)備時(shí)需要使用水汽沖洗，而水汽沖洗則會(huì)引起牙面原有生物膜的破壞，重新暴露出牙本質(zhì)，并吸附唾液蛋白和糖蛋白重新形成生物膜[10]；新的生物膜形成后4～72 h大量球菌即可聚集于新形成的生物膜表面形成新的牙菌斑，因此，變異鏈球菌的菌量顯著升高。牙齒預(yù)備過程中會(huì)發(fā)生牙周組織損傷從而導(dǎo)致齦溝液的增加，引起致齲菌的進(jìn)一步增加。而老年人免疫能力較低更有利于致齲菌的生長[11]。修復(fù)后1個(gè)月，變異鏈球菌數(shù)目顯著減少，與預(yù)備前數(shù)量一致。主要是由于修復(fù)過程恢復(fù)了牙冠鄰接關(guān)系和外展隙，從而減少了食物對牙齦刺激。另外，牙冠鄰接關(guān)系和外展隙恢復(fù)后，變異鏈球菌的生長受限，從而菌量減少。黏性放線菌和內(nèi)氏放線菌均屬于放線菌屬[12]。本研究中，黏性放線菌菌量在預(yù)備后3 d顯著增加，在修復(fù)后1個(gè)月顯著降低，但仍高于預(yù)備前水平；內(nèi)氏放線菌菌量在預(yù)備后7 d顯著增加，修復(fù)后1個(gè)月顯著降低；與呂巖[13]研究結(jié)果一致。王岷峰[14]報(bào)道，戴冠后微生態(tài)環(huán)境的改變可以抑制放線菌的生長。

綜上，變異鏈球菌、黏性放線菌、內(nèi)氏放線菌的數(shù)量在預(yù)備后7 d有所增加，修復(fù)后1個(gè)月有所降低。在牙體預(yù)備后初期進(jìn)行積極的菌斑控制，值得臨床推廣。