岳永亮，顧 霞，朱文欣

脂肪組織因其細胞內(nèi)的油脂成分不利于其脫水、透明及浸蠟,最終導致由于缺少石蠟的支撐作用使脂肪組織切片不完整，呈碎渣樣，有大空洞；有些切片無法漂片，表現(xiàn)為入水后蠟片即炸開，無法得到組織切片。有醫(yī)院通過針對脂肪組織設置特殊的脫水程序、延長固定時間或改善取材方法等[1-2]，對提高脂肪組織制片質(zhì)量起良好的效果。我院病理科采用加熱丙酮、按壓脫脂法處理脂肪組織不僅使脂肪組織標本制片良好，而且不需要設置特殊的脫水程序，現(xiàn)介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料臨床送檢的乳腺、脂肪瘤、大網(wǎng)膜、腸旁脂肪、清掃淋巴脂肪等富含脂肪的標本，櫻花Tissue VIP 6 AI全自動脫水機，Thermo HM340E輪轉(zhuǎn)式切片機，丙酮、10%中性福爾馬林、常規(guī)脫水試劑，DAKO染封一體機等。

1.2 方法乳腺、脂肪瘤標本按常規(guī)取材法各取100塊，均隨機分成2組，實驗組、對照組各50塊；大網(wǎng)膜、腸旁脂肪、清掃淋巴脂肪組織標本按常規(guī)取材法共取100塊，隨機分成2組，實驗組、對照組各50塊。實驗組標本放入丙酮中，在65 ℃烤箱加熱30 min后取出用紗布按壓擠出油脂(圖1)，然后經(jīng)全自動脫水機常規(guī)脫水；對照組直接放入全自動脫水機常規(guī)脫水。脫水具體流程：10%中性福爾馬林固定2 h；70%乙醇90 min；80%乙醇 60 min；90%乙醇2道，分別為50、40 min；無水乙醇2道分別為35、30 min；透明劑3道分別70、60、50 min；石蠟4道分別為50、50、40、40 min。將處理過的組織塊進行石蠟包埋，運用輪轉(zhuǎn)式切片機切片，切片厚度3 μm，漂片溫度45 ℃，自動染色機HE染色。

1.3 統(tǒng)計學分析應用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，采用χ2檢驗各組數(shù)據(jù)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

本組制片不合格：肉眼可見切片有空洞，展片時易破碎，鏡下見脂肪組織形態(tài)不完整，有空洞或有擠壓和皺縮現(xiàn)象(圖2)。本組制片合格：蠟片完整，展片時無破碎，鏡下見脂肪組織形態(tài)完整，無空洞、擠壓和皺縮，脂肪細胞結(jié)構(gòu)清楚，HE染色清晰(圖3)。本實驗結(jié)果顯示：乳腺組織實驗組合格率96%，對照組合格率28%(χ2=49.066，P<0.001)；脂肪瘤實驗組合格率100%，對照組合格率4%(χ2=92.308，P<0.001)；大網(wǎng)膜、腸旁脂肪、清掃淋巴脂肪組織等實驗組合格率100%，對照組合格率56%(χ2=28.205，P<0.001，表1)。

圖1 脂肪組織加熱丙酮浸泡后用紗布按壓擠出油脂 圖2 不合格切片:HE染色鏡下觀察有空洞、折疊、切片不完整 圖3 合格切片:HE染色鏡下觀察切片完整、脂肪細胞結(jié)構(gòu)清晰

表1 脂肪組織制片合格情況

3 討論

本實驗采用加熱法使丙酮快速滲透入脂肪細胞，溶解脂肪細胞內(nèi)的油脂，通過按壓法使溶解于丙酮的油脂擠出細胞，從而達到快速脫脂目的。本實驗結(jié)果表明脂肪組織制片完整，組織無擠壓及皺縮，結(jié)構(gòu)清晰。各種類型的脂肪組織切片合格率與對照組相比均大大提高，差異有統(tǒng)計學意義；另外本組采用方法步驟較簡單易操作，且脂肪組織脫脂后與常規(guī)組織進行相同的脫水、切片、HE 染色等處理流程，保證脂肪組織能夠與其它常規(guī)組織同時完成制片。

部分大網(wǎng)膜、腹腔盆腔清掃淋巴脂肪組織等不經(jīng)過脫脂處理也能達到滿意的切片效果，主要原因可能是這些組織較疏松，試劑易滲透。一方面乙醇具有一定的脫脂功能，在組織脫水的同時也進行了脫脂，有利于后續(xù)的透明及浸蠟；另一方面由于組織疏松易于石蠟的浸透，從而達到較好的浸蠟效果。部分乳腺組織不經(jīng)脫脂處理也能合格制片，可能與該組織塊內(nèi)脂肪含量較低有關[1]，然而大部分乳腺組織及脂肪瘤不經(jīng)脫脂處理則大多易出現(xiàn)切片空洞、破碎、漂片時散片等，不能完整制片。可能與乳腺組織及脂肪瘤組織較致密試劑不易滲透及脂肪組織的結(jié)構(gòu)特點有關。脂肪細胞聚集在一起且薄層疏松結(jié)締組織將聚集在一起的脂肪細胞分隔成許多不同的小葉，使脂肪組織中含有豐富的網(wǎng)狀纖維[3]，這些特殊結(jié)構(gòu)會造成組織塊固定、脫水不良[4]，從而最終影響組織浸蠟，細胞內(nèi)石蠟量不足以支撐組織形態(tài)，最終會導致組織切片空洞、破碎、不完全。

在臨床工作中，除了考慮制片質(zhì)量外還需考慮完成時間，制片質(zhì)量差直接影響醫(yī)師診斷的準確性，甚至造成誤診。制片完成慢則影響病理醫(yī)師最終發(fā)出報告的時間，從而延誤臨床醫(yī)師的診治。本實驗中采用脫脂法，不僅保證制片質(zhì)量，而且保障制片完成時間，具有臨床推廣價值。